张胜利
- 作品数：21 被引量：16H指数：2
- 供职机构：上海市儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金上海市教育委员会创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人羊水来源干细胞参与小鼠损伤肌肉修复的实验研究
- 2011年
- 目的研究人羊水来源干细胞(human amniotic fluid colony derived stem cells,hAFCSCs)是否参与小鼠肌肉损伤修复过程,探讨应用hAFCSCs治疗肌肉损伤的方法及可行性。方法 B超引导下穿刺抽取人孕中期羊水,体外分离、培养得到hAFCSCs,取第6～8代细胞备用,同时提取总RNA行RT-PCR鉴定干细胞相关基因。取16只6～8周龄Nod/Scid小鼠,体重20～24 g,利用心肌毒素联合X线照射建立双侧胫骨前肌肌肉损伤模型,右侧胫骨前肌内注射hAFCSCs(3.3×107个/mL)30μL作为实验组,左侧胫骨前肌同法注射等量完全培养液(含15%FBS、18%Chang B、2%Chang C、1%青链霉素、1%L-谷氨酰胺的α-MEM培养基)作为对照组。细胞移植术后2、4周各处死小鼠8只,取材行肝细胞生长因子受体(c-Met)、成肌调节因子(Myf-5)、层粘连蛋白(Laminin)、结蛋白(Desmin)与人特异性细胞核有丝分裂器(NuMa)组织免疫双重荧光染色观察。结果原代hAFCSCs培养5～7 d后可见细胞克隆形成;8～10 d后可挑取细胞形态均一的克隆进行稳定传代,6～8代后可获得足量的干细胞。RT-PCR检测示所获得hAFCSCs体外扩增培养至第6代仍表达干细胞相关基因。细胞移植术后2周免疫双重荧光染色示,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,未检测到hAFCSCs表达肌源性细胞相关表型;术后4周,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,部分细胞同时表达NuMa和c-Met、Myf-5,部分肌纤维同时表达NuMa和Desmin、Laminin。术后2、4周,对照组胫骨前肌均未检测到NuMa表达。结论 hAFCSCs体外培养后移植到小鼠肌肉损伤部位,可参与损伤肌肉的修复过程。
- 马晓荣张胜利尚亚峰高同斌王雪陈方周君梅
- 关键词：细胞治疗骨骼肌损伤小鼠
- 人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞诱导的体外实验研究
- 2010年
- 目的 探讨成肌细胞条件培养液体外诱导人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞分化的可行性.方法 B超引导下穿刺抽得孕中期羊水,体外培养、分离得到羊水来源间充质干细胞.鼠成肌细胞体外培养后收集上清液,检测上清液中半乳糖凝集素-1（Galectin-1）含量,并制备成肌细胞条件培养液.实验组于成肌细胞条件培养液中培养,对照组于成肌细胞诱导培养液中培养.观察2组细胞形态学变化,免疫荧光染色、RT-PCR检测成肌细胞特异性标志物Pax7、MyoD、肌结蛋白（Desmin）、肌钙蛋白Ⅰ（Tn Ⅰ）及mRNA表达情况.结果 倒置相差显微镜下可见实验组细胞诱导第18天出现折光性强、体积较小的细胞,呈多角形,并带有突起,且逐渐成长条形;可见少量多核细胞.对照组细胞呈扁平多角形,胞体较大.诱导24 d免疫荧光染色及RT-PCR提示实验组细胞不同程度表达Pax7、MyoD、Desmin、TnⅠ及mRNA;对照组呈阴性.成肌细胞培养上清液中半乳糖凝集素-1含量较低.结论 成肌细胞条件培养液能诱导人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞样细胞分化.
- 马晓荣张胜利吴齐全高同斌周君梅陈方
- 关键词：间充质干细胞条件培养液分化细胞治疗
- 胚胎干细胞和间充质干细胞分化为内皮细胞的研究现状被引量：2
- 2009年
- 内皮细胞对于维持血管正常功能具有重要作用，然而其来源有限。因此，寻找内皮细胞的其他丰富来源一直为研究者们所关注。干细胞在体外培养具有能大量增殖、并在合适的条件下定向分化的特性。近年来，各种类型的干细胞诱导分化为内皮细胞的研究不断深入并各有优缺点。对胚胎干细胞和各种来源的间充质干细胞诱导分化为内皮细胞的研究现状作一综述。
- 吴齐全张胜利周君梅陈方
- 关键词：干细胞内皮细胞分化
- 应用温度敏感型培养皿获得尿道下裂患儿尿源性细胞膜片的研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨通过Nunc Upcell温度敏感型培养皿获得尿道下裂患儿尿源性细胞膜片的可行性。方法排尿时，对尿道下裂患儿尿源性细胞进行收集和原代培养，传代后计数细胞并绘制生长曲线，观察细胞形态学特征，RT-PCR、细胞免疫荧光染色鉴定尿源性细胞特异mRNA及蛋白表达情况；将尿道下裂患儿尿源性细胞转移入Thermo公司的Nunc Upcell中，根据温度的变化获得该细胞的细胞膜片。结果镜下观察和生长曲线图显示：尿道下裂患儿来源的尿源性细胞具有与正常人的尿源性细胞类似的体外增殖能力，培养至第十代生长仍很旺盛，可以达到10^9个细胞，能够满足组织工程所需要的细胞数量；2组细胞具有类似的群体倍增时间；RT-PCR和细胞免疫荧光染色显示这2组尿源性细胞均表达尿道上皮细胞和平滑肌细胞表面标志物；利用NuncUpcell温度敏感型培养皿可以转移得到完整的细胞膜片，且转移后的细胞仍保持旺盛的增殖能力。结论尿道下裂患儿来源的尿源性细胞可在体外大量增殖，可作为一种新型的种子细胞用于泌尿系统组织工程；结合使用新型的NuncUpcell温度敏感型细胞培养皿，可获得尿道下裂患儿尿源性来源细胞的细胞膜片，为将来进行尿道缺损修复的动物及临床试验奠定了良好基础。
- 王雪周君梅张胜利余玲顾怡珺吴静张明庆陈方
- 关键词：细胞培养
- 血管内皮生长因子表达载体的构建及在内皮祖细胞中的表达
- 2008年
- 背景:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)具有很强的促进血管生成作用,但构建其真核表达质粒是否可转染血管内皮祖细胞并完整表达还不清楚。目的:构建VEGF表达载体,并观察其在内皮祖细胞中的表达情况。设计、时间及地点:观察性试验,于2007-12/2008-03在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心实验室完成。材料:质粒PDC315-VEGF165自备,质粒pIRES2-EGFP由美国国立卫生研究院Stanko Stojilkovic教授惠赠。方法:运用DNA重组技术构建VEGF表达载体pIRES2-EGFP-VEGF,应用脂质体包裹的方法将载体转染猪外周血血管内皮祖细胞。主要观察指标:采用荧光显微镜观察VEGF在内皮祖细胞内的表达,反转录-聚合酶链反应法检测VEGFmRNA表达水平,ELISA检测VEGF165蛋白表达情况。结果:成功构建VEGF真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF。转染重组质粒pIRES2-EGFP-VEGF后,在内皮祖细胞内有VEGF的表达,VEGFmRNA和VEGF165蛋白表达水平均明显增加。结论:VEGF表达载体转染猪外周血血管内皮祖细胞后能有效增加VEGF基因的表达,能够获得较高水平的VEGF蛋白。
- 陈柏松张胜利耿红全潘骏吴少峰陈方
- 关键词：血管内皮生长因子真核表达载体内皮祖细胞基因表达
- 羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞向血管内皮细胞的体外诱导分化
- 2009年
- 背景:已证实将血管内皮细胞与具有良好组织相容性的生物材料复合,并移入体内后可增殖分化形成血管。但由于获取内皮细胞时创伤较大,所以细胞来源是一个急需解决的问题。目的:探讨羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞分化为内皮细胞的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/2009-03在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心完成。材料:羊水标本来自孕16～22周行产前诊断的孕妇,在超声引导下行羊膜腔穿刺取得60mL羊水。方法:采用免疫磁珠细胞分选法去除人羊水细胞中CD44和SSEA-4阳性细胞,使OCT-4阳性胎儿间充质干细胞间接得到分离,并在体外进行培养扩增。取第3代羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞,诱导组换用含体积分数为15%胎牛血清的内皮细胞生长培养液,对照组持续用原培养液培养细胞。主要观察指标:倒置相差显微镜观察诱导过程中细胞形态变化,采用间接细胞免疫荧光法、内皮细胞吞噬DiI-acLDL法检测诱导效果。结果:诱导30d后,镜下观察细胞集落相互连接,呈典型的"鹅卵石"样外观,经诱导的羊水来源OCT-4阳性胎儿间充质干细胞可在体外保持良好的增殖活力。诱导后的贴壁细胞eNOS和vWF呈阳性表达,细胞胞浆内可见发出红色荧光的DiI阳性细胞;对照组细胞免疫荧光染色eNOS和vWF均呈阴性,且无红色荧光细胞出现。结论:羊水来源的OCT-4阳性的胎儿间充质干细胞在适当的体外微环境下,可诱导分化为血管内皮细胞。
- 吴齐全张胜利马晓荣周君梅陈方
- 关键词：羊水OCT-4内皮分化
- 应用5-杂氮脱氧胞苷诱导人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞样细胞分化的体外实验研究
- 目的探讨5-氮杂脱氧胞苷(5-AzaC)体外诱导人羊水来源间充质干细胞向成肌细胞样细胞分化的可行性。方法B超引导下穿刺抽得孕中期羊水,体外培养、分离得到羊水来源间充质干细胞,传代后计数细胞并绘制生长曲线。体外成骨、成脂诱...
- 马晓荣张胜利吴齐全高同斌周君梅谢华陈方
- 文献传递
- 人羊水来源干细胞以类胚体样结构形式向心肌样细胞分化的可行性被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨人羊水来源干细在体外以类胚体形式向心肌样细胞分化的可行性.方法 在B型超声引导下穿刺抽得孕中期羊水,体外分离、培养得到羊水来源干细胞.取第四代细胞消化计数,悬滴法培养5d后,采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测干细胞相关mRNA表达情况；更换诱导培养液以贴壁培养方法诱导类胚体细胞向心肌样细胞分化2周.RT-PCR、免疫荧光染色方法鉴定心肌细胞特异mRNA及蛋白的表达.结果人羊水来源干细胞体外悬滴培养后24h即可形成类胚体样结构；类胚体样结构直径随培养时间逐渐增大,第5天时,类胚体样结构平均直径为（237.3±26.7）μm,形成率为93.5％；RT-PCR检测到干细胞相关mRNA表达；类胚体形式下,经诱导后,免疫荧光染色检测类胚体中羊水来源干细胞表达心肌细胞部分表型：肌结蛋白（Desmin）、肌钙蛋白Ⅰ（TnⅠ）和横纹肌辅肌动蛋白（α-Actinin）；RT-PCR检测类胚体中羊水来源干细胞表达心肌细胞相关mRNA：肌结蛋白（Desmin）、肌动蛋白（α-Actin）、肌钙蛋白I（TnⅠ）、肌钙蛋白T（Tn T）、T-box、NK2.5.而对照组呈阴性.结论人羊水来源干细胞体外悬滴培养后可形成形态均一的类胚体样结构.5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza）能诱导类胚体样结构中的羊水来源干细胞向心肌样细胞分化.
- 马晓荣谢华张胜利高同斌王雪尚亚峰周君梅陈方
- 关键词：干细胞心肌细胞分化
- 一种干细胞分离纯化方法
- 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种干细胞分离纯化方法。本发明提供了一种干细胞分离纯化方法，包括下列步骤：干细胞培养：将干细胞细胞悬液或含有干细胞的细胞悬液接种于培养容器中，加入培养液培养至出现干细胞克隆团；干细胞分离纯...
- 陈方张胜利周君梅
- 文献传递
- 内皮祖细胞复合膀胱无细胞基质的生物相容性被引量：1
- 2009年
- 目的应用内皮祖细胞复合膀胱无细胞基质构建组织工程学膀胱。方法分离培养猪外周血内皮祖细胞，制备膀胱无细胞基质。体外检测细胞与膀胱无细胞基质的生物相容性。观察细胞与膀胱无细胞基质的体外复合。结果成功分离培养猪外周血内皮祖细胞，其表面标志分别为CD13325．1％、CD34 55．9％、flk-197．7％、CD31 82．0％、CD144 95．4％。成功制备膀胱无细胞基质。生物相容性检测证明膀胱无细胞基质对细胞无明显的细胞毒性，细胞活力保持在90％以上。体外观察细胞可以复合于无细胞基质，并在其上增殖、生长。结论可以应用内皮祖细胞作为种子细胞，膀胱无细胞基质作为支架材料构建组织工程学膀胱，可能成为提高体内组织工程膀胱血管化的一种新方法。
- 陈柏松张胜利耿红全潘骏吴少峰陈方
- 关键词：内皮祖细胞膀胱生物相容性血管化
