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杨俊兴: 作品数：135 被引量：388H指数：12; 供职机构：深圳出入境检验检疫局更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家质检总局科技计划项目国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>

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猴免疫缺陷病毒抗体免疫梳检测方法的建立及应用被引量：1: 2018年; 目的以基因工程技术制备猴免疫缺陷病毒(SIV)的SIV30蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳方法(IC)用于特异性检测实验猴血清中抗SIV的抗体Ig G。方法应用原核表达载体p GEX-4T-1构建SIV SIV30基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达,将该重组蛋白纯化后作为诊断抗原,建立免疫梳标准化检测程序,并应用于临床检测。结果最佳抗原包被量为0.02 mg/m L;制备好的IC均能够特异性检测到相应的SIV阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应,表明该检测方法特异性强;敏感性分析结果表明,SIV30蛋白能够敏感地检测到1∶400倍稀释的SIV阳性血清;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法在对10份可疑猴血清样品进行检测,IC与ELISA检测结果一致率为100.0%,Kappa=1.000。结论原核表达了SIV30蛋白,制备了IC,并应用于临床检测。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。; 李丹丹王绥家陈平亚张体银杨俊兴刘忠梅高慎阳; 关键词：猴免疫缺陷病毒抗体

鹿流行性出血病病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2009年; 为了更好的研究鹿流行性出血病病毒(EHDV)的生物学特性和建立EHDV免疫学检测方法,本研究用纯化的EHDV免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得了2株(1A5和8H6)能够稳定分泌抗EHDV单抗的杂交瘤细胞株。其细胞培养上清效价分别为1∶256和1∶512,腹水效价分别为1∶1024000和1∶2048000;McAb 1 A5和8H6的相对亲和力分别为0.9mg/L和0.7mg/L。间接ELISA结果显示,2株单抗仅与EHDV反应,不与蓝舌病病毒、赤羽病病毒、水疱性口炎病毒、小反刍兽疫病毒和BHK细胞反应,表明2株单抗特异性良好。这2株单抗的获得为研究EHDV生物学特性和建立EHDV检测方法奠定了基础。; 郭莹洁杨俊兴花群义徐聪林庆燕阮周曦陈兵卢体康詹爱军; 关键词：单克隆抗体

猴B病毒抗体免疫梳检测方法的建立: 2018年; 为了研究猴B病毒(BV)抗体的快速检测方法,试验以采用基因工程技术制备BV的BV32基因原核表达产物重组BV32蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳(IC)方法用于特异性检测试验猴血清中抗BV的抗体IgG。结果表明:最佳抗原包被量为0.01 mg/m L;制备好的免疫梳均能够特异性检测到相应的猴B病毒阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应;能够敏感地检测到1∶400倍稀释的BV阳性血清;同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法对40份猴血清样品进行检测,与ELISA法检测结果一致率为98%,Kappa系数为0.997。说明免疫梳检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。; 李丹丹田朝阳陈文慧张体银杨俊兴高慎阳; 关键词：IGG

实时荧光定量PCR检测畜禽肉制品中鸭源性成分被引量：13: 2016年; 根据鸭mtDNA COX基因上的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR用于检测畜禽肉制品中的鸭源性成分。结果表明,建立的方法特异性强,与鹅、鸡、羊、牛等15种动物DNA无非特异性扩增;灵敏度高,可检测1.0pg/μL鸭源DNA的存在;重复性好,同DNA浓度所测得Ct值的变异系数均小于3%;应用该法对模拟混合样品进行检测,结果与预期相符,且常见肉类DNA的存在并不影响该法对鸭源性成分检测的灵敏度。说明本试验建立的鸭源性成分实时荧光定量PCR法特异、敏感、稳定,可快速准确检测畜禽肉制品中含有的鸭源性成分。; 林彦星张彩虹阮周曦刘建利宗卉廖立珊孙洁杨俊兴吕建强花群义曹琛福; 关键词：实时荧光定量PCR

小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体的制备及鉴定: 2012年; 用基因工程表达的小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)H蛋白免疫Balb/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA方法筛选,获得2株稳定分泌抗PPRVH蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2C6和4B10),其细胞培养上清液ELISA效价分别为1:256和1:128,腹水ELISA效价分别为1:128000和1:64000。亚型鉴定表明,2C6和4B10分别为IgG2b和IgG2a。ELISA结果显示,2株单克隆抗体仅与PPRVH蛋白和PPRV反应,不与其它相关病毒反应,表明2株单克隆抗体特异性良好。这2株单克隆抗体的获得为研究PPRVH蛋白生物学特性及建立PPRV免疫学检测方法奠定了基础。; 孙洁杨俊兴吕建强阮周曦陶虹陈兵秦智锋花群义; 关键词：小反刍兽疫病毒单克隆抗体

鹿流行性出血病病毒VP7-ELISA抗体检测方法的建立被引量：2: 2009年; 以原核表达的鹿流行性出血病病毒(epizootic hemorrhagic disease virus of deer,EHDV)VP7蛋白为包被抗原,用HRP标记的兔抗羊IgG作为二抗,建立了检测EHDV群特异性抗体的间接ELISA方法(VP7-ELISA)。用VP7-ELISA方法检测EHDV阳性血清、其他病毒阳性血清及健康羊血清,结果表明,VP7-ELISA方法具有良好的特异性;用VP7-ELISA和琼脂扩散试验(AGID)检测EHDV阳性血清抗体效价,结果表明,VP7-ELISA的敏感性相当于AGID的8～16倍。用VP7-ELISA和AGID同时检测临床样品188份,VP7-ELISA的特异性和敏感性分别为95.9%和100%,两种方法的符合率为96.3%。表明VP7-ELISA可以代替AGID用于EHDV抗体检测。; 花群义杨俊兴郭莹洁吕建强曾少灵秦智锋陈兵阮周曦董俊; 关键词：酶联免疫吸附试验

水泡性口炎病毒N蛋白的原核表达和鉴定被引量：1: 2016年; 根据GenBank已公布的水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)N基因序列,设计上、下游引物,以VSV-NJ核酸为模板进行RT-PCR扩增,扩增产物克隆至pET52 3C/LIC载体中,成功构建了pET52-VSV N表达载体。将pET52-VSV N重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳分析,可见VSV N蛋白成功得到了表达,融合蛋白的分子量约为50KD,Western blot分析表明所表达的重组蛋白可与VSV阳性羊血清发生特异性反应,表达的VSV N蛋白可以作为建立VSV抗体检测方法的抗原。; 刘建利孙洁陈兵张彩虹吕建强花群义杨俊兴; 关键词：水泡性口炎病毒 N蛋白原核表达

非洲猪瘟病毒p30蛋白真核表达载体的构建及表达被引量：2: 2016年; 本文设计特异性引物扩增全长p30基因,得到585bp的目的片段,克隆至杆状病毒Bac-To-Bac表达载体pFastBac/NT-TOPO中,转化大肠杆菌DH10Bac进行同源重组,成功构建了含有p30基因的真核表达载体。转染Sf9细胞,回收得到重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,表达产物20kDa,与预期大小一致,能与AFSV阳性血清产生特异性反应。; 廖立珊孙洁刘建利花群义唐金明林彦星阮周曦张彩虹陶虹吕建强杨俊兴秦智锋林庆燕曾少灵; 关键词：ASFV 杆状病毒表达

鹿流行性出血病病毒抗体快速检测试纸条及其制备方法: 本发明公开了一种鹿流行性出血病病毒(EHDV)抗体快速检测试纸条及其制备方法。其主要应用截短的EHDV VP7表达抗原作为检测线试剂。利用抗原表位分析软件对EHDV VP7进行分析，选取含有主要抗原表位的片段，对其对应的...; 杨俊兴孙洁连慧香陈兵花群义吕建强曹琛福张彩虹卢体康胡运发秦智锋刘建利; 文献传递

基于McAb和IgG及安全抗原的猪水泡病新型试剂盒研发与应用: 花群义曹琛福杨俊兴祝贺卢体康吕建强阮周曦艾军曾少灵秦智锋张彩虹孙洁刘建立陈兵; 猪水泡病病毒VP1单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定:为了更好的研究猪水泡病毒(swine vesicular disease virus, SVDV)的生物学特性和建立SVDV免疫学检测方法,该研究用纯化的SVDV VP...; 关键词：; 关键词：试剂盒免疫学检测方法

杨俊兴

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