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张秀华: 作品数：41 被引量：163H指数：7; 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>; 发文基金：国家科技攻关计划吉林市科技发展计划项目黑龙江省博士后科研启动基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅢA基因的克隆和表达: 以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型参考株基因组DNA为模板,PCR方法扩增出apxⅢA基因3.1kb的片段,扩增产物克隆于pMD18-T中,重组质粒经酶切鉴定后进行核苷酸序列测定,并与GenBank中不同血清型胸膜肺炎放...; 邵美丽刘思国王春来郭洋张秀华郭设平佟恒敏; 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌; 文献传递

一种诊断牛结核病的重组抗原蛋白及其制备方法: 本发明公开了一种新的诊断牛结核病的重组抗原蛋白，该重组抗原蛋白是由牛分枝杆菌MPB70抗原蛋白、MPB83抗原蛋白和ESAT－6抗原蛋白依次连接而形成的融合蛋白，其中所述的MPB70抗原蛋白具有序列表SEQ ID NO：...; 刘思国郭设平王春来张秀华郭洋邵美丽; 文献传递

牛分枝杆菌MPB83基因的原核表达及免疫活性分析被引量：1: 2005年; 利用PCR技术,以牛型分枝杆菌(M.bovis)Vallee菌株的全基因组DNA为模板,扩增出了一条600bp的MPB83基因片段,将其克隆至pMD18T载体中,经核苷酸序列测定确证后,KpnI/EcoRI双酶切,然后亚克隆到原核表达载体pET30a的相同酶切位点,构建表达质粒pETMPB83,将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后SDSPAGE检测表达情况,重组质粒pETMPB83在30kDa处有一特异表达带,与预计大小相符。经Ni柱纯化后,Westernblot检测纯化蛋白具有免疫活性,用纯化的该蛋白进行动物(兔)接种制备抗血清,用Westernblot和ELISA检测该抗血清的效价和特异性,结果表明特异性较好。; 张秀华刘思国王春来郭设平郭洋邵美丽宫强彭永刚沈国顺; 关键词：牛分枝杆菌 BLOT 抗血清 ELISA

胸膜肺炎放线杆菌4型菌毛亚单位基因apfA特异性片段的克隆和表达被引量：1: 2006年; 以猪胸膜肺炎放线杆菌血清型7型国内分离株25-4株基因组DNA为模板,PCR扩增其apfA特异性基因片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX-apfA,转化到感受态大肠杆菌DE3中,以IPTG进行诱导,进行SDS-PAGE电泳。结果表明,25-4株apfA基因与基因库中标准7型apfA基因的同源性达到98%,所表达的融合蛋白相对分子质量约为42 000,与预测值相符。apfA特异性基因片段的成功克隆和表达为猪胸膜肺炎放线杆菌病致病机理的研究及新型疫苗的研制打下了基础。; 郭洋刘思国王春来张秀华彭永刚宫强杜绍范; 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌菌毛克隆

一种诊断牛结核病的重组抗原蛋白及其制备方法: 本发明公开了一种新的诊断牛结核病的重组抗原蛋白，该重组抗原蛋白是由牛分枝杆菌MPB70抗原蛋白、MPB83抗原蛋白和ESAT-6抗原蛋白依次连接而形成的融合蛋白，其中所述的MPB70抗原蛋白具有序列表SEQ IDNO：1...; 刘思国郭设平王春来张秀华郭洋邵美丽; 文献传递

检测牛结核抗体新型ELISA方法的建立及应用被引量：5: 2007年; 利用分子克隆和Splicing by overlapping extension(SOE)技术,表达了重组蛋白rM70-83-E6,Western blot分析rM70-83-E6具有很好的特异性。以蛋白rM70-83-E6作为诊断抗原建立了间接ELISA方法,ELISA诊断方法的判定标准,即S/P≥0.5为阳性,S/P<0.4为阴性,0.5>S/P≥0.4为可疑。ELISA方法的特异性为96.0%、敏感性为69.4%。对67份PPD皮试阳性和50份PPD皮试阴性(117份)血清样品进行了检测,并与PPD皮试比较。67份PPD皮试阳性血清样品中有46份为ELISA检测阳性,阳性符合率为68.7%,50份PPD皮试阴性牛血清都为阴性,阴性符合率为100%,本ELISA方法与PPD皮试诊断方法总复合率为82.1%。研究表明,ELISA方法具有很好的开发和应用前景。; 郭设平刘思国王春来宫强邵美丽张秀华郭洋; 关键词：融合蛋白牛结核病间接ELISA

坏死梭杆菌白细胞毒素基因的BSBSE片段的原核表达及抗血清制备: 2008年; 本研究以国内分离的牛源坏死梭杆菌F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增BSBSE片段,克隆到pMD18-T载体上,鉴定并测序正确后,构建pET32a-BSBSE表达质粒,转化E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导、SDS-PAGE检测重组蛋白表达、Western blot检测重组蛋白反应原性。以该重组蛋白免疫兔制备抗血清,经间接ELISA检测抗血清效价。结果表明,PCR扩增得到1100bp的BSBSE片段,以此片段构建了pET32a-BSBSE表达质粒,经诱导后获得了目的蛋白表达,以Western blot检测该重组蛋白证明为本研究的目的蛋白,并且与抗体具有反应原性。以间接ELISA检测该重组蛋白免疫兔制备的抗血清效价达105。研究结果将为坏死梭杆菌毒力因子(lkt)的深入研究奠定了物质基础。; 张秀华陈立志赵利芳刘晓颖路伟; 关键词：坏死梭杆菌

牛分枝杆菌mpb64基因的克隆、鉴定及其表达被引量：4: 2005年; 以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增mpb64基因,纯化PCR产物并与 pDM18-T载体连接、转化,经酶切及核苷酸序列鉴定为正确后,酶切产物亚克隆到原核表达载体 pET30a(+)的KpnI／EcoRI位点,构建重组表达质粒pET30a+-mpb64,转化到大肠杆菌DE3内,以 IPTG进行诱导,终浓度为1mmol／L,诱导产物进行SDS-PAGE电泳。结果表明,PCR方法成功扩增出mpb64基因,核苷酸序列测定验证了其正确性,重组表达质粒表达的pET30a+-mpb64融合蛋白相对分子量为30.4kDa,与实测相符。牛分枝杆菌pET30a+-mpb64的成功表达为牛结核病的诊断及新型疫苗的研究奠定了基础。; 张秀华刘思国宫强王春来王牟平彭永刚沈国顺郭洋郭设平; 关键词：SDS-PAGE电泳核苷酸序列测定 IPTG T载体

牛分枝杆菌三价串联抗原基因的原核表达及其免疫学活性研究: 应用PCR方法从牛分枝杆菌vallee株基因组中扩增获得MPB70、MPB83和ESAT-6三个目的基因片段,利用基因搭桥和连接技术,将三基因串连于同一表达载体pET32(a)中,每个基因之间以连接肽相隔.利用大肠杆菌表...; 郭设平刘思国张秀华王春来宫强郭洋邵美丽; 关键词：牛分枝杆菌融合基因原核表达免疫学活性 PCR方法; 文献传递

CpG基序对坏死梭杆菌免疫原的免疫佐剂效应实验研究被引量：1: 2006年; 分别用坏死梭杆菌来源CpG、弗氏完全佐剂、氢氧化铝佐剂与坏死梭杆菌免疫原配制的抗原免疫小白鼠,通过检测坏死梭杆菌免疫原抗体变化,来探讨CpG对坏死梭杆菌免疫原的佐剂效应。试验结果表明,坏死梭杆菌来源CpG有较好的免疫佐剂效应,可望进一步研制成为坏死梭杆菌疫苗佐剂成分。; 刘艳环杨福合苗利光刘晓颖张秀华王志刚; 关键词：坏死梭杆菌佐剂