张明
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南华大学医学院病原生物学研究所更多>>
- 发文基金：湖南省教育厅重点项目湖南省医药卫生科研计划课题湖南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd在Hela细胞中的表达及鉴定
- 2005年
- 目的构建梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白甘油磷酸二酯磷酸二酯酶基因(Gpd)的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Gpd,鉴定其在Hela细胞的表达,为开展Tp DNA疫苗动物实验打下基础。方法用PCR从Tp Nichols株基因组中扩增Gpd基因,构建真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-Gpd,脂质体介导转染入Hela细胞,以免疫组化及Western-blot检测在Hela细胞中的表达。结果双酶切及DNA测序显示重组质粒含有1 059 bp的目的基因片段,读码框架正确,无突变。该重组质粒在Hela细胞能有效表达分子量为41 kDa的目的蛋白,重组蛋白能与梅毒螺旋体阳性血清反应。结论构建的质粒pcD-NA3.1(+)-Gpd成功地在体外真核细胞中表达。
- 张明赵飞骏张晓红刘双全
- 关键词：梅毒螺旋体DNA疫苗真核表达
- HBVpreS2真核载体的构建及其表达
- 2006年
- 目的扩增乙型肝炎病毒(HBV)前S2基因(preS2),并构建其真核表达载体,为研究HBV树突状细胞疫苗奠定实验基础。方法从慢性乙型肝炎患者血清中提取HBVDNA,用聚合酶链反应技术扩增全长preS2基因,将其克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,经PCR、酶切和DNA测序鉴定筛选阳性克隆,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-preS2,并将其转染巨噬细胞48h后,ELISA检测细胞裂解液中preS2的表达。结果从慢性乙型肝炎患者血清抽提的DNA中扩增得到约860bp大小的目的片段,preS2基因片段正确插入pcDNA3.1(+)载体,得到HBVpreS2真核表达载体pcDNA3.1(+)-pre2。结论成功地构建了含preS2基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-preS2,并能在巨噬细胞中表达目的蛋白HBVpreS2。
- 陈熙李金丽王鑫张明詹利生万艳平
- 抗梅毒螺旋体重组蛋白Tp0453单克隆抗体的制备及应用研究被引量：2
- 2009年
- 目的利用基因重组抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0453的单克隆抗体(mAb),评价其在早期梅毒Tp抗原诊断中的应用。方法以重组蛋白Tp0453免疫BALB/c小鼠,将免疫后的小鼠脾脏与SP2/0细胞融合,用间接ELISA和Western Blot检测杂交瘤细胞分泌的抗体,并对阳性细胞经亚克隆建株;体内诱生腹水法制备抗体,用硫酸铵沉淀法对mAb进行纯化并测定其亚类和效价;以自制的mAb建立间接免疫荧光法(IIF)检测梅毒患者分泌物标本,并与镀银染色的检测结果进行比较。结果获得4株稳定分泌抗重组蛋白Tp0453的杂交瘤细胞株,分别命名为15B2、8B9、9C6和2F8,其mAb效价分别为1∶25000、1∶8000、1∶50000、1∶10000;2F8杂交瘤细胞分泌的mAb为IgG2b,其他3株交瘤细胞分泌的mAb均为IgG1;4株mAb腹水经SDS-PAGE均显示出一条分子量约为50kDa的重链条带和一条分子量为26kDa的轻链条带;4株杂交瘤细胞染色体数在90～108范围内变化。IIF显示自制的mAb能与天然的Tp抗原结合,检测86例分泌物标本,IIF与镀银染色的符合率为95.3%。结论本实验成功获得了抗Tp0453重组蛋白的mAb,该mAb能识别天然的Tp0453抗原,有望应用于早期梅毒感染的抗原检测。
- 莫小辉吴移谋张明顾伟鸣刘双全赵飞骏
- 关键词：梅毒螺旋体单克隆抗体
