林祥华
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
- 供职机构：福建医科大学附属协和医院更多>>
- 发文基金：福建省农科院青年科技人才创新基金福建省教育厅科技项目福建省卫生厅青年科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 反义bcl-2基因逆转录病毒表达载体的构建被引量：3
- 2001年
- 目的 克隆 bcl- 2基因 ,构建其不同反义核酸的逆转录病毒表达载体。 方法 设计一对两端带有Eco R 酶切位点的引物 ,RT- PCR克隆含 bcl- 2全部编码区的 848bp片段 ,并连接到 T载体 ,测序正确后正反向亚克隆到 p L XSN中 Eco R 位点 ;从 p Bluescript SK(- ) bcl- 2中用 Bam H 切下含有 bcl- 2阅读框起始部位的部分编码区亚克隆到 p L XSN Bam H 位点。 结果 构建带有正反向含 bcl- 2阅读框的全部编码区和部分编码区的逆转录病毒表达载体。 结论 在已知基因序列克隆中 ,联合 RT- PCR和 T载体是一个简单、快速、有效的方法 。
- 林祥华陈志哲杨婷吕联煌
- 关键词：逆转录病毒
- 自体树突状细胞活化的骨髓细胞对慢性粒细胞白血病骨髓的净化被引量：2
- 2001年
- 为考察慢性粒细胞白血病 (CML)患者自体树突状细胞 (DCs)活化骨髓细胞、净化骨髓的作用 ,采用免疫磁珠从 2例血液学缓解的CML骨髓单个核细胞 (BMMNCs)分离DCs,另取BMMNCs置T 2 5塑料培养瓶建立Dexter培养体系 ,分为 3份 ,第 1份为对照 ,第 2份加rhIL 2 ,第3份加自体DCs。每周取半量非贴壁细胞、计数、行CFU GM检测 ,然后加等量新鲜培养基继续培养。当非贴壁细胞总数 <2× 10 5时终止培养 ,收集贴壁细胞做CFU GM集落形成试验并检测CD34和P2 10表达。取贴壁细胞形成的CFU GM集落 ,抽提RNA ,用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测BCR ABL的表达。结果发现 ,在DCs加入CML骨髓Dexter培养体系培养后 1- 2周 ,非贴壁细胞的CFU GM产量明显下降 ,与rhIL 2的体系基本平行 ,同时体系中的P2 10阳性细胞显著减少。不过 ,培养 3周后含DCs的体系CFU GM产量下降减缓 ,而含rhIL 2的体系CFU GM产量持续下降。在含自体DCs的Dexter体系 ,贴壁细胞中CD34+ 细胞和P2 10 + 细胞比例最低 ,只是贴壁细胞产生的CFU GM集落中 ,BCR ABL(+ )的集落比例与不含DCs的体系比较无明显差别。这些结果说明自体DCs加入CML骨髓Dexter培养体系能减少白血病的祖细胞 ,包括成熟的祖细胞和原始的祖细胞 ,自体DCs有可能用于CML骨髓的体外净化。
- 陈君敏陈志哲魏秀妹林祥华
- 关键词：树突状细胞骨髓细胞慢性粒细胞白血病骨髓净化
- bcl-2反义寡核苷酸体外净化急性髓细胞白血病骨髓的研究
- 2008年
- 有效地体外净化自体造血干细胞移植（AHSCT）的移植物是减少移植后复发及提高疗效的重要手段，当前研究的净化方法还存在一些局限性，或不能彻底清除恶性克隆细胞，或对正常细胞有毒性作用，影响造血功能恢复。由于Bcl-2蛋白在急性髓细胞白血病（AML）的高表达，而且与化疗后白血病细胞残留及耐药直接相关，我们选用bcl-2反义寡核苷酸（bcl-2 AS-ODN）从基因水平阻断bcl-2的转录和表达，研究其对缓解骨髓细胞中残留的白血病细胞的凋亡诱导作用，及其对正常骨髓细胞的生长和造血功能的影响。
- 杨婷战榕胡建达林艳娟林祥华陈志哲
- 关键词：BCL-2反义寡核苷酸急性髓细胞白血病体外净化自体造血干细胞移植造血功能恢复BCL-2蛋白
- Bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸抑制HL-60细胞在重度联合免疫缺陷鼠中生长的研究被引量：3
- 2003年
- 目的分析bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(ASPO)抑制HL-60细胞在重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内致白血病作用, 探讨应用bcl-2 ASPO体外净化白血病可行性.方法应用终浓度为10 μmol/L ASPO和正义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(SPO)与HL-60细胞共孵育,7 d后,1×107个活细胞腹腔接种SCID鼠;在35 d后处死2组动物,用半巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SCID小鼠外周血、骨髓、肝脏、脾脏的HL-60细胞,组织病理观察它们浸润分布情况.结果 ASPO处理组HL-60细胞bcL-2表达下降,体外增殖抑制,凋亡,在SCID鼠中不会产生白血病,且未有残留;SPO组HL-60细胞不受影响,仍可在SCID鼠体内广泛增殖浸润,产生白血病.结论 bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸体外处理白血病细胞后可以抑制其体内增殖作用,可达到体外净化目的.
- 林祥华陈志哲林景娟吕联煌
- 关键词：BCL-2HL-60细胞免疫缺陷
- bcl-2部分编码区的反义RNA促进烷化溶血磷脂诱导的白血病细胞凋亡
- 2002年
- 林祥华陈志哲杨婷吕联煌
- 关键词：白血病细胞凋亡编码区BCL-2反义RNA烷化溶血磷脂
- 异基因骨髓移植中PCR-SSP和RFLP对HLA-DRB、DPB1分型的应用
- 2002年
- 目的:探讨序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）和聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）对HLA-DRB、DPB1分型在异基因骨髓移植中应用的可行性。方法:应用19对不同的DRB抗原所对应等位基因序列特异性的引物,PCR扩增供受者各20个样本DRB,产物直接琼脂糖凝胶电泳分析;同时用另一对引物PCR扩增DPB1第二外显子,产物10种限制性内切酶酶切分析。结果:各DRB带清晰可辨,直接确定为该型;DPB1的多态性片段编码转换后确定其基因型;4例找到供者。结论:它们是异基因骨髓植前快速、精确和可靠的基因分型手段。
- 林祥华陈志哲林敏辉吕联煌
- 关键词：异基因骨髓移植PCR-SSPRFLPHLA-DRB
- 人白血病细胞重度联合免疫缺陷小鼠模型的建立和监测被引量：14
- 2002年
- 目的 建立三种白血病重度联合免疫缺陷 (SCID)小鼠模型 ,探讨人体白血病细胞在 SCID小鼠体内的不同的生物学行为。 方法 在 SCID小鼠腹腔或静脉分别接种 5× 10 6 ～ 1× 10 7个 HL - 6 0、CEM、K5 6 2三种白血病细胞 ,应用 PCR、RT- PCR、流式细胞术、组织病理监测和追踪 SCID小鼠的外周血、骨髓、肝脏、脾脏的三种白血病细胞。 结果 白血病细胞 HL - 6 0、CEM、K5 6 2经过静脉或腹腔途径均可植入 SICD小鼠体内 ,形成典型白血病模型 ;CEM白血病细胞增殖和浸润最广泛。腹腔注射常能展现瘤块生长 ,生存周期比静脉注射短。 结论 SCID小鼠中白血病增殖和浸润程度反映了白血病细胞生物特性 。
- 林祥华陈志哲林景娟吕联煌
- 关键词：白血病动物模型SCID
