李光才
- 作品数：11 被引量：29H指数：4
- 供职机构：浙江大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家现代农业产业技术体系建设项目浙江省科技厅项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 破碎法提取家蚕微孢子虫孢子核酸的PCR检测灵敏度试验被引量：3
- 2011年
- 蚕微粒子病检测技术是该病防治中的一项重要技术,本文在通过破碎法提高模板核酸获取量的基础上,对纯化家蚕微粒子虫孢子的PCR检测灵敏度进行了测试。提取核酸-模板稀释测试12对引物的灵敏度中有4对引物达到0.05粒(102粒/mL)、4对引物5粒(104粒/mL)、1对引物50粒(105粒/mL)、2对引物500粒(106粒/mL)和1对引物5000粒(107粒/mL)。两对灵敏度较高的引物(NbZS004F/NbZS004R和NbZS007F/NbZS007R)灵敏度临界值(0.05粒和0.005粒)的PCR重复检测率均为90%。纯化家蚕微粒子虫孢子稀释后提取核酸再进行PCR检测试验中,NbZS004F/NbZS004R和NbZS007F/NbZS007R的灵敏度分别为:5粒(104粒/mL)和0.5粒(103粒/mL)。
- 李光才蔡顺风何祥康何欣怡马焕艳孟祥坤邱海洪何永强鲁兴萌
- 关键词：家蚕微粒子病孢子聚合酶链式反应
- 家蚕微粒子病的PCR检测技术研究
- 家蚕微孢子虫(Nosema bombycis，简称Nb)是由Nageli于1857年从家蚕中发现并命名的人类所认识的第一种微孢子虫，其引发的家蚕微粒子病是蚕业生产的毁灭性疾病，被确定为世界养蚕地区唯一的检疫病害。随着科学...
- 李光才
- 关键词：家蚕微粒子病家蚕微孢子虫聚合酶链式反应
- 文献传递
- PCR法检测蚕卵中家蚕微粒子虫的样本处理方法及检测方法
- 本发明公开了一种PCR法检测蚕卵中家蚕微粒子虫的样本处理方法，包括：将蚕卵样本加入前处理液中，放置30min以上，捣碎蚕卵并调节溶液pH值为中性，制得PCR模板；所述前处理液为碱性且包含1～10mol/L的甜菜碱。另外，...
- 鲁兴萌蔡顺风李明乾马焕艳何永强李光才
- 文献传递
- 家蚕胚胎期感染微粒子病的个体对健康群体的影响被引量：3
- 2017年
- 胚胎期感染家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)的家蚕个体,其携带Nb在健康家蚕群体中的传播扩散规律是流行病学需要解决的问题,也是家蚕微粒子病检验技术的科学基础。采用流行病学的方法,通过混育和个体育试验,研究胚胎期感染Nb的家蚕个体对健康群体的影响。研究结果表明:胚胎期感染Nb的家蚕中,存在可以完成1个世代(即可以发育到化蛾产卵)的个体;胚胎期被感染的家蚕个体在健康家蚕群体中的感染扩散规律为"连续感染传播扩散"模式;病害在家蚕健康群体的传播扩散与胚胎期感染个体数量和感染程度有关,在幼虫期低剂量感染情况下,感病个体混入率≥5%对群体的化蛾率有明显影响,感病个体混入率≤2%对群体的化蛾率未见明显影响。上述结果可供感染Nb的家蚕子代对健康群体影响的风险阈值确定,以及家蚕微粒子病检验判别标准的评价和检验技术研究参考。
- 鲁兴萌呼思瑞邵勇奇林秀秀蔡顺风傅张梧可李明乾何欣怡邱海洪马焕艳陆颖刘涵何祥康李光才陈勃生
- 关键词：家蚕家蚕微孢子虫幼虫饲养
- 家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法及诊断试剂盒
- 基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫方法的目的，以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66 bp片段作为靶标，设计特异性PCR引物和TaqMan探针，构建重组质粒制备标准品，进行荧光定量PCR扩增...
- 何永强李光才董强吴姗鲁兴萌张弘邱海洪帅江冰王素华张晓峰徐国群
- 关键词：家蚕微孢子虫荧光定量PCR诊断试剂盒
- 不同DNA抽提方法对普通PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫的影响被引量：9
- 2011年
- 为了优选快速、灵敏、特异的家蚕微孢子虫Nosema bombycis分子检测方法和DNA抽提方法,本文通过对家蚕微孢子虫TaqMan探针荧光定量PCR检测方法和SYBRGreen荧光定量PCR检测方法的建立以及反应体系优化,并与普通PCR方法进行比较;再采用4种不同DNA抽提方法分别对PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫悬浮液的效果评价。结果显示:不经过DNA抽提,直接将家蚕微孢子虫发芽液进行PCR反应的效果优于其他方法,检测灵敏度由高到低依次为直接法、酚/氯仿抽提法、动物组织DNA试剂盒抽提法和植物组织DNA试剂盒抽提法;TaqMan探针法检测家蚕微孢子虫发芽液的灵敏度和SYBRGreen法相近,达到微孢子102个/mL,两者均优于普通PCR方法。实验表明,直接采用发芽液结合荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫最为简便、快速、灵敏。该研究结果将有助于提高家蚕微粒子病监控技术和检疫能力,对家蚕微粒子病的检疫和防治具有积极意义。
- 何永强吴姗鲁兴萌邱海洪帅江冰张晓峰王素华徐国群李光才董强
- 关键词：家蚕微孢子虫荧光定量PCR家蚕微粒子病检疫
- 一种快速高效制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法被引量：12
- 2011年
- 家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性和所得总蛋白的差异性,并对提取蛋白进行双向电泳试验。结果表明:使用玻璃珠破碎法对微孢子虫孢子壁的破碎率可达到90%以上,基因组DNA得率约为7.65 fg/粒,总蛋白得率约为788.3 fg/粒,均显著高于常用的发芽法和液氮冻融研磨法的得率。双向电泳结果显示玻璃珠破碎法能有效提取家蚕微孢子虫总蛋白,经考马斯亮蓝染色可检测到约350个蛋白点,蛋白信息丰富,可进一步用于质谱分析。
- 蔡顺风何欣怡何祥康邱海洪李光才何永强鲁兴萌
- 关键词：家蚕微孢子虫核酸蛋白双向电泳
- 家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法及诊断试剂盒被引量：9
- 2011年
- 基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫的方法,以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66 bp片段作为靶标,设计特异性引物和TaqMan探针,用构建的重组质粒制备标准品进行荧光定量PCR扩增,通过优化PCR反应体系,测定线性范围,评价方法的特异性、灵敏度和重复性,成功构建了家蚕微孢子虫的荧光定量PCR检测方法,并研制出诊断试剂盒。该方法的检测线性范围为1×108～1×102拷贝/mL的7个线性梯度,检测家蚕微孢子虫的敏感度达1×102拷贝/mL,特异性高,3次重复性检测应用试验的批内变异系数为3.6%～7.2%,批间变异系数为5.2%～7.8%。结果表明,建立的家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法具有准确、灵敏、快速、特异性强的特点。
- 何永强吴姗鲁兴萌张弘邱海洪帅江冰王素华张晓峰徐国群李光才董强
- 关键词：家蚕微孢子虫荧光定量PCR诊断试剂盒
- 不同DNA抽提方法对PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫的影响
- 为了优选快速、灵敏、特异的家蚕微孢子虫Nosema bombycis分子检测方法和DNA抽提方法，本文通过对家蚕微孢子虫TaqMan探针荧光定量PCR检测方法和SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立以及反应体系...
- 何永强董强吴姗鲁兴萌邱海洪帅江冰张晓峰王素华徐国群李光才
- 关键词：家蚕微孢子虫病毒监测荧光定量PCR
- 家蚕微粒子病的PCR检测技术研究与应用被引量：6
- 2011年
- 家蚕微粒子病检测技术是该病防治中的一项关键性技术,随着PCR技术的发展,使该项技术在家蚕微粒子病的检测中应用成为可能。综述了有关应用PCR技术检测家蚕微粒子病的研究,从模板核酸制备和引物设计等方面分析提高灵敏度和解决特异性问题的途径。提出蚕种生产单位承担母蛾的微粒子病检验,省级检验检疫机构承担蚕种(成品卵)的家蚕微粒子病的监督检验检疫,是PCR技术在蚕种生产质量检验中实用化的重要前提。
- 鲁兴萌李光才孟祥坤马焕艳林宝义楼霞何永强
- 关键词：家蚕微粒子病PCR灵敏度特异性
