吴华俊
- 作品数：23 被引量：43H指数：4
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 松墨天牛磷酸丙糖异构酶基因的克隆及表达分析
- 松墨天牛，Monochamus alternatusHope(Coleoptera:Cerambycidae），是我国的重要林业害虫，主要危害马尾松（Pinus massoniana）等松属植物，也是传播毁灭性病害松材线...
- 吴华俊
- 关键词：松墨天牛磷酸丙糖异构酶基因克隆农药胁迫林业害虫
- 松墨天牛肌球蛋白轻链2基因的鉴定及表达模式被引量：2
- 2015年
- 为阐明松墨天牛肌肉收缩机理和相关基因表达模式,用构建c DNA文库方法,从松墨天牛c DNA中克隆到松墨天牛肌球蛋白轻链2基因,命名为Ma MLC-2（Gen Bank：KM371003）。该基因c DNA为882 bp,其中开放阅读框（ORF）为618 bp,编码205个氨基酸,推测的蛋白等电点为4.66,分子量为22.26 k Da。Ma MLC-2的氨基酸序列与赤拟谷盗同源性最高,为96%,与东方蝼蛄等8种昆虫同源性为85%-88%。松墨天牛与赤拟谷盗处在系统发育树的同一分支上。Ma MLC-2属于亲水性氨基酸,存在2个EF-hand结构域,长度均为29个氨基酸,其中第1个EF-hand结构域含有Ca2＋结合位点。SWISS-MODEL预测结果显示,Ma MLC-2有2个螺旋-环-螺旋结构。用RT-q PCR分析了Ma MLC-2基因的相对表达量,结果显示：蛹和幼虫的表达量高于成虫;成虫中足表达量最高,腹部表达量最低,各部位均有表达,且有显著差异（P〈0.05）。
- 吴华俊蔡紫玲罗淋淋林同
- 关键词：松墨天牛基因表达模式PCR
- 松墨天牛ATP合成酶D亚基基因的鉴定与表达被引量：4
- 2015年
- 【目的】研究松墨天牛ATP合成酶D亚基基因的鉴定及其表达特性,为开展昆虫ATP合成酶基因研究提供分子信息和参考,为深入研究ATP合成酶基因在松墨天牛中的生理、毒理作用奠定基础。【方法】对从松墨天牛c DNA文库中克隆的一条表达序列标签(EST)进行3'c DNA末端快速扩增,将获得的扩增序列与c DNA文库中的序列进行拼接,经开放阅读框(ORF)检索和Blast同源比对鉴定基因;用Prot Param tool软件分析基因编码的蛋白质性质,用DNAMAN软件构建系统发育树,用实时荧光定量PCR分析基因在不同虫态、成虫各部位和幼虫组织中的表达特性。【结果】获得了1条长度为1 133 bp的c DNA,其5'端非编码区长89 bp,3'端非编码区长294 bp,ORF长750 bp,编码ATP合成酶D亚基,命名为MaATPSE(Gen Bank登录号:KM101044)。MaATPSE编码249个氨基酸残基,预测分子质量为28.21 k Da,等电点为9.40,稳定系数为31.13。MaATPSE含有3个丝氨酸磷酸化位点、4个苏氨酸磷酸化位点、2个酪氨酸磷酸化位点和1个糖基化位点。松墨天牛与黑腹果蝇和家蚕的MaATPSE相似性均为83%;松墨天牛与赤拟谷盗在系统发育树上聚成一支,相似性为87%,与其他非鞘翅目昆虫的遗传距离较远。MaATPSE在蛹和幼虫的相对表达量分别是成虫的3.70和2.65倍,各虫态之间表达有显著差异(P<0.05);MaATPSE在幼虫各组织中均有表达,在脂肪体中的表达量最高,为对照的5.94倍,其次是体壁和血淋巴,分别为对照的3.93和2.88倍;中肠和马氏管的表达量较低,分别为对照的0.24和0.28倍;除马氏管和中肠的相对表达量无显著差异外,各组织均有显著差异(P<0.05)。MaATPSE在成虫头、腹、触角、足和翅的相对表达量分别为对照的2.24,3.09,3.52,3.39和4.45倍,胸部的表达量较低,为对照的0.68倍;成虫各部位之间相对表达量有显著差异(P<0.05)。【结论】克隆到松墨天牛ATP合成酶D亚基基因MaATPSE,包括5'和3'非编�
- 罗淋淋吴华俊林同
- 关键词：松墨天牛ATP合成酶基因表达RT-QPCRRACE
- 松墨天牛VPS4基因序列及其制备方法和用途
- 本发明公布了松墨天牛VPS4基因序列及其制备方法和用途，旨在提供松墨天牛VPS4基因序列，可以为研究松墨天牛细胞调控机理提供基础，为人类重大疾病的预防治疗提供新思路。该基因的核苷酸序列如SEQ？ID？NO：1所示；该基因...
- 林同吴华俊蔡紫玲罗淋淋
- 文献传递
- 基因芯片技术在昆虫抗药性研究中的应用
- 2015年
- 化学杀虫剂滥用导致昆虫抗药性问题日渐突出,研究昆虫抗药性是为了更有效地防治害虫。基因芯片为害虫抗药性研究提供了理想的平台。综述了基因芯片技术在昆虫抗药性研究中的应用进展,重点总结了细胞色素P450氧化酶、酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶等解毒酶基因和乙酰胆碱酯酶等靶标酶基因的表达情况,为在分子水平上研究昆虫抗药性提供了依据,为从基因组学水平深入、全面开展昆虫与农药的互作研究奠定了基础。
- 吴华俊罗淋淋林同
- 关键词：基因芯片昆虫抗药性
- 松墨天牛表皮蛋白基因的克隆及表达分析被引量：9
- 2014年
- 【目的】本研究旨在探索松墨天牛Monochamus ahernatus Hope中昆虫表皮蛋白（ICP）基因在幼虫各组织中和不同发育阶段的时空表达模式。【方法】用cDNA末端快速扩增方法（rapid amplification of cDNAends，RACE）克隆了松墨天牛表皮蛋白基因，用实时荧光定量PCR分析了该基因在幼虫体内和不同虫态中的表达。【结果】克隆获得的松墨天牛幼虫表皮蛋白基命名为MoallCP（GenBank登录号：AGX00998．1），开放阅读框长408bp，编码135个氨基酸，推测得到的蛋白的分子量为14．51kDa。由MoallCP推导的蛋白与桑天牛Apriona germariICP（AAM66718．1）氨基酸序列一致性为79％；与丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennisICP（NP-001161297．1）、果蝇Drosophila mojavensisICP（XP_002005461．1）、玉带凤蝶Papilio polytesICP（BAMl8876．1）等19种昆虫表皮蛋白的氨基酸序列一致性在35％～45％之间；在第10—26位氨基酸位处含有一个跨膜片段。MoallCP在幼虫头、体壁、脂肪体、血细胞、中肠和马氏管均有表达；在蛹和成虫中的表达量分别是在幼虫中的44％和161％。【结论】MoallCP与其他昆虫有较高的氨基酸序列一致性。MoallCP在松墨天牛幼虫内广泛表达；在各个发育阶段中，以成虫中的表达量最高。本文为进一步研究松墨天牛表皮蛋白基因的生理功能和松墨天牛的表皮化学奠定基础。
- 许雯罗淋淋吴华俊韦春梅林同
- 关键词：松墨天牛表皮蛋白基因克隆荧光定量PCRRACE
- 松墨天牛磷酸丙糖异构酶基因全长序列及其克隆方法
- 松墨天牛磷酸丙糖异构酶基因全长序列及其克隆方法，涉及生物基因工程领域。所述克隆方法：用松墨天牛成虫提取总RNA，采取RACE扩增获得基因3′端序列，与构建的cDNA文库松墨天牛磷酸丙糖异构酶5′端序列进行拼接获得基因全长...
- 吴华俊林同蔡紫玲罗淋淋
- 文献传递
- 松墨天牛核受体共激活因子7基因全长序列及其克隆方法
- 松墨天牛核受体共激活因子7基因全长序列及其克隆方法，涉及生物基因工程领域。所述克隆方法：提取松墨天牛成虫总RNA，采取RACE扩增获得基因3′端序列，与构建的cDNA文库松墨天牛核受体共激活因子7基因5′端序列拼接获得基...
- 林同刘琪司陈敬祥吴华俊蔡紫玲程杰黄卫东
- 文献传递
- 松墨天牛肌钙蛋白T基因全长cDNA克隆及分析被引量：2
- 2015年
- 采用c DNA末端快速扩增(RACE)方法获得了松墨天牛(Monochamus alternatus)肌钙蛋白T基因c DNA,全长1531bp,命名为Ma Tn T(Gen Bank:KJ756400).该基因开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,等电点为9.26,推测的编码蛋白质分子质量为37.29 ku.同源比对结果表明:Ma Tn T与褐飞虱(Nilaparvata lugens)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)等12种昆虫肌钙蛋白氨基酸同源性为87%-88%;构建的系统发育树显示Ma Tn T处于独立分支;Ma Tn T没有信号肽和跨膜螺旋,属于亲水性氨基酸,二级结构包含了螺旋和不规则卷曲两种形式,含有丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)磷酸化位点数分别为8、9、3个.RT-q PCR检测表明,Ma Tn T基因在幼虫、蛹和成虫中均有表达;在成虫触角和足中表达量最高.
- 吴华俊许雯林同
- 关键词：松墨天牛肌钙蛋白基因克隆PCR
- 松墨天牛寡糖基转移酶亚基STT3B基因克隆及应用
- 松墨天牛寡糖基转移酶亚基STT3B的克隆及应用属分子生物学领域，本发明提供的一种松墨天牛寡糖基转移酶亚基STT3B的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；一种松墨天牛寡糖基转移酶亚基STT3B基因编码的氨基酸序列如SE...
- 蔡紫玲林同吴华俊刘琪司陈敬祥
- 文献传递
