李海杰
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 组蛋白赖氨酸残基去甲基化酶4B过表达对乳腺癌细胞MCF-7侵袭迁移能力的影响
- 2014年
- 目的 构建组蛋白赖氨酸残基去甲基化酶4B（KDM4B）过表达乳腺癌细胞株MCF-7,观察KDM4B对MCF-7侵袭迁移能力的影响,并探索其机制.方法 利用KDM4B慢病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7,筛选KDM4B过表达稳定细胞株,Western blot法检测MCF-7细胞中KDM4B基因蛋白表达;迁移实验、侵袭实验观察过表达KDM4B对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测细胞上皮-间充质转化相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达.结果 Western blot法验证过表达KDM4B的乳腺癌细胞株MCF-7构建成功;迁移实验中过表达KDM4B细胞穿膜数目[（94±8）个]较对照组[（36±6）个]明显增多,侵袭实验中过表达KDM4B细胞穿膜数目[（18±2）个]较对照组[（5±1）个]明显增多,差异均有统计学意义（P＜0.01）;过表达KDM4B细胞中E-cadherin表达量较对照组明显降低,Vimentin表达量较对照组明显增高.结论 过表达KDM4B基因可促进乳腺癌细胞株MCF-7上皮-间充质转化过程,并提高细胞迁移、侵袭能力.
- 李海杰杨熹葛宗庆兰静芩李国东付寅佳穆磊江旭林胡俊波罗学来
- 关键词：乳腺癌上皮-间充质转化迁移
- 磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基3在非小细胞肺癌上皮-间充质转化及迁移中的作用被引量：9
- 2015年
- 目的 观察磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基3（PIK3R3）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达,及PIK3R3对NSCLC细胞株A549和PC-9上皮-间充质转化（EMT）及迁移的影响.方法 分别提取22对NSCLC患者的肿瘤组织和癌旁组织中的总RNA及和7对标本中总蛋白,分别检测PIK3R3mRNA水平和蛋白表达;在A549和PC-9中通过感染慢病毒高表达或抑制PIK3R3后,通过Transwell迁移实验检测其对细胞迁移的影响,通过Western blot法检测上皮细胞钙黏蛋白（CDH1）、波形蛋白（VIM）、蜗牛族锌指1（SNAI1）及蜗牛族锌指2（SNAI2）等EMT相关蛋白的变化,并通过染色质免疫共沉淀法检测SNAI1及SNAI2结合于CDH1启动子的能力,通过双荧光素酶报告系统检测CDH1的转录活性变化.结果 在NSCLC临床标本中,PIK3R3在肿瘤组织中的表达水平高于癌旁组织;在A549和PC-9中高表达PIK3R3后,穿膜细胞数增加[A549 Control：（46 ±3）个,PIK3R3：（92±5）个;PC-9 Control：（25±2）个,PIK3R3：（53±3）个],细胞的迁移能力增强,同时EMT相关的上皮标志蛋白CDH1表达降低,而间质标志蛋白VIM、SNAI1及SNAI2的表达升高,SNAI1及SNAI2结合于CDH1启动子的能力分别增强9.0倍及3.8倍,同时CDH1的转录活性降低70％;而抑制HK3R3的表达后,穿膜细胞数[A549 sh-Control：（58±5）个,sh-HK3R3：（13±3）个;PC-9 sh-Control：（28±5）个,sh-PIK3R3：（10±3）个],细胞的迁移能力减弱,伴随CDH1表达增高,而VIM、SNAI1及SNAI2的表达降低,同时SNAI1及SNAI2结合于CDH1启动子的能力分别降低70％,相应CDH1的转录活性增高3.6倍.结论 在NSCLC标本中PIK3R3的表达增高,在NSCLC细胞株中高表达PIK3R3可诱使其发生EMT,并促进其迁移能力,而抑制PIK3R3的表达可逆转上述过程.
- 杨熹胡福清李海杰兰静芩罗学来龚建平胡俊波
- 关键词：非小细胞肺癌迁移上皮-间充质转化
- 微小核糖核酸-221通过调节Brahma相关基因-1促进结肠癌细胞侵袭转移的研究
- 2023年
- 目的探讨微小核糖核酸(RNA)-221(miR-221)对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响及其分子机制。方法以人结肠癌SW48细胞作为研究对象,设置高表达对照组(miR-NC组),高表达miR-221组(miR-221组),低表达对照组(lnh-NC组),低表达miR-221组(lnh-221组),通过增加或降低miR-221表达,采用细胞迁移及侵袭试验(Transwell实验),检测miR-221对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响;通过使用蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-221对Brahma相关基因-1(BRG1)表达的影响。通过荧光素酶报告基因(Luciferase)实验,检测miR-221在SW48细胞中对BRG1转录活性的影响。通过在miR-221高表达的SW48细胞中高表达BRG1,检测BRG1在miR-221调控结肠癌细胞侵袭转移中的作用。组间比较采用t检验。结果在SW48细胞中,迁移和侵袭实验结果显示,miR-221组细胞的迁移和侵袭能力高于miR-NC组(迁移,miR-NC 110.30±7.79比miR-221193.00±4.73,t=9.071,P<0.01;侵袭,miR-NC 62.67±8.45比miR-221122.00±21.17,t=2.603,P<0.01);与lnh-NC组比较,lnh-221组细胞的迁移和侵袭能力低于lnh-NC组(迁移,lnh-NC 104.70±11.29比lnh-22173.67±6.12,t=2.410,P<0.01;侵袭,lnh-NC 55.67±8.11比lnh-22132.67±4.05,t=2.545,P<0.01)。在结肠癌LoVo细胞和SW48细胞中分别高表达和低表达miR-221,Western blot结果显示miR-221高表达可以使BRG1表达量降低,miR-221低表达可以使BRG1表达量升高。Luciferase实验中,miR-221高表达组BRG1 mRNA的转录活性低于miR-NC组(miR-NC 1.10±0.08比miR-2210.62±0.05,t=4.862,P<0.01),这提示miR-221可能直接与BRG1 mRNA 3’端非编码区(3’UTR)结合,发挥对BRG1的调控作用。在迁移和侵袭实验中,同时高表达miR-221和BRG1组(miR-221/Ad-BRG1组)细胞迁移和侵袭能力低于高表达miR-221组(miR-221/Ad-GFP组)(迁移,miR-221/Ad-GFP 163.30±9.39比miR-221/Ad-BRG127.33±2.33,t=14.063,P<0.01;侵袭,miR-221/Ad-GFP 75.33±8.19比miR-221/Ad-BRG111.67±1.33,t=7.674,P<0.01),这提示高表达BRG1可减弱miR-221促进结肠癌细胞
- 兰静芩张根山饶泽君罗学来李海杰
- 关键词：结肠癌微小核糖核酸
- 增殖细胞核抗原与p55PIK结合调控乳腺癌细胞MCF7增殖的研究被引量：3
- 2015年
- 目的观察p55PIK对乳腺癌细胞MCF7细胞周期及增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法通过转染质粒或特异性si RNA,在乳腺癌MCF7细胞中过表达或低表达p55PIK,继而通过免疫印迹法检测p55PIK的表达,通过Brd U/PI双掺入法测定细胞DNA合成及细胞周期,并用CCK-8(cell counting kit-8)试剂盒检测细胞增殖,最后通过免疫共沉淀技术检测明确p55PIK是否可以与增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)相结合。结果 p55PIK过表达质粒及si RNA可分别使MCF7细胞中p55PIK成功过表达或低表达,而且过表达p55PIK可加快MCF7细胞的DNA合成,p55PIK组[DNA合成比率为(56.33±1.63)%]与Vector组[DNA合成比率为(26.27±1.85)%]比较差异有统计学意义(P<0.01),过表达p55PIK促进MCF7细胞从G0/G1期进入S期,从而调节其增殖,p55PIK组[OD450nm:(1.46±0.04)]与Vector组[OD450nm:(1.16±0.16)]比较差异有统计学意义(P<0.05),而低表达p55PIK可抑制上述过程。免疫共沉淀证实p55PIK与PCNA之间可以相结合。结论 p55PIK可促进乳腺癌细胞MCF7细胞周期进程及增殖,而且p55PIK可与PCNA相结合。
- 杨熹李海杰李国东傅寅佳罗学来龚建平胡俊波
- 关键词：细胞周期增殖乳腺癌增殖细胞核抗原
- 小干扰RNA沉默赖氨酸去甲基化酶2A对结肠癌细胞增殖及侵袭能力的影响
- 2015年
- 目的观察小干扰RNA（siRNA）沉默赖氨酸去甲基化酶2A（KDM2A）基因对结肠癌细胞株LoVo增殖及侵袭能力的影响。方法构建针对KDM2A的特异性siRNA（siKDM2A），瞬时转染LoVo细胞，利用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）技术和Westernblot技术检测LoVo细胞中KDM2A基因表达；细胞计数试剂盒（CCK_8）增殖实验检测LoVo细胞转染siKDM2A后细胞增殖能力的变化；侵袭实验观察低表达KDM2A对LoVo细胞侵袭能力的影响；Westernblot法检测LoVo细胞低表达KDM2A后增殖细胞核抗原（PCNA）表达。结果Real—timePCR和Westernblot法验证siKDM2A转染成功；CCK一8增殖实验中，KDM2A低表达可抑制LoVo细胞的增殖能力；侵袭实验中低表达KDM2A细胞穿膜数目（33．0±3．3）个，较Blank组[（91．0±3．3）个]和siControl[（87．7±2．9）个]明显减少（P〈0．05）；低表达KDM2A细胞中PCNA表达量较对照组明显降低。结论低表达KDM2A基因可抑制结肠癌细胞株LoVo的增殖能力和侵袭能力。
- 谢二娟李海杰罗学来方华
- 关键词：结肠癌增殖
- 反式转录激活因子-氨基端24个氨基酸穿膜融合多肽对结直肠癌血管形成的影响被引量：1
- 2014年
- 目的 观察反式转录激活因子-氨基端24个氨基酸（TAT-N24）穿膜融合多肽对结直肠癌血管形成的影响.方法 对结直肠癌细胞Lovo过表达p55PIK和/或同时给予p55PIK的特异性抑制剂TAT-N24后,通过Western blot法检测乏氧诱导因子-1α的表达,通过双荧光素酶报告系统检测血管内皮生长因子-A的启动子活性,并用酶联免疫吸附试验检测其蛋白分泌,最后通过体外血管形成实验检测p55PIK及TAT-N24对结直肠癌血管形成的影响.结果 过表达p55PIK促进结直肠癌细胞株Lovo中乏氧诱导因子-1α的表达,进而增强血管内皮生长因子-A的启动子活性（p55PIK组比对照组,常氧：9.1±1.1比1.0±0.2,乏氧：14.5 ±1.6比1.0±0.3）,并且促进其在培养基上清中的分泌[p55PIK组比对照组,常氧：（412±23） mg/L比（150±18） mg/L,乏氧：（859±203） mg/L比（233±12） mg/L],而且其条件培养基可促进脐静脉内皮细胞形成血管,而TAT-N24可拮抗上述过程,抑制结直肠癌的血管形成.结论 p55PIK可促进结直肠癌的血管形成,而TAT-N24作为其特异性抑制剂,可抑制结直肠癌的血管形成.
- 杨熹李海杰王桂华陈成杨锐龚建平胡俊波
- 关键词：结直肠癌血管形成血管内皮生长因子
- Brahma相关基因-1调控乏氧诱导因子-1α参与结直肠癌血管生成被引量：1
- 2022年
- 目的观察交配型转换/蔗糖不发酵(SWI/SNF)复合体调节亚基Brahma相关基因-1(Brg-1)对结直肠癌血管生成的影响。方法对结肠癌细胞系LoVo细胞感染sh-Brg-1慢病毒(Lenti-sh-Brg-1组)和对照病毒(Lenti-con组),通过蛋白质印迹法(Western blot)及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测常氧及乏氧状态下乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的蛋白和mRNA水平的变化,运用体外微管形成实验观察低表达Brg-1对结直肠癌血管形成的影响,组间比较采用t检验。结果Western blot结果证明,与Lenti-con组比较,Lenti-sh-Brg-1组细胞中Brg-1蛋白表达量明显降低。在常氧及乏氧状态下低表达Brg-1可以明显降低HIF-1α及VEGF-A在蛋白表达量。在常氧状态下,Lenti-sh-Brg-1组细胞Brg-1(con 1.00±0比sh-Brg-10.53±0.08,t=5.292,P<0.01),HIF-1α(con 1.00±0比sh-Brg-10.61±0.07,t=5.380,P<0.01),VEGF-A mRNA水平低于Lenti-con组(con 1.00±0比sh-Brg-10.38±0.10,t=6.169,P<0.01);在乏氧状态下,Lenti-sh-Brg-1组细胞Brg-1(con 1.00±0比sh-Brg-10.07±0.02,t=44.680,P<0.01),HIF-1α(con 1.00±0比sh-Brg-10.21±0.05,t=14.280,P<0.01),VEGF-A mRNA水平低于Lenti-con组(con 1.00±0比sh-Brg-10.15±0.06,t=13.960,P<0.01)。最后证实在常氧和乏氧条件下,Brg-1低表达细胞条件培养基组的人脐静脉内皮细胞体外成管数目低于对照组(常氧,con 55.67±7.22比sh-Brg-122.33±5.36,t=3.706,P<0.05;乏氧,con 66.33±7.62比sh-Brg-135.68±4.91,t=3.382,P<0.05)。结论在LoVo细胞系中低表达Brg-1可以通过下调HIF-1α抑制血管形成。
- 兰静芩张根山饶泽君罗学来李海杰
- 关键词：结直肠癌血管形成血管内皮生长因子
