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棉铃虫幼虫取食Vip3Aa蛋白后的中肠组织病理变化被引量：7: 2012年; 为了进一步明确Vip3Aa的作用机制,利用透射电镜观察了棉铃虫4龄幼虫取食含Vip3Aa蛋白饲料后中肠杯状细胞的病理变化,并比较了其病变与取食含Cry1Ac饲料后棉铃虫组织病变的差异。取食含Vip3Aa饲料后,棉铃虫幼虫的中肠杯状细胞逐渐发生病变,主要表现为:微绒毛肿胀、脱落;细胞核核膜界限不清晰,染色质分布不均匀;线粒体变形、数量减少,内脊不清晰;内质网杂乱不规则、数量减少。与取食Cry1Ac的棉铃虫相比,取食Vip3Aa的棉铃虫中肠杯状细胞发生病变较为缓慢,在取食12h后才发现明显病变,随着取食时间的增加病变越来越明显;而取食Cry1Ac的棉铃虫2h后中肠杯状细胞就出现明显病变。本研究可为Vip3Aa作为新毒素策略的重要蛋白在棉铃虫Helicoverpa armigera综合防治中更好地发挥作用提供理论依据。; 张彦梁革梅张丽丽魏纪珍; 关键词：棉铃虫 CRY1AC 中肠组织病理变化

棉铃虫对Cry1Ac抗性的稳定性及其对适合度的影响被引量：5: 2012年; 为明确棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)对苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)Cry1Ac毒蛋白抗性的稳定性及其适合度变化,利用生物测定的方法研究了Cry1Ac抗性品系棉铃虫转到正常饲料饲养后的抗性衰退及再次筛选后抗性的恢复情况,并比较了敏感、抗性和抗性衰退后各品系间的适合度差异。在失去选择压的情况下,高抗品系棉铃虫对Cry1Ac的抗性迅速衰退,经过4代后抗性水平由最初的3626.67倍下降到1436.67倍;到第12代时抗性水平已低于10倍,随后品系保持较稳定的低抗水平;当重新进行抗性再筛选时,其抗性水平可快速恢复,抗性倍数快速回升,5代后恢复到1123.33倍。与敏感品系相比,高抗棉铃虫品系的适合度明显降低,相对适合度仅为0.33,但转到正常饲料连续饲养14代后,棉铃虫适合度明显上升,相对适合度为0.87,主要表现为卵孵化率和幼虫存活率等显著提高。; 邹朗云李艳梅张彦魏纪珍梁革梅郭予元; 关键词：棉铃虫 CRY1AC 抗性稳定性适合度

营养期杀虫蛋白Vip3Aa对棉铃虫中肠组织病理变化的研究: 将敏感品系棉铃虫的4龄幼虫(Helicoverpa armigera Hübner)饥饿24h后，分别饲喂正常饲料和含Vip3Aa毒素的饲料，在饲喂不同时间后取中肠固定，利用透射电镜观察棉铃虫取食不同饲料后中肠...; 张彦邹郎云梁革梅吴孔明郭予元; 关键词：棉铃虫 AA 中肠组织病理变化

Vip3Aa及Cry1Ac对棉铃虫幼虫多种酶活力的影响被引量：2: 2012年; 为了明确Vip3Aa的作用机制,为其作为新毒素策略重要蛋白的应用提供理论依据,本文比较了Vip3Aa、Cry1Ac对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)主要蛋白酶、解毒酶、APN活性的影响,并研究了Vip3Aa和Cry1Ac共同使用对几种酶活力的作用。室内生测结果表明,Vip3Aa对棉铃虫的杀虫效果低于Cry1Ac,但Vip3Aa对棉铃虫幼虫生长有明显的抑制作用。取食含Cry1Ac、Vip3Aa或Cry1Ac+Vip3Aa饲料的棉铃虫,总蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性很快升高;但经Cry1Ac处理12 h后这2种酶活性与对照差异不显著或低于对照,而取食含Vip3Aa饲料的棉铃虫酶活力显著高于对照的时间明显延长,而且类胰蛋白酶活性也显著高于对照;表明Cry1Ac降解速度比Vip3Aa快,可能是由于降解2种蛋白参与的酶系存在差异,同时Cry1Ac+Vip3Aa混用可以延长蛋白被酶解的时间。谷胱甘肽S-转移酶和α-乙酸萘酯酶活性在棉铃虫取食含Vip3Aa、Cry1Ac或Cry1Ac+Vip3Aa蛋白的饲料后活性升高,说明这2种酶可能参与了对Cry1Ac、Vip3Aa的解毒作用。但Cry1Ac、Vip3Aa对氨肽酶活性影响不大,可能在毒蛋白发挥毒性的过程中与氨肽酶活力变化无关。; 张彦梁革梅高珍; 关键词：棉铃虫 CRY1AC 蛋白酶解毒酶

棉铃虫中肠cDNA文库的构建及EST分析被引量：3: 2011年; 中肠是苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)发挥作用的主要部位,中肠上很多蛋白被认为是Bt毒素的结合蛋白。为了探索棉铃虫Helicoverpa armigera对Bt的抗性机制,我们运用RNA转录过程中的5'末端转换机制(Switching Mechanism at5'end of the RNA Transcript,SMART)技术构建了棉铃虫中肠的cDNA文库。先提取棉铃虫5龄幼虫中肠组织的总RNA,合成双链cDNA,经过均一化处理后,酶切、连接载体、转化到大肠杆菌Escherichia coli感受态细胞,最后进行滴度测试、文库扩增并进行EST序列测定。对该文库质量分析表明:文库滴度为2×106pfu/mL,重组率为100%,平均插入片段大于1kb,全长率为50%。最终成功得到1098条表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)序列,经Phrap程序聚类拼接后得到789条单基因簇(unigene),包括132个重叠群(congtigs)和657个单拷贝(singlets)。将聚类拼接后的789条ESTs序列在NT,NR和SWISSPORT库中进行本地化搜索,比对后发现:218条序列(27.62%)没有注解;119条序列(15.08%)注解不明确;452条序列(57.29%)有功能注解,并表达300多种基因产物。构建的文库各项指标均达到要求,该文库的构建为棉铃虫中肠各类基因的克隆及功能分析奠定了基础。; 邹朗云曹广春张谦张彦梁革梅吴孔明郭予元; 关键词：棉铃虫中肠 CDNA文库

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张彦