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员丽娟: 作品数：17 被引量：44H指数：4; 供职机构：新疆出入境检验检疫局更多>>; 发文基金：国家质检总局科技计划项目新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>; 相关领域：农业科学理学生物学医药卫生更多>>

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牛精液中IBRV荧光PCR检测方法的建立及精液带毒与血清抗体的关系被引量：1: 2010年; 【目的】建立牛精液中牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）的荧光PCR检测方法,并分析精液带毒与血清抗体的关系,为牛精液中IBRV的荧光PCR诊断和判定提供技术依据。【方法】采用Sephycral S-400凝胶过滤法和蛋白酶K预消化法,分别对新鲜牛精液和冻存牛精液进行处理,用DNA Zol方法提取病毒核酸,通过PCR反应条件的优化,建立了牛精液中直接检测IBRV的荧光PCR方法,对该方法进行特异性和重复性检验;最后用该方法分别对120份新鲜牛精液和40份冻存牛精液进行检测,同时用普通PCR方法和病毒分离方法加以对比;并对其中的10头牛定期采集精液、鼻腔拭子和血清样品,用该荧光PCR方法进行病原检测,对血清样品进行IBRV抗体检测。【结果】建立的荧光PCR方法具有较好的特异性,重复性和稳定性很好。用该方法可检测到新鲜牛精液中0.002 TCID50的病毒粒子,检测到冻存牛精液中0.02 TCID50的病毒粒子,检测时间在3 h之内,是OIE已报道方法灵敏度的40～400倍,是病毒分离方法灵敏度的100倍。120份新鲜牛精液和40份冻存牛精液中,检测到阳性样品25份,用普通PCR检测得到阳性样品15份,病毒分离检测得到阳性样品12份。检测结果表明,精液为阳性的牛血清抗体不一定为阳性,血清抗体阳性的牛精液中也不一定携带病毒。【结论】建立了牛精液中IBRV的荧光PCR检测方法;通过分析精液带毒与血清抗体的关系,进一步表明不能简单地以血清抗体阴阳性作为精液是否带毒的依据。鼻腔拭子带毒具有间歇性。; 季新成牛国辉员丽娟段晓东张彦明于学辉曾新强; 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒荧光PCR 血清抗体

猪瘟病毒E2基因的扩增及序列分析被引量：3: 2006年; 本研究利用RT—PCR技术，对流行于国内部分地区的9株猪瘟病毒（CSFV）E2基因进行扩增，与C-株等4株参考毒株做了同源性比较，绘制了遗传进化关系发生树，结果表明，所测序列共由442个氮基酸残基组成。可将13株CSFV分为两个组群，其E2基因间的核苷酸序列同源性为81．9％～99．7％，所推导氨基酸序列同源性为88．2％～99．5％，其中9株CSFVE2基因的长度均为1324bp，编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和跨膜区序列，9株流行毒株与C-株之间核苷酸序列同源性为81．9％～95．3％。所推导氨基酸序列同源性为88．2％～95．5％。说明近期流行毒株的变异呈现一定的多样性，并且多数毒株已向远离疫菌株方向变异。; 曲永利季新成王臣员丽娟李毅; 关键词：猪瘟病毒 E2基因扩增

奶牛新包子虫病快速检测技术的研究: 季新成段晓东史茜员丽娟艾军于学辉王振宝徐军唐慧芬牛国辉朱建民刘小兰; 新孢子虫病是造成奶牛流产、产弱胎、死胎、木乃伊胎的主要原因之一.该病呈世界性分布，已成为世界奶牛流产病研究的热点.尚无控制该病的有效办法，因此，研究高效、特异、敏感的诊断方法尤为重要.结合进出境动物检验检疫工作的实际需要...; 关键词：; 关键词：奶牛

牛病毒性腹泻病毒不同检测方法的比较研究被引量：11: 2009年; 采用Idexx公司抗原捕获ELISA试剂盒对新疆部分地区160份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒抗原检测,结果有6份样品为阳性,对该6份血清用BVDV阴性血清进行了系列稀释后,分别用抗原捕获ELISA、RT-PCR和荧光RT-PCR进行检测,发现RT-PCR方法比ELISA检测灵敏度高10-100倍,荧光RT-PCR比RT-PCR灵敏度高约10-100倍。; 季新成曾新强员丽娟牛国辉于学辉段晓东王大孝; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR 荧光RT-PCR

加速溶剂萃取–液相色谱法测定五灵脂药材中原儿茶酸的含量: 2013年; 建立了五灵脂中原儿茶酸含量的测定方法。利用加速溶剂萃取仪（ASE），以75％乙醇水溶液提取样品中的待测物，用Diamosil C18（4．61mm×250mm，5．0μm）色谱柱在梯度洗脱条件下分离待测物，外标法定量。原儿茶酸的线性范围为0．1—10．0mg／L，相关系数r=0．9998。方法的回收率为83％～107％，测定结果的相对标准偏差为4．6％～10．5％，方法的定量限为1．0mg／kg。该方法操作简便、快速，提取效率高，适用于检测和分析五灵脂中原儿茶酸的含量。; 巩志国苏敏王静静员丽娟李世雨季新成朱建民; 关键词：五灵脂原儿茶酸液相色谱

牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测被引量：7: 2011年; 采用Svanova公司牛病毒性腹泻病毒血清抗体ELISA抗体检测试剂盒对采自新疆10个不同地区的875份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测,共检出抗体阳性血清759份,最高阳性率为100%,最低为55.0%,平均为86.7%。检测结果表明该病已在新疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律。根据ELISA检测结果,从中选择15份血清用病毒中和试验进行检测,结果显示,所采用的ELISA检测方法具有较好的敏感性。; 王文张娟员丽娟季新成; 关键词：牛病毒性腹泻病毒血清抗体 ELISA 病毒中和试验

牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒荧光探针定量RT-PCR检测方法的建立被引量：3: 2011年; 为建立牛精液中基因I型牛病毒性腹泻病毒(BVDV-1)的快速检测方法,本研究采用Sephycral S-400凝胶对牛精液过滤处理后提取病毒核酸,根据BVDV-1 5'UTR保守区基因序列,设计特异性引物和荧光探针,通过反应条件的优化,建立了牛精液中BVDV-1荧光定量RT-PCR检测方法。该方法可以检测到牛精液中含量为0.0125 TCID50的病毒,灵敏度比病毒分离方法高200倍～2 000倍,比常规RT-PCR方法高10倍。对从同一个牛场6个月内采集的120份新鲜牛精液和40份冷冻牛精液用该荧光RT-PCR方法检测,没有检测到BVDV-1阳性样品。对其中的10头牛定期检测精液中病毒的同时,并同步检测了全血中的病毒和血清抗体,结果血清抗体阳性牛精液中没有检测到病毒,本研究结果表明,不能以血清抗体阴阳性做为精液是否带毒的依据。; 季新成黄玲段晓东员丽娟牛国辉于学辉曾新强张彦明; 关键词：牛精液荧光定量RT-PCR检测血清抗体检测

新孢子虫NcSAG1与NcSRS2基因的原核表达与纯化被引量：1: 2013年; PCR扩增新孢子虫NcSAG1与NcSRS2基因,将其构建至原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL-21菌株。对重组表达质粒pET28a/SRS2与pET28a/SAG1IPTG的诱导浓度和诱导温度等条件进行了摸索,确定蛋白最佳诱导时间分别为5、3h,IPTG浓度均为0.8 mmol/L。经组氨酸标记Ni 2+柱纯化后获得的蛋白纯度均大于93.5%,蛋白质量浓度分别为1.23、1.1g/L。经Western blotting检测证明表达的蛋白具有较好的特异性。用纯化后pET28a/SRS2、pET28a/SAG1和二者等量混合物包被酶标板,经ELISA检测表明,表达的蛋白具有较强免疫活性,2种蛋白等量混合物包被酶标板与各蛋白单独包被酶标板检测比较,并未见D值升高。; 史茜员丽娟季新成于学辉; 关键词：新孢子虫 WESTERN BLOTTING ELISA

液相色谱法测定番茄制品中链霉素和双氢链霉素的残留量被引量：5: 2012年; 建立了测定番茄制品中链霉素和双氢链霉素残留量的净化方案。样品中的残留物用磷酸盐缓冲液(pH 4)提取,经分散固相萃取法初步净化后,再经串联双柱固相萃取净化,用RP C18(Symmetry Shield)色谱柱在梯度洗脱下分离待测物,外标法定量。链霉素的线性范围为0.05～0.8 mg/L,相关系数r>0.9998。方法的回收率为71%～95%,定量限(S/N=10)为0.1 mg/kg,测定结果的相对标准偏差为2.6%～10.5%。该方法操作简便,净化效果好,灵敏、准确,检测成本低,适用于检测和分析番茄制品中链霉素和双氢链霉素的残留量。; 巩志国苏敏员丽娟李世雨季新成; 关键词：链霉素液相色谱

布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体双重PCR检测方法的建立与初步应用被引量：2: 2014年; 为建立同步检测布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体的双重PCR方法,根据GenBank上公布的布鲁氏菌Bp26基因和贝纳氏柯克斯氏体IS1111a基因,利用Primer premier 5.0软件各设计一对特异性引物,分别扩增出219 bp和130 bp的目的片段,通过优化PCR反应体系和扩增条件,建立起了能够同步快速检测布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体的双重PCR方法,该方法具有较好的特异性、可重复性和较高的灵敏性。利用该双重PCR方法对流产牛抗凝全血、血清、流产胎儿及奶液等172份临床样品进行检测,共检测到布鲁氏菌感染阳性样品53份,贝纳氏柯克斯氏体感染阳性样品10份,混合感染阳性样品2份,阳性检出率分别为30.8%、5.8%、1.2%。初步临床应用结果表明,该方法可用来安全、同步、快速、灵敏地对布鲁氏菌和贝纳氏柯克斯氏体进行检测。; 彭武丽罗展荣季新成员丽娟史茜于学辉; 关键词：布鲁氏菌病 Q热

员丽娟

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