服部俊夫
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：日本东北大学大学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省海外学人科研资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- V3环缺失的HIV-1 ADA株包膜表达载体构建及鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的构建V3环缺失的HIV1ADA株包膜糖蛋白表达体系。方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,进行HIV1ADA株包膜糖蛋白V3环缺失体的构建。得到的PCR产物经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,与pSM载体连接,构建HIV1ADA株包膜糖蛋白V3环缺失的表达载体(pSMADAΔV3),转化大肠杆菌后筛选阳性克隆,经PCR及基因序列测定进行鉴定。结果获得HIV1ADA株包膜糖蛋白V3环缺失体PCR产物,构建了其表达载体pSMADAΔV3,经转化和筛选获得了重组菌,经PCR及基因测序结果显示重组质粒序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了V3环缺失的HIV1ADA株包膜糖蛋白的表达载体。此结果为进一步构建伪病毒,观察V3环完全或部分缺失对病毒侵入靶细胞过程的影响,为开发阻止HIV1进入靶细胞的药物或疫苗打下基础。
- 李妍周海舟服部俊夫凌虹
- 关键词：HIV-1
- HIV-慢病毒载体有效转导人肺动脉平滑肌细胞的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的使用不同的HIV-载体感染人肺动脉平滑肌细胞,并使用HIV慢病毒载体将外源基因转入人肺动脉平滑肌细胞。方法应用ADA/Luc、HXB2/Luc、VSV-G/Luc和VSV-G/GFP感染人肺动脉平滑肌细胞U87.CD4.CCR5和U87.CD4.CX-CR4。结果ADA/Luc和HXB2/Luc均能感染具有相应复合受体的U87.CD4,但不能感染人肺动脉平滑肌细胞。VSV-G/Luc和VSV-G/GFP能有效转导至人肺动脉平滑肌细胞中,于感染第3天,表达VSV-G/GFP的人肺动脉平滑肌细胞的阳性率为18%。结论应用HIV慢病毒载体能够向人肺动脉平滑肌细胞中导入外源基因。
- 李寿霖服部俊夫池田淳白土邦男
- 关键词：平滑肌细胞人免疫缺陷病毒
- HIV-1黑龙江省分离株CHNHLJ03009包膜克隆及分析被引量：4
- 2005年
- 目的分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type1,HIV21)原代分离株包膜糖蛋白的变异性及表型特征。方法从一名HIV阳性但未发病的感染者外周血单个核细胞提取DNA,采用保守引物进行HIV包膜直接克隆,进行序列分析及系统树分析。构建了一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行了感染实验,观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征。结果共获得2个有功能全长env克隆,分别命名为CHNHLJ03009c34(Gen-Bank序列号为AY905493)和CHNHLJ03009c33。用全长env氨基酸序列与国内外分离株进行同源性比较分析发现,与分离株CHNHLJ03009c34的包膜同源性最高的病毒为云南的HIV-1B′亚型分离株RL42,同源性为91.52%。系统发育分析结果表明,该株为泰国B′亚型,与云南分离株RL42的遗传距离最近。对包膜蛋白结构分析结果显示,分离株CHNHLJ03009c34包膜在抗原性和亲水性上与RL42没有明显差别。感染性检测结果显示该病毒只能感染U87.CD4.CCR5细胞,不能感染U87.CD4.CX2CR4细胞。结论本研究从黑龙江省一名HIV21阳性者克隆到HIV-1CHNHLJ03009病毒的包膜基因,该病毒属于B′亚型(泰国亚型),为R5亲嗜性毒株。该包膜基因克隆为首次报道的黑龙江分离株。
- 周海舟李妍凌虹刘延成黄秉成服部俊夫
- 关键词：包膜
- 人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白V_3区对细胞结合能力的研究
- 2002年
- 目的：研究人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）不同亲嗜株包膜糖蛋白Ｖ３区结合于靶细胞的能力。方法：合成来源于不同嗜性ＨＩＶ－１Ｖ３区的生物素标记和非标记的多肽。采用流式细胞计数分析生物素化的 Ｖ３多肽对细胞的结合能力以及细胞表面的结合配体。结果：ＨＩＶ－１Ｘ４ 亲嗜株ＩＩＩＢＶ３区能结合于多种细胞的表面，包括辅助受体ＣＸＣＲ４；竞争实验结果显示蛋白酶抑制剂能抑制该结合。Ｒ５亲嗜株 ＡＤＡ Ｖ３区只极微弱地结合于外周血单核细胞和表达ＣＣＲ５ 的人星形胶质细胞表面。结论：不同嗜性ＨＩＶ－１Ｖ３区结合于细胞表面的能力不同从亲嗜株Ｖ３区直接结合于细胞表面并被其自身所增强，其靶分子至少包括辅助受体 ＣＸＣＲ４和蛋白酶分子；而Ｒ５亲嗜株 ＡＤＡ Ｖ３区则不结合于 ＣＣＲ５和蛋白酶。
- 凌虹李殿俊谷鸿喜服部俊夫
- 关键词：人类免疫缺陷病毒I型多肽
- HIV-1包膜V3区在病毒侵入靶细胞中的增强作用被引量：3
- 2004年
- 目的 明确Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (humanimmunodeficiencyvirustype 1,HIV 1)包膜糖蛋白gp12 0第三可变区 (variableregion ,V3)在病毒进入靶细胞的早期阶段中的作用。方法 合成了 3个环状V3多肽 ,包括V3 BH10、V3 ADA和V3 89.6以及直链和短链多肽V3 BH10 /CA、V3 NNT2 4和V3 IRI12。构建了 3株分别带HIVHXB2株、ADA株和 89.6株包膜的伪病毒并观察了多肽对不同嗜性HIV侵入靶细胞能力的影响。结果 (1)HIV 1V3区多肽以毒株特异性模式增强HXB2、ADA和 89.6进入靶细胞 ;(2 )直链V3多肽与其环状多肽具有相似作用 ;带有C末端的短肽V3 NNT2 4也有与长链V3 BH10 /CA相近的作用 ,只有中央保守区的短链V3 IRI12没有类似功能。结论 本研究首次发现HIV 1V3区在病毒进入靶细胞早期阶段中具有毒株特异性增强病毒侵入的作用。该发现有助于进一步明确HIV
- 凌虹谷鸿喜李殿俊林道红张凤民傅松滨服部俊夫
- 关键词：包膜糖蛋白靶细胞
- Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白修饰体表达载体的构建及鉴定
- 2006年
- 目的构建V3环完全或部分缺失的I型人类免疫缺陷病毒(hauman immunodeficiency virus type I,HIV-1)ADA株包膜糖蛋白表达体系。方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环删除区域两端的引物,采用重叠延伸剪接法进行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体的构建。得到的PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切,将酶切产物与pSM载体连接,转化大肠埃希菌后筛选阳性克隆,经PCR及基因序列测定进行鉴定。结果获得HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体PCR产物,构建了其表达载体pSM-ADA△V3和pSM- ADAmV3,经转化和筛选获得了重组质粒,经PCR及基因测序鉴定显示重组质粒序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了V3环修饰的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白的表达载体。此结果为进一步构建伪病毒,观察V3环完全或部分缺失对病毒侵入靶细胞过程的影响,为开发阻止HIV-1进入靶细胞的药物或疫苗打下基础。
- 张唯哲李妍周海舟服部俊夫凌虹
- 关键词：HIV-1修饰
