梁海英
- 作品数：102 被引量：260H指数：9
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 贵州省部分PEDV流行株ORF3基因克隆与遗传进化分析
- 2023年
- 为探究贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株的遗传进化情况,对2017—2022年贵州省不同地区13份PEDV阳性腹泻样本进行ORF3全基因扩增、克隆、测序,使用DNAstar、MEGA 7.0软件,对所得序列核苷酸和氨基酸同源性以及突变和遗传进化情况进行分析。结果显示:13份PEDV阳性样品的ORF3基因序列全长均为675 bp,编码224个氨基酸;13条克隆序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为95.1%~100%和96.4%~100%;13条克隆序列与经典毒株CV777株ORF3基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为95.9%~97.3%和94.7%~96.4%,同源性较低;与经典毒株CV777株相比,13条克隆序列在G160A、C243T、C274T、G301A、C450T、A497G存在相同的核苷酸突变,存在4个相同的氨基酸位点突变(V21A、V54I、A101T、N166S);13条克隆序列所在毒株在遗传进化上全部属于GⅡ型,其中GZ220514、GZ342、GZ224、GZ219、GZ423隶属于GⅡb亚型,GZ210112、GZ210129、GZ210220、GZ210714、GZ407、GZ210525、GZ330、GZ370属于GⅡa亚型(表明13份PEDV阳性样品所含毒株均为变异毒株);同一基因型的PEDV毒株ORF3基因相对较保守,但不同基因型差异较大;对所有参比株ORF3基因推导的氨基酸序列与CV777株进行比对,分析认为可以将25S、70V/F、80F、107F/V/L氨基酸突变模式作为GⅡa亚型的分子标记。本试验为分析贵州省PEDV流行以及遗传变异情况提供了参考,并丰富了贵州省PEDV ORF3基因序列。
- 万娟梁海英曾智勇汤德元王彬张婧旭柳佳佳边孟婷黄书潘向英田红利
- 关键词：猪流行性腹泻病毒ORF3基因遗传进化分析
- 猪圆环病毒3型在韩国猪群中的流行状况调查
- 2017年
- 猪圆环病毒（P0rcine circovins，PCV）是环状病毒科圆环病毒属的无囊膜病毒，基因组为单股环状DNA。众所周知，猪圆环病毒1型（PCVl）和猪圆环病毒2型（PCV2）对均猪具有感染性。但是，最早被鉴定为PK-15细胞污染物的PCVl已知对猪是无致病性的，而PCV2感染则可导致诸如断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）。
- Taeyong Kwon咸文梁海英曾智勇
- 关键词：猪群断奶仔猪多系统衰竭综合征猪圆环病毒1型PK-15细胞环状病毒
- 兔疥螨副肌球蛋白基因的RT-PCR扩增克隆与序列分析被引量：1
- 2008年
- 陶玉顺杨光友梁海英曾智勇
- 关键词：副肌球蛋白疥螨无脊椎动物
- 母猪初乳中猪圆环病毒3型的检测与分析被引量：4
- 2019年
- 猪圆环病毒3型(PCV3)是一种近年来被广泛报道的新型猪圆环病毒。尽管PCV3的发病机制尚不清楚,但已有文献报道表明,在临床上表现为母猪繁殖障碍,如流产、木乃伊胎、死胎,心肌炎,在猪皮炎肾病综合征(PDNS),呼吸道疾病及神经系统疾病等病症的猪体内均可检测到PCV3。同样,PCV3在健康猪群中也能被检测到。此外,在不同年龄段的猪体内也能检测到PCV3。
- 黄二素梁海英曾智勇Kedkovid R
- 关键词：猪圆环病毒母猪初乳猪皮炎肾病综合征母猪繁殖障碍
- 仔猪腹泻病例的RT-PCR诊断
- 2022年
- 2020年10月,贵州省安顺市某猪场7日龄仔猪由于腹泻导致大量死亡。为了查明死因,本试验对腹泻病死仔猪肠内容物分别进行了猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪丁型冠状病毒(PDCoV)的反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测。结果显示,TGEV、PEDV、PDCoV均为阴性,仅PoRV为阳性。参考GenBank中PoRV基因组序列,设计合成1对扩增VP7基因的通用引物并进行该基因片段的扩增和测序。结果显示,该PoRV VP7基因与PoRV G5血清型VP7基因属于同一分支。结果表明,导致该猪场7日龄仔猪死亡的病原体为PoRV G5血清型。
- 张婧旭梁海英曾智勇汤德元王彬万娟徐松平黄二素徐玉祝羊
- 关键词：猪轮状病毒VP7基因RT-PCR
- 猪伪狂犬病病毒GZ-Z1株的分离鉴定被引量：15
- 2011年
- 为获得1株猪伪狂犬病病毒贵州分离株,将贵阳市某猪场送检的流产胎儿病料经一系列处理后接种Vero细胞,并对分离毒株分别进行了病毒理化特性、电镜形态观察、中和试验、动物接种试验、核酸检测等鉴定。当盲传至第3代时,出现细胞变圆变亮、脱落、呈拉网状特征的细胞病变;分离毒不耐酸和热,对5-碘脱氧尿核苷和有机溶剂氯仿敏感,能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和;透射电镜下可见位于囊泡中呈近圆形、有囊膜、150～180 nm大小的成熟病毒粒子,在胞核中可见衣壳呈晶格状排列的病毒包涵体以及空心、实心2种无囊膜的病毒粒子;将分离毒株接种家兔,能引起家兔奇痒、麻痹死亡;PCR扩增产物经测序证明系PRV gD基因的部分序列。结果表明,成功分离获得了1株猪伪狂犬病病毒贵州株。
- 曾智勇周莉汤德元梁海英刘志杰李谦肖超能王彬王凤甘振磊
- 关键词：猪伪狂犬病病毒
- V5标记的猪圆环病毒2型Cap蛋白重组杆状病毒表达载体的构建被引量：1
- 2018年
- 试验旨在利用真核表达系统构建V5标记的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的表达载体。采用基因工程技术将V5标签引入到PCV2 ORF2基因C末端,并将标记基因定向克隆入pFastBacHTA载体,将pFastBacHTA-ORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使用脂质体介导法将鉴定后的重组杆状病毒质粒转染于Sf9细胞中;运用间接免疫荧光试验(IFA)、SDS-PAGE和Western blotting试验对Sf9细胞中V5标记Cap蛋白的表达进行验证。结果显示,本试验成功将V5标签引入到PCV2 ORF2基因末端,pFastBacHTAORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后获得了Bacmid-ORF2-V5重组杆状病毒质粒;IFA、SDS-PAGE和Western blotting试验结果显示,在Sf9细胞中能检测到重组杆状病毒V5标记的PCV2Cap蛋白,具有良好的反应原性,说明本试验成功获得一株rAcMNPV Cap-V5重组杆状病毒。试验结果为PCV2标记亚单位疫苗的研制提供一定的理论依据。
- 徐国梁海英曾智勇王彬黄涛汤德元代振江叶百川张爱琼何小莉咸文
- 关键词：重组杆状病毒
- 贵州省PCV-3和PCV-2双重感染的诊断与分析被引量：2
- 2018年
- 为了查明贵州省遵义市某猪场保育猪发生腹泻、咳喘、消瘦死亡的原因,试验采用PCR/RTPCR技术对送检样品分别进行了猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）和猪圆环病毒3型（PCV-3）的检测,并对PCR产物进行了测序分析。结果表明：送检的发病保育猪为PCV-3和PCV-2双重感染,序列分析显示该PCV-2毒株全长1 767 bp,属于PCV-2d型,且PCV-2 ORF2编码的氨基酸与疫苗株DBN-SX07-2同源性最高（94.2%）、与LG株同源性最低（91.8%）;获得的PCV-3序列大小为649 bp,属PCV-3c型,与PCV-3/KU-1609毒株核苷酸同源性最高（99.2%）,与PCV-3-China/GD2016毒株核苷酸同源性最低（96.4%）,遗传进化关系相对复杂;抗原表位分析发现,PCV-3毒株有多个核苷酸位点突变,但变异位点均不在预测的抗原表位中。说明在贵州省不仅有PCV-3的流行,还有PCV-3和PCV-2混合感染现象的存在。
- 张爱琼梁海英曾智勇汤德元王彬徐国咸文何小莉许清王明培
- 关键词：猪圆环病毒2型PCR技术
- 猪圆环病毒3型在瑞典猪群中的检测和遗传特征分析被引量：1
- 2018年
- 圆环病毒（PCV）是圆环病毒科圆环病毒属无包膜单股环状DNA病毒.从全球范围来看,目前在猪群中鉴定出的有3种不同类型：PCV1、PCV2和PCV3,PCV1被广泛认为是非致病性的,而PCV2与一系列猪圆环病毒疾病相关,导致广泛的临床症状,给全球猪生产造成严重经济损失.猪圆环病毒3型（PCV3）是一种新型圆环病毒,首次在美国发现,随后在中国、韩国、波兰和意大利等国家检出,其基因组大小为2？000？bp,主要编码Rep和Cap蛋白.
- 张爱琼梁海英曾智勇Ye
- 关键词：猪圆环病毒猪群PCV2DNA病毒基因组大小
- 猪轮状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
- 2024年
- 根据猪轮状病毒VP6基因序列保守区设计特异性探针和引物,建立一种特异、灵敏、通用、高效检测Po RV的实时荧光定量RT-PCR检测方法。扩增目的片段为173 bp,以构建的重组质粒p MD19-T-VP6为模板进行反应程序的优化。结果显示,该方法的标准曲线为y=-3.1139x+39.298,R^(2)=0.9937,E=109.5%;用该方法检测猪常发传染病病原时结果均为阴性;对标准品质粒的最低检测限为1.32 copies/μL;批内、批间变异系数分别小于0.600%、1.300%,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。利用该方法检测114份临床腹泻病料,阳性检出率(39/114)优于常规RT-PCR(22/114),39份阳性样品经测序鉴定均为Po RV,扩增VP7基因后成功构建22份阳性质粒,测序结果显示共检出6种G型Po RV,检出率依次为9.09%(G3)、22.72%(G4)、18.18%(G5)、31.82%(G9)、4.54%(G11)、9.09%(G26)。上述结果表明,本试验建立了一种快捷、准确检出Po RV的Taq Man探针通用型实时荧光定量RT-PCR方法,对该病的诊断、病原监测、流行病学调查具有重要意义。
- 柳佳佳梁海英曾智勇汤德元王彬叶泥边孟婷黄书田红利潘向英
- 关键词：猪轮状病毒TAQMAN探针荧光定量RT-PCR
