李喜霞
- 作品数：7 被引量：25H指数：4
- 供职机构：山西医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- shRNA介导RNA干扰对SW480细胞原癌基因Pokemon的抑制作用研究
- 目的：
检测Pokemon基因在结直肠癌组织和SW480细胞中的表达情况;构建Pokemon siRNA干扰载体，瞬时转染SW480细胞，以实现siRNA表达载体对SW480细胞Pokemon原癌基因的抑制，以...
- 李喜霞
- 关键词：SHRNA介导RNA干扰SW480细胞原癌基因
- 文献传递
- 小鼠生精细胞发育特异基因spata3的表达分析和克隆纯化被引量：2
- 2009年
- 背景:雄性哺乳动物生精细胞自发性或诱发性凋亡现象与细胞凋亡相关基因有着密切的联系。spata3是一个新发现的小鼠生精细胞凋亡相关基因。目的:探讨小鼠生精细胞发育特异基因spata3的表达特性,制备高纯度的可溶性GST-SPATA3融合蛋白。设计、时间及地点:观察性实验,于2007-10/2008-08在山西医科大学生物化学与分子生物学实验室和组织学与胚胎学实验室完成。材料:pMD19-T Simple克隆载体及大肠杆菌菌株E.coli DH5α(TaKaRa公司),表达载体pET-41a(+)plasmid DNA(Novagen公司),大肠杆菌菌株E.coli BL21(DE3)(Solarbio公司);1,2,3,5,8周龄雄性和8周龄雌性BALB/c小鼠。方法:麻醉后颈椎脱臼处死小鼠,取出各小鼠的睾丸组织和8周龄小鼠的大脑、心脏、肝脏、肺、肾脏、脾脏、卵巢、子宫,提取各组织总RNA。通过聚合酶链反应、定量聚合酶链反应和原位杂交研究spata3mRNA表达及定位;通过构建原核表达载体,诱导并纯化蛋白,制备抗体。主要观察指标:①反转录-聚合酶链反应分析spata3组织特异性表达。②荧光定量聚合酶链反应分析spata3的阶段特异性表达。③spata3mRNA细胞定位的杂交信号。④SPATA3重组蛋白在原核细胞的表达及其纯化。⑤重组蛋白的Western blot分析。结果:反转录-聚合酶链反应表明spata3具有显著的睾丸组织特异性表达特征;实时定量聚合酶链反应显示spata3在精子发生后期高表达,可能与精子细胞的变态成形过程密切相关;原位杂交证明spata3转录本主要定位在圆形和长形精子细胞内,进一步提示该基因参与了精子细胞发育后期的形态变化。DNA序列测定和SDS-PAGE分析证明spata3原核表达载体构建成功并可被高效诱导表达;Western blot印迹杂交显示纯化的SPATA3重组蛋白具有高度的特异性。结论:spata3是小鼠睾丸组织特异表达的精子发生相关基因,在圆形和长形精子细胞中处于高水平转录状�
- 李喜霞张栋崔慧林郭睿
- 关键词：生精细胞实时荧光定量聚合酶链反应克隆
- 小鼠精子细胞变态成形过程中manchette的免疫荧光染色分析被引量：5
- 2008年
- 目的通过观察manchette结构在小鼠精子细胞中的定位和形态变化,探讨其在小鼠精子细胞变态成形过程中的作用和意义。方法利用免疫荧光FITC/DAPI共染技术显示manchette结构在小鼠精子细胞变态成形各阶段的细胞内定位,观察精子细胞成熟过程中manchette结构的形态学改变。结果manchette结构紧密附着在精子细胞核表面;该结构在圆形精子细胞核变形和延伸的起始阶段形成,并随着精子细胞核的浓缩和变长逐渐向精子细胞尾部移位,直至精子变态成形后消失;在精子细胞变态成形过程中,manchette随着精子细胞核形态的改变逐渐从"帽状"结构变形为"微管样"结构。结论Manchette结构的形成和消失与精子细胞核的浓缩及延伸同步,其形态变化和位置改变与精子细胞核的形态学变化相吻合,在小鼠精子细胞变态成形过程中具有重要意义。
- 郭睿闫萍李喜霞张栋
- 关键词：MANCHETTE精子细胞免疫荧光小鼠
- 小鼠睾丸特异基因在生精细胞中阶段性表达的定量分析被引量：6
- 2009年
- 在Balb/c小鼠精子发生过程中,许多基因都具有严格的时空表达特性。实验利用半定量RT-PCR验证了12个小鼠精子发生相关基因的组织学分布,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR分析了它们在不同发育阶段生精细胞中的差异表达。结果显示,所有基因仅在睾丸组织中高表达;Prm1、Prm2、Tnp1、Tnp2在长形精子细胞中的表达水平最高,分别是粗线期精母细胞阶段的1.9、2.8、3.2和2倍;Dnajb3呈上调表达,在长形精子细胞中的含量是粗线期精母细胞阶段的2.5倍;Akap4在长形精子细胞阶段的表达水平尤为突出,是粗线期精母细胞的5.5倍;Spata3和Spata4在圆形及长形精子细胞中的表达量相近,分别是粗线期精母细胞阶段的3倍和1.5倍;hils1和Tex24在圆形精子细胞阶段的表达水平最高,分别是粗线期精母细胞阶段的1.9和1.4倍;Spag4l和Papolb从粗线期精母细胞到长形精子细胞阶段呈明显的下调表达,分别下降了45%和34%。结果提示,被检测的基因具有明显的阶段特异性表达特征,为深入研究这些基因在小鼠精子发生过程中的作用提供了新资料,同时也为荧光定量PCR技术在精子发生相关基因定量表达研究中的可行性提供了充分例证。
- 郭睿李喜霞王惠珍
- 关键词：精子发生荧光定量PCR小鼠生精细胞
- siRNA表达载体对SW480细胞原癌基因Pokemon的抑制被引量：6
- 2009年
- 观察siRNA表达载体对SW480细胞中Pokemon原癌基因的抑制效应,为进一步研究该基因的功能奠定基础。构建针对Pokemon基因的RNAi质粒表达载体,脂质体法转染人结直肠癌SW480细胞系,观察转染效率及细胞表型变化。稳定转染后,实时荧光定量PCR和Western blot检测SW480细胞中Pokemon mRNA及蛋白质的表达情况;MTT法检测siRNA对SW480细胞恶性增殖的影响;流式细胞仪分析细胞凋亡改变。镜下观察阳性转染率约36%,转染表达载体后细胞形态发生了显著变化;Pokemon mRNA及蛋白质的表达受到明显抑制:与阴性对照组相比,表达质粒产生的siRNA对Pokemon mRNA的抑制率在转染后24h和48h分别为34.2%和67.7%;对蛋白的抑制率在48h和72h分别为48.3%和73.6%。MTT法检测细胞生长曲线表明Pokemon抑制可使SW480细胞生长速度明显减慢;流式细胞仪分析显示转染Pokemon siRNA表达质粒后SW480细胞凋亡增加。构建的RNAi表达载体可以有效抑制SW480细胞中Pokemon基因的表达,并对SW480细胞的生长具有明显抑制及诱导凋亡作用。
- 郭睿李喜霞解军
- 关键词：RNA干扰POKEMONSW480基因表达
- 原癌基因pokemon mRNA及其蛋白在非小细胞肺癌中的表达和意义被引量：5
- 2009年
- 目的探讨原癌基因PokemonmRNA及其编码蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC发生的关系。方法应用RT-PCR和原位杂交技术检测pokemon mRNA在NSCLC组织和癌旁正常组织中的相对表达量及细胞定位;利用免疫组织化学染色分析NSCLC组织和癌旁正常组织标本中Pokemon蛋白的表达。结果半定量RT-PCR显示,pokemon mRNA在NSCLC组织中高表达(0.916±0.424),在对应的癌旁正常组织中低表达(0.408±0.307),两组之间具有显著的统计学差异(P<0.05);原位杂交结果显示,pokemon转录本在NSCLC细胞胞质中呈阳性表达,而癌旁正常组织不表达或低表达;免疫组织化学染色分析结果显示,NSCLC组织和对应的癌旁正常组织中Pokemon蛋白阳性表达率分别为87.5%(35/40)和15%(6/40),两组之间具有显著的统计学差异(X2=42.076,P<0.005)。Pokemon蛋白主要定位在癌细胞胞质内,少量定位在胞核中,呈颗粒状分布。结论原癌基因poke-mon mRNA及其编码蛋白在NSCLC中的高表达很可能与NSCLC的发生密切相关。
- 李喜霞郎旭宇乔从进崔慧林郭睿
- 关键词：非小细胞肺癌POKEMON半定量RT-PCR免疫组织化学
- 二酰甘油激酶α mRNA在肝癌中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的检测二酰甘油激酶α（DGKα）mRNA在肝癌中的表达，探讨DGKα在肝癌发生、发展过程中的作用。方法应用半定量RT-PCR和原位杂交法检测DGKα mRNA在30例肝癌、癌周肝硬化及5例正常肝组织中的相对表达量及分布。结果半定量RT-PCR检测结果显示：DGKα mRNA的表达水平在肝癌组织（0．798±0317）和正常肝组织（0．908±0．425）显著高于癌周肝硬化组织（0．205±0．102），差异有统计学意义（P〈0．05）；原位杂交染色显示：DGKα mRNA在肝癌组织和癌周肝硬化组织主要分布于肝细胞胞质，阳性细胞数分别为（57．6±6．3）个／mm^2和（26．3±4．9）个／mm^2；在正常肝组织分布于肝细胞核，阳性细胞数为（69．8±8．7）个／mm^2；癌周肝硬化组织与肝癌组织、正常肝组织之间阳性细胞数差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DGKα在肝癌的不同时期的表达变化，很可能与肝癌的发生、发展密切相关。
- 崔慧林郭睿李喜霞马晋峰乔从进景雅
- 关键词：肝肿瘤原位杂交
