张健源
- 作品数：49 被引量：81H指数：5
- 供职机构：北京市结核病胸部肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项北京市自然科学基金北京市科委国际合作项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 单链构象多态性与核酸杂交联合检测耐氧氟沙星的结核分枝杆菌被引量：3
- 2005年
- 目的探讨聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)并Southern杂交检测耐氧氟沙星(OFLX)结核分枝杆菌的可行性,并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限。方法(1)体外筛选人工诱变的耐OFLX的耐药突变株,并检测OFLX对这些耐药株的最低抑菌浓度(M IC)和最低杀菌浓度(MBC)。(2)扩增结核分枝杆菌的gyrA基因,包括H37Rv 1株、H37Ra 1株、临床分离的OFLX敏感株10株及人工诱变的耐OFLX H37Rv(17株)、H37Ra(17株)及临床分离菌株(51株)共计85株,并对此扩增产物进行SSCP分析及Southern杂交,对比观察耐OFLX结核分枝杆菌的核酸单链条带位移的变化。为了验证PCR-SSCP并Southern杂交结果的可重复性,对36株临床分离的耐OFLX菌株的耐药界限进行初步检测。结果经PCR-SSCP及Southern杂交,85株人工诱变的耐OFLX菌株,全部检测到gyrA基因突变。在OFLX 10μg/m l这一点上,明显地存在着一个结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药并存的交叉区。对36株临床分离的OFLX耐药菌的PCR-SSCP合并Southern杂交检测结果显示,对比标准株H37Ra,在临床分离的耐OFLX菌株间观察到了类似的因单链构象变化而引起的单链位移的结果。结论PCR-SSCP合并Southern杂交可以清晰地区分对OFLX敏感与耐药的菌株,以10μg/m l为界作为判别结核分枝杆菌对OFLX是否已经产生耐药的标准是适宜的。
- 张健源王甦民李传友田苗张旭霞赵冰李卫民赵雁林邱云青马玙
- 关键词：氧氟沙星核酸杂交
- 氟喹诺酮类药品抗结核作用的系列研究
- 李传友高微微孙照刚戈启萍韩喜琴张健源
- 该项目属于呼吸道传染病-肺结核治疗的临床研究领域。该项目涉及氟喹诺酮类药品抗结核分枝杆菌活性的研究、氟喹诺酮类药品治疗肺结核临床疗效分析、临床合理应用氟喹诺酮类药品治疗肺结核以及快速检测结核分枝杆菌临床分离株的耐药性等一...
- 关键词：
- 关键词：肺结核治疗氧氟沙星
- 结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断中的应用被引量：5
- 2008年
- 目的探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素（Heparin—binding haemagglutinin adhesin，HBHA）在结核病免疫诊断方面的应用价值。方法将在苏通培养基中培养至稳定期的卡介苗菌株（BCG）菌体超声裂解，离心后取上清并通过CL-6B层析柱，利用含0—500mmol／L氯化钠的磷酸盐缓冲溶液（PBS）进行梯度洗脱后获得天然HBHA。以BCG基因组为模板PCR扩增结核分枝杆菌hbha基因片段，质粒pET-32a为载体，大肠杆菌作为宿主菌制备原核表达的HBHA重组蛋白。以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原，分别对肺结核组、肺外结核组、PPD阳性和PPD阴性健康对照组各47例血清通过ELISA方法检测抗HBHA的抗体水平。应用SPSS11．5统计软件对各研究组数据进行方差齐性检验，然后进行t检验，并计算各研究组的敏感度和特异度。结果含有375mmol／L氯化钠的PBS洗脱液可以洗脱获得较纯的天然HBHA蛋白。利用重组HBHA所带的组氨酸标签进行特异分离、纯化。ELISA检测结果表明天然HBHA蛋白和重组HBHA蛋白、PPD阳性和PPD阴性健康对照组之间血清抗体水平差异不明显。肺结核组与肺外结核组的血清抗体ELISA检测的吸光度值在散点图中分布有明显差异，肺结核组吸光度值集中分布在0．30—0．40之间，肺外结核组吸光度值分布在0．35—0．45之间，经统计学检验结果差异具有统计学意义（t：12．224，P〈0．05）。结核组（肺结核和肺外结核）与对照组（PPD阴性，PPD阳性）吸光度值分布具有显著不同，对照组全部小于0．30，结核组吸光度值则集中分布于0．30—0．45之间。经统计学检验（t=25．909，P〈0．05）血清抗体水平具有显著性差异。结论结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断的应用中具有较好的特异度和敏感度，有望用于结核病、尤其是肺外结核病的实验室辅助诊断。
- 张旭霞孙照刚李妍张健源端木宏谨李传友
- 应用不同引物检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变对结果判定的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨以PCR-SSCP技术为基础,应用不同引物检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变以及固定/终止液的组成对判定结果可能会产生的影响。方法采用2对引物,经PCR-SSCP检测,利用银染显色的方法显现耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变的DNA单链位移。结果对比标准株H37Rv及H37Ra gyrA基因的单链带位置,在被测试的89株菌株中发生位置变化的;对氧氟沙星的耐药程度>10μg/ml的分别有4株与14株,约占89株检测总数的4.49%和87.5%,对氧氟沙星的耐药程度介于≥2且≤10μg/ml之间的26株中,有与标准株gyrA基因的单链带位置发生改变的分别有20株与7株,约占89株检测总数的22.47%和7.87%;对氧氟沙星的耐药程度<2μg/ml的47株中分别有2株与11株,约占89株检测总数的2.25%和12.36%。用含5.0%乙醇和4.5‰冰醋酸配比的固定/终止液可为利用银染法显现核酸凝胶分离DNA提供温和的反应环境,操作过程方便,观测效果较为理想。结论应用不同引物检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变会对结果的判定产生影响,采用含5.0%乙醇、4.5‰冰醋酸的固定/终止液可为应用非变性聚丙烯酰胺凝胶分离核酸检测的银染着色法提供温和的反应环境,并产生清晰可辨的被检测标本的DNA单链条带。
- 张健源程君任卫聪刘毅赵雁林孙勇王伟李传友
- 关键词：氧氟沙星银染色法GYRA基因
- 观察改良的药物敏感性检测法对检出耐药结核分枝杆菌的影响
- 2010年
- 目的利用经改良的最低抑菌浓度法（IMIC）检测结核分枝杆菌临床分离株对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素和氧氟沙星的药物敏感性，观察其对耐药结核分枝杆菌检出的影响。方法利用改良的最低抑菌浓度法检测135株临床分离株对INH、RFP、EMB、SM及OFLX的敏感性。结果在相同的药物浓度中，与接种1×10 5／ml菌量的试验管相比135株接种1×10 7／ml活菌数的试管中有68．89％的结果与之相同，有311％的结果与之不相同。判断结果由阴性转阳性的标本共有20株，（其中耐RFP的1株、耐INH的3株、耐OFLX的3株、耐EMB的5株以及耐SM的8株）约占135株受试菌株总数的148％。结论利用改良的最低抑菌浓度法可发现潜在的耐药结核病患者，提高耐药菌的检出率。
- 张健源赵雁林孙照刚姜广路李妍王甦民刘毅聂理会高铁杰张治国任卫聪李传友
- 应用改良的耐药性检测法观察结核分枝杆菌耐药的动态变化
- 目的利用改良的耐药性检测法观察结核分枝杆菌对抗结核药物耐药的动态变化,以期寻找结核分枝杆菌对抗结核药物产生耐药的规律性。方法利用改良的最低抑菌浓度法检测135株临床分离株对INH、RFP、EMB、SM及OFLX的敏感性。...
- 张健源李传友程君
- 文献传递
- 耐氧氟沙星的结核分枝杆菌临床分离株的gyrA基因点突变特点
- ＜正＞目的研究结核分枝杆菌临床分离株的gyrA 基因点突变位点和突变频率,了解目前结核分枝杆菌临床分离株耐喹诺酮类药物的基本特点。方法以我室保藏H37Rv（ATCC272294）,H37Ra （ATCC25177）菌株以...
- 孙照刚张健源李传友
- 文献传递
- 耐药菌检测方法与广泛耐药结核菌早期发现的相关性分析
- 目的利用改良的结核菌细菌学检测法观察结核分枝杆菌对抗结核药物耐药的动态变化,以期寻找早期发现广泛耐药结核分枝杆菌的新方式。对比聚合酶链式反应及单链构象多态分析,印证改良的微生物学检测法在发现广泛耐药结核菌方面的可靠用途。...
- 张健源程君刘毅孙勇任卫聪姜晓颖车南颖郭志荣李传友
- 关键词：结核分枝杆菌
- 文献传递
- 脊柱结核脓液中结核分枝杆菌的培养及菌种鉴定被引量：16
- 2004年
- 目的利用脊柱结核术中所取得的脓液进行结核分枝杆菌的培养及菌种鉴定,以了解脊柱结核感染菌种病源学的情况,为其病源学及耐药性方面的进一步研究做工作基础准备。方法将脊柱结核病灶中的脓液经前处理后接种于改良罗氏培养基上,4～8周后观察结果和脓液涂片检查。结果143份脊柱结核脓液中,应用改良罗氏法培养出临床分离株13株,阳性率为301%;2涂片阳性者培养的阳性率较高;3化疗时间短、时间在两月以内者,其培养的阳性率较高;结论脊柱结核感染HIV阴性者的菌种以人型为主。
- 葛建忠王自立秦世炳李传友张健源
- 关键词：脊柱结核结核分枝杆菌菌种
- 高效液相色谱法检测结核分枝杆菌链霉素耐药基因突变被引量：4
- 2008年
- 目的采用变性高效液相色谱（DHPLC）法和测序法来分析结核分枝杆菌链霉素耐药基因rpsL和rrs基因突变，从而检测是否对链霉素耐药。方法215株结核分枝杆菌临床分离株（经常规方法证实，115株为链霉素耐药，100株为敏感），测定链霉素最小抑菌浓度（MIC），同时采用DHPLC和测序法检测rpsL和rrs基因突变。结果85．2％（98／115）的链霉素耐药株携有rpsL和（或）rrs基因突变，其中rpsL基因突变占大多数（76．5％，88／115）。对98株带有基因突变的菌株的分析表明，rpsL，rrs基因的突变类型与MIC之间未见密切关系。100株敏感株未检出基因突变。DHPLC法与测序法结果完全一致。结论本工作建立的DHPLC法可以认为是结核分枝杆菌链霉素耐药分析的一种有效的工具。
- 石瑞如张健源苑雪芹孙照刚李传友
- 关键词：微生物敏感性试验
