曹莎 作品数:16 被引量:35 H指数:2 供职机构: 华中农业大学 更多>> 发文基金: 武汉市科技攻关计划项目 国家科技重大专项 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
显性抑制突变体F427N作为炭疽毒素抑制剂及疫苗的应用 本发明涉及动物细菌学与人畜共患传染病学技术领域。具体涉及一种显性抑制突变体F427N作为炭疽芽孢杆菌毒素抑制剂及疫苗的应用。本发明通过炭疽芽孢杆菌致死毒素基因的克隆,蛋白表达与纯化,基因定点饱和突变等方法,得到炭疽芽孢杆... 郭爱珍 曹莎 陈焕春 刘子铎 张承才 谭亚娣文献传递 三基因融合的重组牛结核特异性抗原蛋白及制备方法 本发明属于微生物基因工程技术领域。具体涉及一种三基因融合的重组牛结核特异性抗原蛋白其及制备方法。该牛结核特异性融合抗原蛋白的基因,具有如序列表SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列和氨基酸序列。公开了一株能够表达牛结核特... 郭爱珍 刘冬光 曹莎 陈颖钰 廖娟红 于清龙 凌洁玉 陈焕春文献传递 牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用 被引量:28 2007年 为了建立一种快速检测牛分支杆菌抗体的新方法用于诊断牛结核病,利用胶体金免疫层析技术原理,用原核诱导表达的牛分支杆菌抗原蛋白MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条。结果表明,粒径为40 nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.0,MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5μg,MPB70抗原的最适包被浓度为3.0 mg/mL,抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5 mg/mL,交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性。比较试验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条。在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较。本试纸条与牛分支杆菌分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%。快速检测牛结核抗体的免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核病根除计划中具有良好的应用前景。 张书环 杨俊兴 晁彦杰 颜邦芬 吴波 曹莎 陈颖钰 谭亚娣 陈焕春 郭爱珍关键词:免疫层析 牛分支杆菌 牛结核 抗体检测 一种适用于炭疽抗毒素和疫苗的融合蛋白 本发明属于基因工程技术领域。具体涉及一种适用于炭疽抗毒素和疫苗的融合蛋白的制备。该融合蛋白的编码基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所述。该融合蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1所述。本发明为炭疽抗... 刘子铎 吴高兵 洪玉枝 郭爱珍 曹莎 封纯芳文献传递 一种炭疽芽胞杆菌保护性抗原突变体 本发明属于微生物基因工程技术领域。具体涉及一种炭疽芽孢杆菌保护性抗原的突变体及其编码蛋白。所述突变基因的序列及其编码的突变蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ IDNO:1所示。经过生物学验证,该突变体蛋白完全丧失细胞毒性,且... 刘子铎 吴高兵 洪玉枝 郭爱珍 封纯芳 曹莎文献传递 三基因融合的重组牛结核特异性抗原蛋白及制备方法 本发明属于微生物基因工程技术领域。具体涉及一种三基因融合的重组牛结核特异性抗原蛋白其及制备方法。该牛结核特异性融合抗原蛋白的基因,具有如序列表SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列和氨基酸序列。公开了一株能够表达牛结核特... 郭爱珍 刘冬光 曹莎 陈颖钰 廖娟红 于清龙 凌洁玉 陈焕春文献传递 一种炭疽芽胞杆菌保护性抗原突变体 本发明属于微生物基因工程技术领域。具体涉及一种炭疽芽孢杆菌保护性抗原的突变体及其编码蛋白。所述突变基因的序列及其编码的突变蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ IDNO:1所示。经过生物学验证,该突变体蛋白完全丧细胞毒性,且能... 刘子铎 吴高兵 洪玉枝 郭爱珍 封纯芳 曹莎文献传递 牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83、CFP-10和ESAT-6的融合表达及相关特性分析 被引量:5 2007年 目的牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83、CFP-10和ESAT-6的融合表达及相关特性分析。方法应用PCR方法从牛分枝杆菌临床分离株基因组中扩增获得mpb70、mpb83、cfp-10和esat-6四个目的基因片段。采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE)获得融合基因cfp10-esat6和mpb83-cfp10-esat6,将mpb70和mpb83-cfp10-esat6串连于载体pUC19-Linker上,再将mpb70-mpb83-cfp10-esat6连于表达载体pET28a(+)中得到重组质粒pET70-83-C10-E6。转化BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导获得以可溶形式表达的融合蛋白。用Ni2+亲合层析法纯化该融合蛋白。结果经ELISA验证该融合蛋白能分别与抗原蛋白MPB70、MPB83和CE(cfp10-esat6)的多抗反应,说明该融合蛋白具有四个抗原蛋白的免疫学活性。Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛其它疾病的阳性血清不反应。热稳定性试验证明该融合蛋白属于热稳定性蛋白。结论融合表达了牛分枝杆菌的四种特异性抗原蛋白,该蛋白具有单个蛋白的免疫原性和稳定性,作为一种新型的诊断抗原具有良好的应用前景。 张书环 吴波 颜邦芬 曹莎 陈颖钰 晁彦杰 凌洁玉 谭亚娣 陈焕春 郭爱珍关键词:牛分枝杆菌 结核 显性抑制突变体F427D作为炭疽芽孢杆菌毒素抑制剂及疫苗的应用 本发明涉及动物细菌学与人畜共患传染病学技术领域。具体涉及一种显性抑制突变体F427D作为炭疽芽孢杆菌毒素抑制剂及疫苗的应用。本发明通过炭疽芽孢杆菌致死毒素基因的克隆,蛋白表达与纯化,基因定点饱和突变等方法,得到炭疽芽孢杆... 郭爱珍 曹莎 陈焕春 刘子铎 张承才 谭亚娣文献传递 炭疽芽孢杆菌致死因子突变株K518E和L519C的筛选及活性分析 2009年 为研究炭疽毒素致死因子(lethalfactor,LF)致死机理,更有效地防治炭疽,对LF基因1550~2324bp之间的片段进行了随机突变实验.通过细胞毒性实验筛选LF突变体库,结果获得5株活性降低突变体.进一步对单点突变体蛋白进行亲和纯化,首次得到了K518E、L519C两种突变蛋白,对其进行纯蛋白活性检测和竞争抑制实验,发现这两种突变蛋白活性显著降低,表明518位赖氨酸和519位亮氨酸对LF功能起着非常重要的作用.并且发现,K518E对野生型LF具有一定的抑制作用,对LF作用机理的研究有一定帮助. 封纯芳 吴高兵 曹莎 刘子铎 洪玉枝关键词:炭疽 随机突变 细胞毒性实验