唐莉莉
- 作品数：6 被引量：0H指数：0
- 供职机构：华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 利用类弹性蛋白可逆相变和内含肽自切割功能高效制备TmSm抗肿瘤蛋白
- 2013年
- 目标蛋白TmSm是研发出的一种能够较强抑制肿瘤细胞生长和促进其凋亡的基因工程抗肿瘤蛋白,其由介导目的蛋白进入细胞的转导肽HIV-TAT突变体(Tm)和Survivin突变体(Sm)融合而成。原先的TmSm制备工艺以包涵体表达、变性和复性为主,其过程不仅复杂、收率低成本高,而且所得蛋白活性较低。通过将TmSm基因与编码类弹性蛋白(elastin-like polypeptides,ELPs)和内含肽(intein)的标签序列(EI)进行融合,利用ELPs的可逆相变特性和intein的自切割功能,经简单的温度及pH调控,获得了纯度为99.00%的TmSm蛋白。将纯化后的蛋白作用于肺癌细胞A549,24 h后MTT结果显示,63.21μg/ml的目的蛋白对A549的抑制率为57.83%;流式细胞仪检测结果表明,当TmSm浓度为40μg/ml时,24 h后细胞凋亡率为41.72%。因此,这种新型的以类弹性蛋白和内含肽介导的表达纯化技术不仅成本低廉,而且对抗肿瘤蛋白药物的质量提高具有重要应用价值。
- 石磊唐莉莉马兴元王天文马飞王平
- 关键词：内含肽肺癌细胞A549
- 基于内含肽介导的ELPs蛋白纯化新技术研究
- 90年代以来，DNA重组技术得到大力的发展，人们对蛋白质的研究和生产的需求也越来越迫切，但重组蛋白的分离纯化仍然是一个难题，成本约占全部生产费用的60％～80％.现代蛋白分离纯化技术最常用的方法是层析技术，其中亲和层析应...
- 唐莉莉
- 关键词：内含肽红色荧光蛋白
- 一种内含肽介导的类弹性蛋白纯化重组蛋白的方法
- 本发明公开了一种利用内含肽介导的类弹性蛋白(ELPs)纯化重组药物蛋白的方法。本方法基于类弹性蛋白(ELPs)的温度依赖的相变特性和内含肽的标签自切割功能，利用二者的结合开发出一种无需亲和介质和标签切除酶的方法，此方法操...
- 马兴元唐莉莉石磊夏鸿西
- 文献传递
- TATm-survivin(T34A)冻干注射剂的制备及体外抗肿瘤效果
- 2012年
- 目的:优化TATm-survivin(T34A)蛋白的冻干工艺,同时对该蛋白的体外抗肿瘤活性进行研究。方法:采用MTT法检测TATm-survivin(T34A)蛋白的抗肿瘤活性并以此为指标优化该蛋白的冻干工艺。结果:海藻糖、甘露醇等的浓度对于TATm-survivin(T34A)蛋白冻干产品的外观影响很大,不同的预冻方式对冻干产品的活性有很大的影响;TATm-survivin(T34A)蛋白对于肺癌A549细胞以及乳腺癌MCF-7/s细胞有着显著的抑制效果,其中肺癌A549的效果要强于用于对照的乳腺癌B-Cap-37细胞以及胰腺癌SW1990细胞;0.25个单位的TATm-survivin(T34A)蛋白与阿霉素联合用药能够显著提高阿霉素对B-Cap-37,MCF-7/s和耐药株MCF-7/ADR的抑制效果,联合用药对这3种细胞株的IC50值分别可以降低26.6%,35.5%和18.0%。结论:获得了一条经过优化的TATm-survivin(T34A)蛋白冻干产品的制备工艺。并证明TATm-sur-vivin(T34A)蛋白具有较强的抗肿瘤效果,同时还发现该蛋白对阿霉素具有较强的增敏作用,是一种值得进一步研究与开发的抗肿瘤药物。
- 朱玲石磊唐莉莉许玉馨张翼马兴元
- 关键词：冻干抗肿瘤药增敏作用阿霉素
- 重组蛋白TATm-Survivin(T34/117A)对乳腺癌细胞周期变化与凋亡的影响
- 2011年
- 背景与目的:Survivin是一个抗凋亡、促增殖的双功能基因,且高表达于多种恶性肿瘤和转化组织中,使其成为抗肿瘤药物研究的新靶点。本研究观察经点突变的重组蛋白药物TATm-Survivin(T34/117A)处理乳腺癌细胞B-Cap-37后,对乳腺癌细胞B-Cap-37细胞周期和增殖的影响,检测其对癌细胞促凋亡且抑制增殖的药效并初步探讨其分子机制。方法:重叠PCR法在TATm-Survivin(T34A)基因上引入突变位点Thr117→Ala117,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期及线粒体膜电位变化;Western blot检测Aurora B激酶底物Histone H3的磷酸化水平和Caspase-3激活情况。结果:TATm-Survivin(T34/117A)蛋白对B-Cap-37细胞的增殖有显著的抑制作用;作用24 h后,细胞被阻滞在G0/G1期,G0/G1期细胞由对照组的(54.1±6.1)%显著增加到(62.7±5.1)%(P<0.05),作用48 h后,细胞被阻滞在G2/M期,G2/M细胞由对照组的(16.6±8.9)%显著增加到(24.0±6.0)%;Aurora B激酶活性通过Histone H3的磷酸化水平间接反映,蛋白药物处理48 h后p-Histone H3的灰度值由对照组的100%降低到89.8%(P<0.05);48 h时,细胞线粒体膜电位由对照组的(649.9±8.0)%显著降低到(582.9±15.6)%(P<0.05);细胞凋亡率由对照组的(4.6±0.7)%显著增加到(42.7±0.5)%(P<0.01),与对照相比,不同浓度的重组蛋白均激活了Caspase-3。结论:重组蛋白TATm-Survivin(T34/117A)对乳腺癌B-Cap-37具有抑制增殖、促凋亡作用,其与降低Aurora B激酶的活性,并激活Caspase-3相关。
- 康燕燕唐莉莉石磊陈海龙林南静马兴元
- 关键词：点突变乳腺癌凋亡
- 一种抗肿瘤蛋白质药物的质量稳定工艺
- 本发明公开一种抗肿瘤蛋白质药物的质量稳定工艺，所述质量稳定工艺包括以下步骤：（1）目标蛋白质的大肠杆菌表达与发酵制备；（2）大肠杆菌工程菌的破碎与包涵体的回收；（3）包涵体洗涤与目标蛋白质的回收；（4）目标蛋白质强阳离子...
- 马兴元朱玲石磊唐莉莉郑文云莫剑
- 文献传递
