杨玉艾
- 作品数：72 被引量：205H指数：7
- 供职机构：云南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高层次科技人才培引工程国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人胎肺间充质干细胞分离培养条件及向心肌细胞诱导分化的可能关联被引量：3
- 2007年
- 目的:观察分离培养得到人胎肺间充质干细胞的条件,并分析诱导其转分化为心肌细胞的可能性及其相关因素。方法:实验于2003-01/2005-12在西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心完成。取10周龄人工流产胎儿肺组织,0.25%胰蛋白酶消化,经培养得到人胎肺间充质干细胞。观察细胞形态及增殖,测细胞生长曲线。将人胎肺间充质干细胞以1.8×104/孔接种于明胶预处理的24孔板中。加Dulbecco修正Eagle’s基础培养液培养24h后弃去培养液,磷酸盐缓冲液(-)洗两三次。每14孔为1组,分别加入Dulbecco修正Eagle’s基础培养液和先进的Dulbecco修正Eagle’s(分别添加2%、5%、8%和10%新生牛血清)5种不同的培养液,其后方法同上,每天选任意两孔计数,求平均值。用流式细胞仪对所分离第8代细胞进行以下细胞表面标志检测:CD45、CD11a、CD14、CD90、CD34、CD71、CD25、CD105、CD117、CD166和CD44。人胎肺间充质干细胞向心肌细胞诱导分化:将第12代人胎肺间充质干细胞以500个/孔接种于明胶预处理的24孔板中。每6孔为1组,分别在Dulbecco修正Eagle’s基础培养液中添加0、5、10、20μmol/L5-氮胞苷,每组中每2孔为一诱导时间段,分别诱导培养24,48,72h后换成Dulbecco修正Eagle’s基础培养液,以后每3d换液1次。观察细胞在各组中变化情况,诱导12d后固定进行糖元染色和α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色。结果:成功分离了人胎肺间充质干细胞,细胞已扩增至26代,流式细胞仪检测CD25、CD105、CD166和CD44表达阳性;CD71(39.1%)和CD117(29.8%)弱阳性。Dulbecco修正Eagle’s培养液比先进的Dulbecco修正Eagle’s培养液更适合于这类细胞生长。经10μmol/L5-氮胞苷诱导48h后,糖元染色、心肌α平滑肌肌动蛋白免疫组化染色阳性细胞率达60%以上。结论:①人胎肺间充质干细胞在Dulbecco修正Eagle’s基础培养液中能够大量扩增。②并表达CD25,CD105,CD166�
- 贾文文华进联于海生杨玉艾赵婷窦忠英
- 关键词：间质干细胞细胞学
- 表达猪瘟病毒石门株E0和/或E2基因重组非复制型腺病毒疫苗的免疫保护试验被引量：3
- 2007年
- 用已构建好的表达猪瘟病毒石门株E0基因的重组腺病毒pAd-E0、表达猪瘟病毒石门株E2基因的重组腺病毒pAd-E2以及联合表达猪瘟病毒石门株E0-E2基因的重组腺病毒pAd-E0-E2,肌肉和皮下接种免疫商品猪2次(间隔20 d),同时设非重组腺病毒PAD-CMV、常规猪瘟疫苗和空白对照组。二免21 d后进行CSFV石门株强毒超致死量(1 000倍TCID50)攻击,研究表达猪瘟保护性抗原基因重组腺病毒疫苗的免疫效果。结果表明,pAd-E0、pAd-E2和pAd-E0-E2免疫组猪的死亡率分别为50%,25%和25%,而常规猪瘟兔化弱毒疫苗免疫组的死亡率为40%,pAd-CMV免疫组和空白对照组猪全部死亡;在攻毒前,重组腺病毒免疫组抗体水平普遍较低,商品化疫苗免疫组能100%检测到抗体,而非重组腺病毒和空白对照没有检测到抗体;攻毒后pAd-E0、pAd-E2和pAd-E0-E2试验组中分别有75%,50%和50%猪体温超过40℃,常规苗试验组80%体温超过40℃,而PAD-CMV组和空白对照组所有试验猪体温均超过40℃,表明重组腺病毒疫苗具有一定的保护效果。表明,仅含有E0基因的重组腺病毒pAd-E0的免疫保护效果和常规疫苗还有距离;含有E2基因和E0-E2基因的重组腺病毒的免疫保护效果不亚于常规疫苗。
- 孙永科杨玉艾王养会李普华张彦明
- 关键词：猪瘟病毒重组腺病毒E0基因E2基因
- 细胞凋亡机制与主要检测方法研究进展被引量：3
- 2013年
- 细胞凋亡是一种由基因调控的细胞自主性死亡过程,在维持动物机体内环境平衡中扮演着极其重要的角色,是目前生命科学和医学领域各专业研究的一个热点。本文概述了与细胞凋亡的作用机制相关的基因:半胱氨酸基天冬氨酸-特异性蛋白酶(cysteinyl aspartate specific protease,Caspase)、Bcl-2基因家族、P53蛋白等,以及细胞凋亡的检测方法,比如形态学观察法、DNA片段化检测、流式细胞仪分析(flow cytometry assay,FCA)和凋亡相关因子Cas-pase活性的检测。为进一步了解细胞凋亡在疾病中发挥的作用以及对细胞凋亡作出快速、准确的检测奠定基础。
- 张晓敏杨玉艾杜敏孙永科
- 关键词：细胞凋亡
- 表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗在兔体上的免疫原性分析被引量：3
- 2015年
- 研究表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在兔体上的免疫原性,并确定其最小免疫保护剂量。将rAd-E0-E2按10倍梯度稀释为107.0 IFU、106.0 IFU、105.0 IFU,分别免疫接种家兔,14d后,用猪瘟脾淋苗对各组兔子进行攻毒。结果107.0 IFU组和猪瘟脾淋苗组均未出现定型热反应(0/4),脾重/体重指数比值分别为0.055%、0.05%,脾组织切片均未见充血、淤血,用RT-PCR和IFA方法均未检测到脾脏内有猪瘟脾淋苗病毒;106.0 IFU组3/4出现定型热反应,脾重/体重指数比值为0.074%,脾组织切片3/4可见充血、淤血,用RT-PCR和IFA方法可检测到3/4脾脏有猪瘟脾淋苗病毒;105.0 IFU组和对照组全部出现定型热反应(4/4),脾重/体重指数比值分别为0.099%和0.102%,脾组织切片充血、淤血严重,用RT-PCR和IFA方法均可检测到兔子脾脏内有猪瘟脾淋苗病毒。结果表明与对照组均不保护和猪瘟脾淋苗组全部保护相比,rAd-E0-E2在兔体的最小免疫保护剂量为107.0 IFU,本研究成功完成了rAd-E0-E2在兔体上的免疫原性分析。
- 张小苗张恒杨玉艾张志孙健陶晓珊李晓成范根成孙永科
- 关键词：猪瘟病毒重组腺病毒疫苗免疫原性
- RNA干扰及其在动物传染病方面的研究概况被引量：3
- 2012年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种沉默靶基因活动的过程,可以实现对特定的mR-NA的选择性降解,进而抑制其翻译过程。论文介绍了RNAi的发现、作用机理、作用特点及其在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、禽流感、新城疫、狂犬病等动物传染病方面的研究概况。
- 杨亮宇孙永科杨玉艾王凯王玉娥孔令富
- 关键词：RNAIMRNASIRNA
- 微量元素锌的研究进展被引量：2
- 2014年
- 锌元素是维持机体正常生理功能和生化代谢所必需的微量元素，被称为“生命元素”。它不仅参与机体的各种代谢而且还在骨骼发育、生殖、免疫、生物膜稳定和基因表达等生理机能中担负重要角色。
- 杜敏杨玉艾张晓敏孙永科
- 关键词：微量元素锌生化代谢生命元素骨骼发育生理机能锌元素
- 绿色荧光蛋白在胚胎干细胞研究中的应用被引量：5
- 2004年
- 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)作为一种方便、有效的活性标记物,无需外源反应底物,无需进行细胞或组织的固定和渗透处理,使检测更加方便。是细胞生物学和分子生物学研究的一个重要工具,已得到了广泛的应用。胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell.ES cell)是从早期胚胎中分离得到的多能细胞,在胚胎发育、细胞移植、组织器官构建、药物研制、基因治疗等研究方面发挥着巨大的作用。本文就GFP的特性及其在ES细胞研究中的应用作一简述。
- 杨玉艾华进联窦忠英
- 关键词：绿色荧光蛋白胚胎干细胞细胞生物学分子生物学
- 非典型性型猪瘟病毒云南株的分离鉴定及其E0/E2基因序列分析被引量：5
- 2009年
- 从云南10个地州13个大型猪场采集到的17份样品中分离得到5株猪瘟病毒。经测序鉴定昆明、玉溪、曲靖地区分离株的核苷酸序列99.99%同源,大理和宝山地区的核苷酸序列99.99%同源,5株分离毒均属于基因二群。5株分离毒在PK-15细胞上的平均毒价约为2×106TCID50/mL,应用荧光抗体染色可以检测到CSFV。通过RT-PCR扩增猪瘟病毒约1 200bp和700bp的E2和E0蛋白全部抗原编码区序列,并将其分别克隆到pMD18-T载体中。序列分析结果表明,5株分离株的E0和E2基因片段为697bp和1 173bp,与猪瘟病毒Shimen株的核苷酸同源性仅为95.4%和96.6%、82.5%和84.3%,与C-株的核苷酸同源性分别为94.1%和95.2%、83.3%和85.4%。动物试验结果表明,分离的2株猪瘟野毒不能引起典型的猪瘟症状,但是能持续带毒。
- 孙永科杨玉艾孔令富毕保良冷春永冷思明
- 关键词：猪瘟病毒
- 新发人畜共患传染病的防控策略
- 2011年
- 当今传染病总的形势是：经典的微生物引起的传染病尚未得到很好的控制，一些过去已经基本控制的病原性微生物却重新抬头，同时新的病原性微生物不断被发现，新的传染病以年均1种的速度不断发生。
- 杨玉艾江波孙永科
- 关键词：人畜共患传染病防控策略微生物病原性
- 非典型性猪瘟病毒云南株/石门株嵌合病毒的构建和拯救被引量：2
- 2012年
- 为研究猪瘟病毒(CSFV)云南株(YN株)突变位点在致非典型性猪瘟中的作用,本研究在CSFV石门株全长感染性克隆的基础上,利用分子克隆技术,将CSFV YN株的1 510位～1 532位、2 471位～2 658位、3 152位～3 176位和11 785位～11 816位突变位点基因序列替换CSFV石门株的相应基因序列,构建出嵌合的CSFV感染性克隆质粒pAC-SM-YN。全基因测序鉴定后,体外转录得到病毒RNA,经脂质体转染PK-15细胞方法拯救出了嵌合病毒vSM-YN。经直接荧光染色、对突变位点RT-PCR以及ELISA检测表明拯救嵌合病毒vSM-YN传代稳定。本研究为研究CSFV结构蛋白、病毒致病机理、新型疫苗,尤其是非典型猪瘟的致病机理奠定了基础。
- 孙永科孔令富张晓敏郑欢莉林明星陈海婷杨玉艾
- 关键词：猪瘟感染性克隆嵌合病毒
