质粒pcDNAL1诱发C57BL/6小鼠产生特异性细胞免疫反应(英文) 2002年 目的 利用重组HPV16L1DNA真核表达质粒免疫C5 7BL/6小鼠探讨DNA疫苗的免疫效果。方法 实验动物C5 7BL/6随机分为实验组 (pcDNAL1)和对照组 (pcDNA3 1和PBS) ,用免疫原共免疫三次 ,间隔三周 ,末次免疫后 10 - 14天行足垫肿胀试验检测DTH反应 ;之后 ,拉颈处死 ,尸检观察。行脾细胞抗原特异性增殖反应和CD4 /CD8,IFN -γ+或IL10 +细胞FACS分析。内脏用于组织学检查。结果 质粒pcDNAL1组脾细胞增殖指数、足垫肿胀程度、CD8+IFN -γ+细胞均高于对照组。整个免疫过程中动物无行为异常 ,尸检未见异常病变。结论 裸pcDNAL1质粒免疫C5 7BL/6小鼠能诱发特异性细胞免疫反应 ,且安全性较高。 宋建明 刘天菊 孙向乐 王一理 司履生关键词:质粒 人乳头瘤病毒16型 DNA疫苗 预防性疫苗 人乳头瘤病毒16型-L1真核表达质粒的构建和表达以及实验动物对裸DNA的免疫反应 被引量:2 1999年 Recombinant plasmid pcDNA-L1 was constructed by inserting HPV16-L1 gene fragment into eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1. pcDNA-L1 was transfected into mammalian cells Cos-7 and the expression of HPV16-L1 protein was testified by immunohistochemistry(IHC). Then the recombinant plasmid was directly injected into the quadriceps muscle of BALB/c mice. Antibodies against HPV16-L1 in the immunized mice were positively detected by immunodot and IHC at 28 and 41 days after the last immunization. 孙向乐 司履生 曹瓒孙 王一理 刘天菊 郭建芬关键词:人乳头瘤病毒 DNA疫苗 人乳头状瘤病毒(HPV)16L1病毒样颗粒蛋白与HPV16L1基因联合免疫的体液免疫反应及其抗体的体外中和实验 被引量:4 2005年 目的用含有编码人乳头状瘤病毒(HPV)16L1和HPV16L1病毒样颗粒(VLP)蛋白联合免疫小鼠,与用HPV16L1重组表达质粒比较,观察VLP蛋白免疫对免疫小鼠产生抗体的增强作用,以及抗体的体外中和作用,寻找研制HPV16感染的预防性疫苗的有效途径。方法将C57BL/6小鼠,随机分为4组:Ⅰ组:pcDNA-L1(100μl/鼠),Ⅱ组:pcDNA-L1(70μl/鼠)+HPV16L1VLP,Ⅲ组:pcDNA3.1(100μl/鼠)空质粒,Ⅳ组:PBS缓冲液。质粒免疫3次,间隔3周。ELISA法检测其血清抗体,红细胞凝集实验和HPV16病毒样颗粒结合抑制实验体外检测抗体的中和活性。结果pcDNA-L1+HPV16L1VLP较pcDNA-L1免疫组,3次免疫后的抗体水平均增高,尤其以第2次和第3次免疫后的抗体水平增加更显著。pcDNA-L1+HPV16L1VLP联合免疫组血清的抑制活性高于pcDNA-L1免疫组,且HeLa细胞结合抑制实验染色呈阴性。结论HPV16L1VLP联合免疫可以增加目的抗原的中和抗体产生,可能是HPV16有效预防性疫苗研制的更有希望的策略。 宋建明 孙向乐 王一理 郭建芬 刘天菊 司履生关键词:人乳头状瘤病毒 联合免疫 体液免疫反应 颗粒蛋白 HPV16L1 HPV16感染 HPV16-L1真核表达质粒的构建和表达以及实验动物对裸DNA的免疫反应 孙向乐关键词:人乳头瘤病毒16型 DNA疫苗 HPV_(16)预防性疫苗的研究进展及展望 被引量:2 1997年 高危型人乳头瘤病毒(HPV),尤其是HPV16是宫颈癌的重要启动因素。制备预防HPV感染的疫苗可能达到对大部分宫颈癌的预防作用。因HPV生物学特性的限制,使得该疫苗的研究曾一度受阻,随着分子生物学和基因工程技术以及在疫苗制备方法策略上的不断发展,HPV预防性疫苗的大量供给不久将成为可能。 孙向乐关键词:乳头状瘤病毒属 免疫学 诊断超声对早孕绒毛影响的生化学研究 孙向乐共刺激分子在宫颈癌组织中的表达 被引量:11 2000年 目的 研究宫颈癌组织中癌细胞中的共刺激分子B7 1、B7 2、细胞间粘附因子 Ⅰ (ICAM 1)及主要组织相容性抗原 (MHC)Ⅰ、Ⅱ类分子表达 ,以揭示人体肿瘤的逃逸机制。方法 利用免疫组织化学技术 ,观察了42例人宫颈癌组织中B7 1、B7 2、ICAM 1的表达 ,观察了 36例MHCⅠ、Ⅱ类抗原的表达 ;利用原位杂交技术观察了 2 0例人宫颈癌组织中B7 1、B7 2和ICAM 1的mRNA表达。结果 在进行免疫组织化学检测的标本中 ,42例中有 2 2及 2 7例的癌组织癌细胞分别表达B7 1及ICAM 1分子 ,但无一例表达B7 2分子 ;所有癌组织及癌巢间质中均可见有程度不同的B7 1、B7 2和ICAM1阳性的树突状细胞及淋巴细胞浸润 ;37例中有 32例及 4例的癌细胞分别表达MHCⅠ和Ⅱ类抗原 ,癌巢及间质内有成团或散在的MHCⅡ阳性树突状细胞浸润 ,同一标本中MHCⅡ阳性树突状细胞的数量明显多于B7 1和B7 2阳性树突状细胞。在进行原位杂交的 2 0例标本中 ,有 11例和 15例的癌细胞分别表达B7 1和ICAM 1mRNA ,浸润的树突状细胞及淋巴细胞可见B7 1、B7 2和ICAM 1mRNA表达。结论 人宫颈癌的癌细胞确实表达与抗原提呈及刺激T细胞活化有关的分子 ,而且肿瘤组织中存在有职业性抗原提呈细胞浸润 。 郭建芬 司履生 王一理 赵英仁 刘孜 徐长福 孙向乐关键词:原位杂交 宫颈癌 共刺激分子 基因表达 一种直接评价HPV16L1抗体活性的新方法 被引量:3 2002年 目的 :以pcDNAL1质粒免疫啮齿类动物 (C5 7BL/ 6 )为模型 ,观察HPV16L1VLP细胞结合抑制实验是否可以用于检测免疫抗体的中和保护作用。方法 :实验组包括Ⅰ组pcDNAL1、Ⅱ组HPV16L1VLP ;Ⅲ组pcDNA3.1。每组动物均为 6只C5 7BL/ 6鼠。每组动物均肌肉注射免疫 3次 ,间隔 3w。末次免疫后 14d眼球后取血并拉颈处死动物 ,进行HPV16L1VLP结合抑制试验 :免疫血清中和HPV16L1VLP ;制备Hela ,EJ和RLC310细胞爬片 ,CS12 13细胞涂片 ;细胞免疫组化染色。结果 :实验组血清中和后Hela细胞呈染色阴性 ,而对照组、不共育组则细胞呈棕黄色。结论 :这说明实验组血清具有抑制VLP与Hela细胞粘附的活性效应。这一方法可能比HAI更能直接反映中和抗体的活性和保护作用。 宋建明 孙向乐 王一理 刘天菊 司履生关键词:人乳头瘤病毒16型 抗体 免疫 子宫颈癌 诊断超声对人早期胚胎安全性的研究 张蕴璟 王彩凤 于学文 金辉 李旭 邓文慧 巩岩 孙向乐 王秉正 闫春芳 该研究始于80年代,当时“诊断超声对胚胎、胎儿的安全性”是国际关注的重要课题,但是以前绝大多数为离体、动物实验和流行病学研究,均不对问题做出明确回答。该研究直接选择拟行人流的早孕妇女,以诊断超声照射宫内孕囊、取绒毛进行了...关键词:关键词:诊断超声 生物学效应 共刺激分子B7-2与HPV16L1联合基因免疫小鼠的免疫应答 2002年 目的 研究共刺激分子B7 2和HPV16L1重组质粒免疫小鼠的体液免疫反应。方法 用pcDNA Ll和PLXDmB7 2质粒共同肌注免疫C5 7BL 6小鼠 ,ELISA方法检测其血清抗体 ,红细胞凝集抑制实验和HPV16病毒样颗粒结合抑制实验检测其抗体中和活性。结果 HPV16L1和B7 2基因联合免疫小鼠的血清抗体滴度增高。结论 共刺激分子B7 2联合免疫可以增加目的抗原的抗体产生 。 孙向乐 宋建明 司履生 王一理 郭建芬 刘天菊关键词:免疫应答 乳头状瘤病毒 共刺激分子