孙真
- 作品数：11 被引量：17H指数：2
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 鲤鱼TLR5基因克隆、鉴定及对嗜水气单胞菌感染的应答
- 鱼类的免疫系统相对原始，与哺乳动物相比，对其免疫系统分子机制的研究较少，其依靠主要由PRRs引导的固有免疫系统来抵御病原微生物。不论在脊椎动物还是哺乳动物中，对于每一种PAMPs或者DAMPs，都有TLRs与之特异相配，...
- 孙真
- 关键词：鲤鱼CDNA克隆嗜水气单胞菌
- 文献传递
- 嗜水气单胞菌鞭毛蛋白基因flaB的克隆、表达及其免疫原性分析被引量：1
- 2015年
- 目的克隆、表达及纯化嗜水气单胞菌鞭毛FlaB蛋白,比较了它与天然鞭毛蛋白的抗原性,为以后鱼类弧菌病的防治及其疫苗的制备奠定了基础。方法利用PCR扩增出嗜水气单胞菌鞭毛蛋白基因flaB,经确定后将该基因克隆到原核表达载体pET-30a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了表达,并用电洗脱法对表达的蛋白进行纯化,用纯化的重组蛋白免疫家兔制备抗血清,并进行Western-blot分析。结果嗜水气单胞菌鞭毛蛋白flaB基因全长912bp,编码303个氨基酸,预测分子量为32kDa,Western-blot结果表明兔抗FlaB血清不仅能与重组鞭毛蛋白发生反应,而且能与天然鞭毛蛋白发生反应。结论鞭毛蛋白FlaB可能是嗜水气单胞菌的重要保护抗原之一,为下一步疫苗的制备奠定了基础。
- 沈雪飞翟新新温振才孙真贾生美卢强
- 关键词：嗜水气单胞菌鞭毛蛋白
- 鲤鱼白细胞介素10(IL-10)基因cDNA克隆及序列分析(英文)
- 2012年
- [目的]获取鲤鱼全长IL-10(interleukin 10)cDNA,并对其序列进行分析。[方法]利用DD-RTPCR(differential display RT-PCR)方法获得差异表达IL-10cDNA片段,以地高辛标记做为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,克隆鲤鱼IL-10全长cDNA,并对该序列进行序列分析和同源性比较。[结果]鲤鱼全长IL-10cDNA共1117bp,包含55bp的5’端非编码区,一个540bp的编码179个氨基酸的开放阅读框及522bp的3’端非编码区。其中,3’非编码区包含3个mRNA不稳定基序"ATTTA";该蛋白序列具有IL-10家族的典型序列特征;序列同源性比较表明,所获得的序列与GenBank上登录的鲤鱼IL-10基因同源性为89.1%。[结论]该试验为进一步研究IL-10在体内的表达方式、功能特点、调控机理及其在炎症反应和免疫应答中的作用机制奠定了基础。
- 冯祥汝陈义龙赵晓王文东张俊辉杨振国孙真贾生美卢强
- 关键词：WORDSCARPSEQUENCE
- 鲤鱼白细胞介素10基因组DNA克隆及序列分析
- 2013年
- 为获得鲤鱼白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)全长基因组序列,本研究利用鲤鱼IL-10全长cDNA序列(Gen-Bank登录号:JX524550),通过在两端非编码区设计引物,以提取的鲤鱼脾脏基因组为模板,使用PCR方法成功获得鲤鱼IL-10全长基因组序列。鲤鱼IL-10基因组全长2176bp,GenBank登录号为JX524551。将所获得的序列与其他物种IL-10基因组序列相比,结果发现都含有5个外显子,4个内含子,外显子在进化上相对保守,剪切位点都符合"gt......ag"规则;序列包含540bp的开放阅读框,编码179个氨基酸,有2段典型的IL-10氨基酸信号基序。
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- 关键词：鲤鱼白细胞介素10基因组克隆
- 鲤鱼外周血白细胞TLR5M全长cDNA克隆及序列分析被引量：1
- 2013年
- 本试验以鲤鱼TLR5M的EST序列为基础进行5'-RACE试验,获得了其cDNA的全长序列。结果表明,该序列共3182 bp,包含38 bp的5'端非编码区,486 bp的3'端非编码区,1个2658 bp的开放阅读框(ORF),共编码885个氨基酸。序列同源性比对结果表明,该序列与麦瑞加拉鲮鱼TLR5基因同源性高达84.46%。
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- 关键词：鲤鱼克隆
- 鲤鱼肿瘤坏死因子受体相关因子6全长cDNA克隆及序列分析
- 2013年
- 本试验以鲤鱼外周血白细胞肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)EST序列为基础,经地高辛标记后作为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从重组噬菌体中经过两轮筛选获得阳性克隆。序列分析结果显示,该序列包含有5′-非编码区(5′-UTR)25bp;3′-非编码区(3′-UTR)535bp,存在2个mRNA不稳定基序ATTTA;开放阅读框ORF长1632bp,编码543个氨基酸。预测蛋白质等电点为5.88,分子质量大小为61.773ku。序列同源性比对结果表明,所获得的序列与GenBank上登录的鲤鱼TRAF6a基因同源性达99%。蛋白质序列分析结果发现,其具有TRAF家族的典型序列特征。
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- 关键词：鲤鱼肿瘤坏死因子受体相关因子6克隆
- 鲤鱼γ-2β干扰素基因组DNA克隆及序列分析被引量：2
- 2013年
- 试验参考鲤鱼γ-2β干扰素(interferonγ-2β,IFNγ-2β)全长cDNA序列,在其两侧非翻译区和外显子设计2对引物,以提取的鲤鱼脾脏基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得了IFNγ-2β的全长基因DNA序列。结果表明,获得的基因组DNA全长2084bp,GenBank登录号为JX181981,序列分析结果显示该基因进化较保守,和其他物种一样都含有4个外显子和3个内含子,各外显子碱基数与哺乳动物中相对应的外显子碱基数基本相同,且外显子、内含子剪接位点均遵守GT-AG规则。
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- 关键词：鲤鱼克隆
- 维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA的克隆及原核表达被引量：7
- 2014年
- 本试验旨在利用大肠杆菌BL21(DE3)表达维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性。根据GenBank公布的序列设计1对引物,经PCR扩增获得flaA基因的完整开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-30a,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化。SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌成功表达,约在38ku处可见清晰的表达产物,诱导产物大小与理论值相符。经Western blotting检测,结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体和His-tag抗体发生免疫反应。因此,本试验成功表达了维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,为进一步研究其生物学功能及免疫佐剂作用奠定了基础。
- 翟新新温振才沈雪飞孙真贾生美张俊辉王文东杨振国卢强
- 关键词：维氏气单胞菌鞭毛蛋白克隆
- 鲤鱼干扰素γ-2β全长cDNA的克隆及序列分析(英文)被引量：1
- 2012年
- [目的]进行鲤鱼干扰素γ-2β(IFNγ-2β)全长cDNA的克隆、鉴定及序列分析。[方法]以鲤鱼外周血白细胞干扰素γ-2β(interferon γ-2β,IFNγ-2β)EST序列为基础,以地高辛标记作为探针对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,克隆鲤鱼IFNγ-2β的全长cDNA,并进行序列分析。[结果]获得了3个阳性克隆。对其序列分析结果显示,该序列包含119bp的5'非编码区,218bp的3’非编码区,开放阅读框ORF长537bp,共编码178个氨基酸,在其3’非编码区存在几个ATTTA不稳定基序。序列同源性比较结果表明,所获序列与GenBank上登录的鲤鱼IFN基因的同源性达97%;蛋白质序列和结构分析发现,该序列其具有IFN家族的典型序列特征。[结论]为进一步研究IFNγ-2β在体内的表达方式、功能特点和调控机理以及在炎症反应和免疫应答中的作用机制奠定了基础。
- 陈义龙冯祥汝赵晓王文东张俊辉杨振国孙真贾生美卢强
- 关键词：鲤鱼克隆
- 鲤鱼白细胞介素10(IL-10)基因cDNA克隆及序列分析被引量：5
- 2012年
- [目的]获取鲤鱼全长IL-10(interleukin 10)cDNA,并对其序列进行分析。[方法]利用DD-RTPCR(differential display RT-PCR)方法获得差异表达IL-10 cDNA片段,以地高辛标记做为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,克隆鲤鱼IL-10全长cDNA,并对该序列进行序列分析和同源性比较。[结果]鲤鱼全长IL-10 cDNA共1 117 bp,包含55 bp的5'端非编码区,一个540 bp的编码179个氨基酸的开放阅读框及522 bp的3'端非编码区,其中,3'非编码区包含3个mRNA不稳定基序"ATTTA";该蛋白序列具有IL-10家族的典型序列特征;序列同源性比较表明,所获得的序列与GenBank上登录的鲤鱼IL-10基因同源性为89.1%。[结论]该试验为进一步研究IL-10在体内的表达方式、功能特点、调控机理及其在炎症反应和免疫应答中的作用机制奠定了基础。
- 冯祥汝陈义龙赵晓王文东张俊辉杨振国孙真贾生美卢强
- 关键词：鲤鱼IL-10克隆
