曾倩
- 作品数：4 被引量：24H指数：2
- 供职机构：内蒙古医学院第三附属医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 神经干细胞移植修复大鼠脊髓半切伤的研究被引量：4
- 2006年
- 目的:观察神经干细胞移植修复脊髓半切伤的疗效并探讨移植最佳时机。方法:制备大鼠T13～L1脊髓半切伤模型,取胎龄13.5d胎鼠大脑组织,体外分离、培养、诱导神经干细胞,并采用免疫细胞化学技术分别检测NSC(neuralstemcell)特征性标志Nestin(巢蛋白)表达和用血清诱导分化为大量神经元NSE(neuronspecificenolas)和神经胶质细胞GFAP(glialfibrillaryacidicprotein)表达。用明胶海绵吸附BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶)标记好的神经干细胞悬液移植到脊髓半横断处,移植时间选择损伤后立即移植、损伤后第9、14d。观察移植后的大鼠行为的变化,通过CBS(combinebehavioralscore)评分和爬网格实验评价大鼠的运动功能恢复情况,并进行免疫组化鉴定,光学显微镜观察移植神经干细胞的存活和迁移。结果:在上述条件下培养及传代的细胞不断分裂增殖,形成悬浮生长的呈Nestin阳性的神经球;用血清诱导分化为大量表达NSE阳性的神经元和GFAP阳性的神经胶质细胞。与对照组相比,神经干细胞移植组明显修复了损伤结构,改善了下肢的功能,尤其是第9d移植组。结论:神经干细胞移植促进了脊髓损伤后神经结构和功能的恢复,是治疗脊髓半切伤一种有效方案,考虑综合因素移植干细胞的最佳时机应选损伤后9d左右。
- 曹中伟刘洪文曾倩包翠芬齐志敏秦书俭
- 关键词：神经干细胞多向分化
- 大鼠胚胎脑组织神经干细胞的培养和鉴定被引量：20
- 2006年
- 目的探讨从不同胎龄的大鼠脑组织中分离,培养神经干细胞(NSC)并对其鉴定,了解生物特性。方法通过采用机械分离和消化分离相结合的方法分离不同胎龄大鼠脑NSC。在无血清DMEM/F12(含20ng/m lbFGF,20ng/m lEGF及B27辅助培养液)中培养、传代和鉴定。诱导分化后采用SABC法对分化的细胞进行神经元特异烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)检测作细胞鉴定。结果从不同胎龄的胎鼠脑组织中成功培养出神经干细胞,胎龄为12.5天的胎鼠提取的神经干细胞集落最多,在上述条件下培养及传代的细胞不断分裂增殖,形成悬浮生长的呈巢素蛋白(nestin)阳性的神经球;用血清诱导分化为大量表达NSE阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞。结论胎龄为12.5天胎鼠大脑皮质培养出的神经干细胞数量最多,可分化为神经元、神经胶质细胞及少突胶质细胞。
- 曹中伟马虹曾倩马云胜秦书俭
- 关键词：神经干细胞细胞培养分化
- 维甲酸诱导胚胎大鼠脑海马神经干细胞向神经元的分化
- 2009年
- 背景:目前认为直接进行神经干细胞移植后细胞虽能存活,但是只分化成神经胶质细胞,并不能分化成有功能的神经元。目的:探讨维甲酸诱导对胚胎大鼠脑海马神经干细胞向神经元分化的作用。设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2008-09/2009-02在辽宁医学院科技实验楼完成。材料:胚龄13.5d的SD大鼠由辽宁医学院实验动物中心提供。方法:分离胎鼠脑海马组织,胰蛋白酶消化法体外培养获得神经干细胞。将原代和传代细胞以1×107L-1接种到培养孔中,分别进行常规贴壁分化培养和维甲酸诱导分化培养。主要观察指标:神经干细胞的鉴定,光镜及免疫组化检测神经干细胞诱导分化结果。结果:免疫组织化学检测结果显示,原代和传代后得到的神经干细胞团均呈巢蛋白阳性。常规贴壁分化培养7d后,神经元多呈椭圆型和近似三角形,胞体大,细胞边缘清楚,胞体上有多个突起;而维甲酸诱导分化培养后,神经元数量增加,形态清楚,但细胞胞体上突起较少。与常规贴壁分化培养比较,维甲酸诱导分化培养后神经干细胞向神经元分化率明显升高(P<0.01),神经干细胞向神经胶质细胞分化率明显降低(P<0.01)。结论:从大鼠胚胎脑海马组织中分离得到可自我复制和多向分化的神经干细胞,维甲酸体外诱导后可以增加其向神经元方向分化的比例。
- 曹中伟陈剑秋曾倩秦书俭
- 关键词：神经干细胞神经元维甲酸分化
- 提高胚胎大鼠神经干细胞数量的实验方法
- 2006年
- 目的:通过培养了解神经干细胞的生物学特性,着重从胎龄选择、优化分离和换液方法上提高神经干细胞的增殖能力和生长数量。方法:实验于2004-04/2005-09在锦州医学院中心实验室完成。①雌性SD大鼠35只,每日做阴道细胞涂片,排卵期雌雄合笼,以出现精栓计为受孕第0.5天。分别于孕10.5,11.5,12.5,13.5,14.5,16.5,18.5d取出大鼠胚胎体,每时间点各5只。②通过采用机械分离和酶消化分离相结合的方法分离培养不同胎龄大鼠脑神经干细胞。③换液首次采用分瓶法以后采用低速离心半量换液。④采用免疫细胞化学技术分别检测神经干细胞特征性标志巢蛋白表达和用血清诱导分化为大量神经元微管组合蛋白2和神经胶质纤维酸性蛋白表达。结果:①胎龄为12.5d的胎鼠提取的神经干细胞集落最多,其次为13.5d。②在上述条件下培养及传代的细胞不断分裂增殖,形成悬浮生长的呈巢蛋白阳性的神经球。③用血清诱导分化为大量表达微管组合蛋白2阳性的神经元和胶质纤维酸性蛋白阳性的神经胶质细胞。结论:考虑到生长因子在孕13～15d能够很好地发挥作用,故选择胎龄为13.5d胎鼠作为实验材料较为合适。通过采用机械分离和消化分离相结合的方法分离和原液首次采用分瓶法显著提高了神经干细胞的培养数量,培养出的细胞具有自我更新能力和增殖能力,可分化为神经元、神经胶质细胞及少突胶质细胞。
- 曹中伟曾倩马虹秦书俭
- 关键词：干细胞细胞分离细胞培养
