张大为
- 作品数：31 被引量：292H指数：10
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省教育厅科研计划项目陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 铁皮石斛咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶基因的分离与表达分析被引量：6
- 2014年
- 目的分离珍稀濒危药用植物铁皮石斛咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶（caffeoyl CoA O-methyltransferase,CCoAOMT）基因（DoOMT）并进行生物信息学和表达模式分析。方法采用RT-PCR和RACE技术获取基因cDNA全长;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域和三维建模等分子特性;用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助实时定量PCR检测基因表达模式。结果分离到DoOMT（GenBank注册号KF876839）,cDNA全长1 005 bp,编码一条由239个氨基酸组成的多肽,相对分子质量为2.708×10-4,等电点5.03;DoOMT蛋白不含跨膜域和信号肽,具有氧甲基转移酶family 3、甲基转移酶的保守结构域（13~238、31~238）和8个保守基序;DoOMT与植物CCoAOMTs蛋白一致性为49.4%~78.7%,所在分支隶属于CCoAOMTs分子进化的1b类群,与单子叶植物香草亲缘关系最近;DoOMT基因转录本在石斛根、茎、叶器官中为组成型表达,茎中相对表达量较高,为叶中的4.562倍,根和叶中无显著差异。结论铁皮石斛CCoAOMT基因DoOMT的分子特征为进一步研究其在铁皮石斛次生代谢和生长发育过程中的作用奠定基础。
- 张岗胡本祥张大为陈伟郭顺星
- 关键词：铁皮石斛实时定量PCR
- 肺癌肉瘤12例临床分析被引量：16
- 2000年
- 目的了解肺癌肉瘤的临床、病理特点，探讨其可能的组织学来源及合理的治疗方式。方法：对12例肺癌肉瘤患者的临床资料进行回顾性分析。结果12例患者均行手术治疗，手术切除率、手术并发症发生率及手术死亡率分别为100．0％、16．7％和8．3％。光镜下表现为癌与肉瘤成分混合存在，癌的成分及肉瘤的成分多种多样。本组患者的术后5年生存率为33．3％，已证实死亡的5例患者除1例死于术后并发症外，其余均死于远处转移。结论：肺癌肉瘤是一种恶性程度并不高于一般肺癌的恶性肿瘤。手术切除是其首选的治疗手段。手术指征应包括Ⅲa期、部分Ⅲb期及Ⅳ期患者。其组织学来源除上皮来源外，不除外个别非上皮来源的可能。
- 王永岗汪良骏张德超张宏图张汝刚张大为
- 关键词：肺癌肉瘤病理特点外科手术
- 西藏药用植物螃蟹甲可培养内生真菌的分离、鉴定及抗HIV-1整合酶链转移活性研究被引量：6
- 2013年
- 从西藏药用植物螃蟹甲(Phlomis younghusbandii Mukerjee)的叶和茎中分离得到52株内生真菌。经分子鉴定(基于ITS序列和28S序列),内生真菌分属于Phoma、Chaetosphaeronema、Fusarium、Leptosphaeria等12属,其中拟茎点霉属(Phoma)为其优势菌群。使用原核表达的可溶型一型人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiency virus type 1,HIV-1)的整合酶(integrase,IN),对52株内生真菌的发酵产物进行体外抗HIV-1整合酶链转移反应活性试验,结果发现,来自Chaetosphaeronema属真菌的7个样品对整合酶链转移反应表现出强烈的抑制作用,其对应的IC50值分别为6.60、5.20、2.86、7.86、4.47、4.56和3.23μg·mL-1。该研究表明,螃蟹甲内生真菌在发现抗HIV-1整合酶活性物质方面有进一步的开发价值。
- 张大为赵明明陈娟李超郭顺星
- 关键词：螃蟹甲内生真菌HIV-1整合酶抑制剂筛选
- 珍稀濒危药用铁皮石斛HMGR基因的克隆和特征分析被引量：20
- 2014年
- 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzyme—Areductase，HMGR）是甲羟戊酸途径中的第一个限速酶，在植物细胞萜类物质合成代谢过程中发挥重要作用。但是，HMGR基因在珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛类萜生物合成途径中的作用尚不清楚。本研究利用RT-PCR和RACE技术，首次从铁皮石斛中克隆到一个HMGR基因，命名为DoHMGRl（GenBank注册号JX272632）。DoHMGRl基因eDNA全长2071bp，编码一条由562个氨基酸组成的多肽，分子量59-73kD，等电点6-18。DoHMGRl蛋白包含HMGR蛋白家族的4个保守结构域（63-561、147-551、268-383、124-541）和两个跨膜基序（42-64、85～107）。DoHMGR1基因与多种植物HMGR基因相似性很高（67％～89％），与万代兰、水稻、玉米等单子叶植物亲缘关系较近。DoHMGR1基因具有组织表达特异性，其转录本在石斛根和茎中表达量较高，为叶中的2-13和1-98倍。DoHMGR1基因的分子鉴定为进一步解析该基因在铁皮石斛萜类物质合成代谢途径中的分子调控作用奠定基础。
- 张琳王继涛张大为张岗郭顺星
- 关键词：铁皮石斛基因表达实时定量PCR
- 螃蟹甲内生真菌Chaetosphaeronema sp.的化学成分研究
- 2014年
- 目的研究一株来源于藏药螃蟹甲内生真菌PHY-24的化学成分。方法采用麦麸培养基,对内生真菌PHY-24进行放大培养,通过硅胶柱色谱、MCI柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、高效液相色谱等对其发酵液中的化学成分进行分离纯化,利用NMR、MS等波谱方法进行化学成分的结构鉴定,并测定这些成分抗HIV-1整合酶链转移反应活性。结果从内生真菌PHY-24发酵液的乙酸乙酯提取部分分离并鉴定了4个化合物,分别是:integrastatin B(1)、2-乙酰基-3,5-二羟基-苯乙酸(2)、curvulin(3)、O-methylcurvulinic acid(4)。其中化合物(1)和(2)具有抗HIV-1整合酶链转移反应活性,其IC50分别为6.22和75.1μmol/L。结论 4个化合物均为从此属真菌中首次分得,其中化合物(1)、(2)具有抗HIV-1整合酶链转移反应活性。化合物(2)的活性为首次报道。
- 温欣张大为郭顺星王春兰
- 关键词：内生真菌化学成分螃蟹甲
- 胸段食管鳞癌淋巴结转移特点及临床意义被引量：136
- 2000年
- 目的 了解胸段食管鳞癌淋巴结转移特点及对预后的影响 ,探讨合理的淋巴结清扫范围。方法 对 2 43例单纯手术切除胸段食管鳞癌患者的临床资料进行回顾性分析。结果 淋巴结转移率 45 .3% ,转移度 10 .5 % ,表现为沿食管周的上下“双向性”转移。影响淋巴结转移的因素为肿瘤浸润深度和肿瘤分化 ,肿瘤长度则影响不大。有淋巴结转移的患者 5年生存率为 16 .4% ,明显低于无淋巴结转移患者的 5 1.9% (P <0 .0 1)。淋巴结转移个数对患者预后影响不大。结论 淋巴结转移是影响食管癌切除患者预后的主要因素。胸上、中、下段食管癌表现出不同程度的上、下行转移 ,因此应采取不同的淋巴结清扫范围。对胸下段癌行胸、腹二野清扫即可 ,对病变较早的胸中、上段癌则应行颈、胸。
- 王永岗汪良骏张德超张汝刚张大为孟平均
- 关键词：食管肿瘤鳞状细胞癌淋巴结转移瘤预后
- 铁皮石斛促分裂原活化蛋白激酶基因DoMPK4的分离和差异表达分析(英文)被引量：7
- 2014年
- 促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPKs）是所有真核生物中普遍存在的一种重要的信号转导组分,在植物生理代谢、生长发育和激素反应等多项途径中起重要调控作用。本研究利用RT-PCR、RACE方法,从珍稀濒危兰科药用铁皮石斛中分离到一个新的促分裂原活化蛋白激酶基因,命名为DoMPK4（GenBank注册号JX297597）。DoMPK4基因cDNA全长1 518 bp,编码一条由369个氨基酸组成的肽链,相对分子质量42.42 kD,等电点为5.55。推定的DoMPK4蛋白不含信号肽,具有一个跨膜域（214~232）,包含MAPK蛋白家族保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性位点（158~170）和MAP激酶的保守位点（71~174）。多序列比对表明,DoMPK4与多种植物MAPKs蛋白一致性较高（74.9%~80.6%）。进化树结果显示,DoMPK4隶属于植物MAPKs蛋白的Group A分支,与单子叶植物亲缘关系较近。实时定量PCR分析表明,DoMPK4在石斛根、茎、叶、种子和原球茎等5种器官中的相对表达量有显著差异。DoMPK4转录本在原球茎中的表达量为叶中的17.65倍,种子、根和茎等次之,分别为5.84、2.28和1.64倍。DoMPK4在原球茎较萌发种子中的高表达量特征,提示该基因在原球茎发育过程中起一定作用。
- 张岗李依民胡本祥张大为郭顺星
- 关键词：铁皮石斛激酶原球茎实时定量PCR
- 铁皮石斛S-腺苷酸脱羧酶基因DoSAMDC1的克隆及特征分析被引量：14
- 2013年
- S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosyl-L-methionine decarboxylase,SAMDC)是多胺合成的关键酶,通过调节多胺的代谢途径参与植物的多项生理生化过程。本文利用cDNA末端快速克隆技术(RACE),首次从铁皮石斛共生萌发种子中分离得到一个新的SAMDC基因,命名为DoSAMDC1(GenBank注册号JX966243),并对其编码蛋白的理化性质、保守结构域等特征进行分析。生物信息学分析表明,DoSAMDC1基因的全长为1979bp,涵盖tiny-uORF、small-uORF和mainORF3个植物SAMDC基因特征ORF。mORF编码一条368个氨基酸的肽链,预测分子质量为40.7kD,等电点为5.2,编码蛋白不含信号肽,具有22个氨基酸的跨膜域(89～110位),具有植物SAMDC的典型结构特点,包括酶原剪切位点、PEST结构域及催化功能必须的氨基酸。序列比对及系统发育树分析结果表明DoSAMDC1与单子叶植物SAMDC具有很高的同源性,与双子叶植物的亲缘关系较远。应用实时荧光定量PCR对DoSAMDC1基因在石斛不同组织中的表达模式分析发现,该基因在未接菌的植物组织中表达变化差异不大,在接菌共生萌发的植物种子中显著上调表达,为未萌发种子的2.74倍,具有受真菌侵染诱导表达的特性,揭示其可能通过参与多胺调控途径在植物?真菌共生方面发挥作用。
- 赵明明张岗张大为郭顺星
- 关键词：铁皮石斛共生萌发
- 铁皮石斛DoMAPK5基因的克隆及表达特征分析被引量：5
- 2016年
- 目的克隆及分析铁皮石斛DoMAPK5基因的表达特征。方法利用cDNA末端快速克隆技术(RACE),首次从铁皮石斛接菌共生萌发种子中分离得到1个新的MAPK基因,对其编码蛋白的理化性质、保守结构域等特征及进行了分析。并应用荧光定量PCR对DoMAPK5基因在石斛不同组织中表达模式分析。结果 DoMAPK5基因(Gen Bank注册号KJ472788),全长为2184bp、编码一条597个氨基酸的肽链,预测分子量为67.39KDa,等电点为9.28,编码的蛋白均不含信号肽,在210-232位具有23个氨基酸的跨膜域,具有MAPK蛋白家族保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的结构域及MAPK位点。序列比对及系统发育树分析结果表明DoMAPK5基因与葡萄MAPK基因均具有很高的相似性(82%),与水稻MAPK10亲缘关系最近。应用荧光定量PCR对DoMAPK5基因在石斛不同组织中表达模式分析显示,该基因在未接菌的植物组织中属组成型表达,在接菌共生萌发的植物组织中显著上调,为未萌发种子的10.49倍。结论 DoMAPK5在植物组织中属于组成型表达,具有受菌根真菌诱导表达的特征。
- 赵明明张岗张大为李标郭顺星
- 关键词：铁皮石斛共生萌发
- LEDGF／p75蛋白的可溶性表达、纯化及功能研究被引量：1
- 2014年
- HIV-1整合酶(integrase,IN)是病毒复制过程中的一个关键酶,其与宿主晶状体上皮源性生长因子p75(lens epithelium-derived growth factor p75,LEDGF/p75)的蛋白-蛋白相互作用是筛选抗病毒药物的一个重要靶点。为开展以IN-LEDGF/p75相互作用为靶点的抑制剂研究,本研究构建了LEDGF/p75蛋白重组质粒,在原核细胞中进行了可溶性表达和功能研究。根据大肠杆菌密码子偏爱性,全合成高利用率密码子的LEDGF/p75基因序列,并克隆到表达载体pGEX-4T-1中构建重组质粒。在大肠杆菌中优化表达LEDGF/p75蛋白,经SDS-PAGE鉴定和亲和色谱纯化蛋白,采用酶联免疫吸附实验方法 (ELISA)测定了LEDGF/p75蛋白的生物学活性。结果显示,构建的重组质粒获得高效稳定的可溶性表达,ELISA证实体外表达的LEDGF/p75蛋白能够与HIV-1 IN相互作用,并促进IN链转移反应的完成。本研究为建立以LEDGF/p75-IN相互作用为靶点的抗HIV药物筛选平台打下了基础。
- 张大为何红秋郭顺星
- 关键词：P75基因表达HIV-1整合酶ELISA
