张光明
- 作品数：63 被引量：138H指数：6
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金国家高技术研究发展计划云南省应用基础研究计划面上项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- SV40树突状细胞疫苗的制备及免疫效应研究
- 目的：建立外周血来源的猴树突状细胞体外培养扩增、诱导及鉴定的方法，制备SV40树突状细胞疫苗并对其免疫效应进行评价。方法：使用rhGM-CSF扩增猴单核细胞，使用rhIL-4诱导单核细胞向树突状细胞方向分化，使用SV40...
- 葛长勇易山李鸿钧张光明刘馨奎翔孙茂盛
- 关键词：SV40树突状细胞疫苗免疫效应
- 文献传递
- E.coli表达HEV ORF2编码蛋白第112～607氨基酸片段的免疫原性及其诱生抗体的病毒中和活性被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨E.coli表达的戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码蛋白第112～607氨基酸片段(pORF2-56K)的免疫原性及其诱生抗体的病毒中和活性。方法 pORF2-56K免疫小鼠和豚鼠,用ELISA检测血清抗体效价。将HEV毒种与高效价豚鼠灭活血清在体外孵育后,接种于2BS细胞,用RT-PCR检测病毒RNA的复制情况。结果E.coli表达的pORF2-56K可诱导机体产生高水平的HEV特异性抗体和强烈的免疫记忆。该抗体可在体外有效中和HEV,使之失去在2BS细胞中有效复制的能力。结论 E-coli表达的pORF2-56K具有良好的免疫原性,且其诱生抗体具有中和HEV的能力,可作为HEV重组疫苗的候选抗原。
- 李洪钊冮宏映刘晓张光明孙强明李燕马雁冰孙茂盛
- 关键词：免疫原性中和活性戊型肝炎病毒
- 血管紧张素Ⅱ基因重组杆状病毒的构建
- 2013年
- 目的构建携带血管紧张素I(IAngiotensin Ⅱ,AngⅡ)基因的重组杆状病毒,并利用Bac-to-Bac重组杆状病毒表达系统进行表达。方法将重组杆粒bacmid-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rB/HAngⅡ)转染昆虫细胞sf9,包装出重组杆状病毒rBac-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rBAV),通过光学显微镜和透射电镜观察细胞病变(CPE)及病毒形态,采用蚀斑试验检测病毒滴度,PCR及间接免疫荧光技术验证该病毒及感染细胞中AngⅡ和HAV蛋白的表达。结果重组杆粒rB/HAngⅡ转染sf9细胞96 h后,出现典型的CPE;透射电镜下观察可见典型的杆状病毒颗粒;PCR可特异性的扩增出约3 000和1 000 bp的P1-2A-4AngⅡs和3ABC基因片段;P3代重组杆状病毒滴度约为4×108pfu/ml;感染后的sf9细胞中可见特异性的绿色荧光(AngⅡ蛋白)和红色荧光(HAV结构蛋白)。结论已成功构建了携带AngⅡ基因的重组杆状病毒,并在sf9细胞中获得表达,为研制抗高血压疫苗提供了新的思路。
- 欧霞Yuri Kusov郭莉莉米锴吴晋元尹娜张光明李鸿钧孙茂盛
- 关键词：杆状病毒表达系统
- 心肌内注射碱性成纤维细胞生长因子基因对兔缺血心肌血管新生的促进作用被引量：5
- 2003年
- 目的 :探讨心肌内注射碱性成纤维细胞生长因子基因 (b FGF基因 )治疗兔急性心肌梗死模型的效果。方法 碱裂解法大量制备质粒 ;采用开胸结扎兔冠状动脉左前降支 (L AD)法 ,建立兔急性前壁心肌梗死模型。模型制备成功后将动物分为治疗组 (n=19)和对照组 (n=18) ,并于心肌内分别注射 pc DNA3- b FGF10 0 μg和 pc DNA310 0 μg,饲养至 2 ,6 ,12周处死 ;免疫组化观察蛋白表达 ;行病理切片观察心肌梗死组织学变化和缺血心肌内血管新生的情况。结果 (1)术前术后描记的心电图证实兔急性心肌梗死模型制作成功 ;(2 )免疫组化观察注射 pc DNA 3- b FGF处心肌组织在 6周内有 b FGF蛋白的表达 ;(3)病理切片行图像分析计算血管密度发现 ,治疗组毛细血管密度和小动脉密度显著高于对照组。结论 心肌内注射 b FGF基因能促进缺血心肌内血管新生 。
- 谭强张小勇李易光雪峰马雁冰张光明
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子基因治疗血管新生
- 秋冬季婴幼儿轮状病毒感染分子流行病学调查被引量：5
- 2012年
- 目的监测2010年云南昭通地区秋冬季腹泻患儿感染轮状病毒的流行趋势,了解流行毒株的基因型特征。方法 2010年9—12月在云南省昭通市第一人民医院采集94份就诊的腹泻患儿粪便,应用胶体金法、逆转录聚合酶链式反应及PAGE电泳等方法,对样品进行轮状病毒抗原检测,其中8份阳性样品进行VP7基因测序分析及基因型分型。结果腹泻病患排泄物中轮状病毒抗原阳性比例为54.3%(51/94);8份轮状病毒基因序列分析,其中7份为G1型,1份为G3型;核苷酸同源性分析发现检测样品中轮状病毒主要与在中国辽宁、印度和泰国发现的流行株相似。结论 2010年昭通地区秋冬季患儿腹泻主要由轮状病毒引起,其中以G1型为主,其次为G3型。
- 赵晓南李鸿钧吴晋元张光明易山杨星郜岩贾琴妹木国法孙茂盛
- 关键词：轮状病毒婴幼儿基因型
- 甲/戊型肝炎重组抗原的表达、纯化及与传统甲肝疫苗免疫原性的比较被引量：1
- 2010年
- 目的比较基因工程重组抗原与传统疫苗的免疫原性;探讨同一载体表达不同抗原的能力和抗原间的相互作用。方法将编码甲型肝炎病毒Vp1aa24-171和戊型肝炎病毒ORF2aa431-615的重组表达质粒pBV220-EAAg342及pBV220-AEAg342转化入大肠杆菌BL-21,筛选出高效表达的菌种进行目的蛋白的表达。用DEAE-sepharose FF和CM-sepharoseFF离子层析交换柱纯化表达重组蛋白,采用SDS-PAGE、Western blotting方法进行分析鉴定。用纯化的重组蛋白及传统甲肝疫苗灭活疫苗与减毒活疫苗免疫小鼠,比较特异性抗体的产生水平。结果表达的重组蛋白相对分子质量约为36000,表达量约占菌体总量的25%;且重组嵌合抗原EAAg342可以形成直径10～20nm的类病毒(virus-like particles,VLP)颗粒。Western blotting证实2种重组蛋白均能分别与甲型肝炎和戊型肝炎患者阳性血清发生特异性反应。免疫小鼠后可诱导产生高滴度的抗戊肝特异性抗体;而抗甲肝特异性抗体水平与传统甲肝疫苗相比较低。结论使用原核系统表达的甲/戊肝重组抗原能够高效表达,2种不同的融合蛋白均分别具有良好的抗原性和免疫原性,具有开发双价疫苗及同时诊断甲型戊型肝炎试剂盒的前景。
- 庞媛玉李鸿钧奎翔谢天宏张光明孙茂盛
- 关键词：甲型肝炎病毒戊型肝炎病毒免疫原性
- 抗猴SV40病毒感染灭活疫苗及制备方法
- 抗猴SV40病毒感染灭活疫苗及制备方法，属于动物疫苗。本发明目的是对SV40病毒进行增殖、灭活、纯化，并制备抗猴SV40病毒感染灭活疫苗。本发明疫苗为β-丙内脂灭活的SV40病毒及佐剂，两者体积比为2∶1～3∶2，缓冲液...
- 孙茂盛李鸿钧和占龙张光明谢天宏曹增孙雯佳孙强明唐永明蒋鸿超
- 文献传递
- 轮状病毒灭活疫苗和减毒活疫苗序贯免疫的体液免疫应答效果被引量：1
- 2013年
- 目的:评价采用轮状病毒灭活疫苗进行初始免疫,减毒活疫苗进行加强免疫的序贯免疫方案的体液免疫应答效果。方法:将实验小鼠随机分为4组(口服疫苗组、序贯疫苗组、口服对照组及序贯对照组),按相应方案免疫后,ELISA检测血清轮状病毒特异性IgG和IgA、肠道轮状病毒特异性IgA;微量中和实验检测血清病毒特异性中和抗体;同时采用ELISA分析口服活疫苗后病毒排出情况。结果:与对照组相比,序贯疫苗组小鼠产生的轮状病毒特异性血清IgG、IgA、中和抗体及肠道IgA水平显著升高。与口服疫苗组相比,序贯疫苗组的免疫方案诱发的轮状病毒特异性血清IgG、IgA、中和抗体水平显著升高,肠道IgA水平两组间没有显著差异。同时,与口服疫苗组相比,序贯疫苗组中轮状病毒灭活疫苗进行的初始免疫未影响第一次口服活疫苗后病毒的排出量和排出时间,但序贯疫苗组第二次口服活疫苗后病毒的排出量迅速减少,排毒时间快速缩短,与口服疫苗组第三次服苗后病毒的排出量和排出时间相似。结论:轮状病毒灭活疫苗和减毒活疫苗序贯免疫可有效诱发小鼠全身和黏膜局部的体液免疫应答,该方案将有可能成为轮状病毒疫苗临床应用的候选方案。
- 张标佟琳易山张光明李鸿钧孙茂盛陈东
- 关键词：轮状病毒灭活疫苗活疫苗免疫效果
- 表达轮状病毒VP4抗原的重组腺病毒对新生小鼠的被动免疫保护作用被引量：9
- 2007年
- 目的探讨表达轮状病毒VP4抗原的重组腺病毒(Ad5/VP4)对新生小鼠的被动免疫保护作用。方法在293细胞上扩增表达猴轮状病毒SA11株VP4抗原的重组腺病毒并纯化。将轮状病毒抗体阴性的小鼠交配后的雌性小鼠,分别通过肌肉注射、滴鼻和口服免疫纯化后的重组腺病毒,生产后第7天和第8天,用轮状病毒SA11(1·0×106PFU)口服攻击乳鼠2次,观察出现腹泻症状的乳鼠的比例,并用ELISA检测母鼠的血清以及乳鼠胃囊乳块中的轮状病毒特异性抗体。同时以含有部分E1区基因的腺病毒5型载体(Ad5)作为对照。结果经3种不同途径免疫母鼠后,在血清和乳汁中均能检测到轮状病毒VP4特异性抗体。经滴鼻免疫的母鼠喂养的乳鼠,经攻击后保护率为100%(11/11);经肌肉注射免疫的母鼠喂养的乳鼠,经攻击后保护率为30%(3/10);经口服免疫的母鼠喂养的乳鼠,经轮状病毒攻击后保护率为80%(8/10)。对照组的小鼠全部出现了腹泻症状。结论表达轮状病毒VP4抗原的重组腺病毒经滴鼻免疫母鼠后,能在乳汁中产生特异性的IgA和IgG抗体,并能保护新生小鼠对抗轮状病毒的攻击,保护率达100%。
- 刘馨张光明李鸿钊谢天宏孙茂盛
- 关键词：轮状病毒重组腺病毒
- 滴鼻、口服及肌肉注射途径对轮状病毒VP4重组腺病毒免疫小鼠的体液免疫效果比较被引量：4
- 2007年
- 目的:比较滴鼻、口服及肌肉注射免疫途径,对重组腺病毒刺激小鼠产生的体液免疫反应效果。方法:剂量为108PFU的表达轮状病毒VP4的重组腺病毒经滴鼻、口服、肌肉注射分别免疫BALB/c小鼠,相同免疫剂量、免疫途径加强免疫2次,采集小鼠的血清、粪便及小肠样本,用ELISA检测轮状病毒VP4特异的IgG和IgA。实验设立了腺病毒载体对照组和PBS对照组。结果:经3种途径免疫的重组腺病毒都刺激小鼠产生了轮状病毒VP4特异的血清和肠道抗体,与对照组相比,有统计学意义(P<0.05)。在免疫后的第7周,滴鼻组血清VP4特异IgG达到最高值(GMT=15000),在免疫后的第8周,肠道抗体达到最高值(GMT),其中IgG为74.8,IgA为36。结论:滴鼻免疫是3种免疫途径中最有效的。
- 刘馨张光明孙茂盛
- 关键词：重组腺病毒免疫途径体液免疫反应
