王世红
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
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- 口蹄疫疫苗Th佐剂的前期研究
- 口蹄疫/(foot-and-mouth disease, FMD/)是由口蹄疫病毒/(foot-and-mouth disease virus, FMDV/)所引起的一类急性传染病,该病主要是引起感染的动物的口、舌、唇、...
- 王世红
- 关键词：口蹄疫病毒原核表达T淋巴细胞增殖
- 文献传递
- 口蹄疫3D蛋白N端T细胞表位重组蛋白的表达、纯化及鉴定被引量：1
- 2012年
- 为获得具有抗原性的口蹄疫病毒(FMDV)3D蛋白N端T细胞表位的重组表达蛋白,根据FMDV3D蛋白前115位氨基酸序列,设计优化并人工合成相应的核酸序列,将其克隆至pET-28a中,构建原核表达质粒pET28a-115,并将重组质粒转化至BL21(DE3)细胞。经IPTG诱导后,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-bolt鉴定,结果显示,在16kD处有一条明显的蛋白表达条带。对表达产物进行可溶性分析,结果表达蛋白50%为可溶性蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后获得了较高浓度和纯度的目的蛋白。研究结果表明,含FMDV 3D蛋白前115位氨基酸的重组蛋白在大肠杆菌中得到了高效可溶性表达,并具有较好的抗原活性,为开发口蹄疫诊断试剂和基因工程疫苗奠定了基础。
- 卢清侠王世红金前跃李清州郝慧芳张改平
- 关键词：口蹄疫原核表达疫苗佐剂
- A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达纯化及活性检测被引量：2
- 2013年
- 为获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白,以A型vp1重组质粒pMD19T-A-vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-Avp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,SDS-PAGE显示VP1蛋白以包涵体形式获得高效表达,蛋白分子质量约为29ku。通过对IPTG浓度及诱导时间进行优化,结果表明,在37℃条件下,IPTG终浓度为0.3mmol/L,诱导表达6h后,VP1蛋白的表达量最大。Western-Blot分析表明,VP1重组蛋白能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别。ELISA检测结果显示,VP1包涵体蛋白经洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后具有较高的活性。
- 刘畅卢清侠杨继飞王世红王寅彪郭官鹏邓瑞广张改平
- 关键词：A型口蹄疫病毒VP1蛋白蛋白纯化活性鉴定
- 口蹄疫病毒3D蛋白C端Th表位的重组表达及免疫功能鉴定被引量：1
- 2013年
- 为获得含有口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D蛋白C端多个Th表位的重组表达蛋白,根据口蹄疫3DC端160个氨基酸序列,设计优化并人工合成相应的核酸序列,将其克隆至pET28a,构建原核表达质粒pET28a-C160,并将重组质粒转化BL21(DE3),0.5mmol/L IPTG诱导后,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果显示,在25ku处有一条明显的蛋白表达条带,且重组蛋白能与豚鼠抗O型口蹄疫病毒阳性血清发生特异性反应。对表达产物进行可溶性分析,结果显示,表达蛋白全部以包涵体形式存在,经变复性后获得较高质量浓度的纯化蛋白。可见:用纯化的3DC160蛋白作为Th佐剂与口蹄疫主抗原混合制成疫苗,免疫后能刺激猪体产生较高水平的口蹄疫抗体。
- 王世红张改平卢清侠金前跃刘畅常咏哲王爱萍
- 关键词：口蹄疫病毒TH表位原核表达蛋白纯化
- IBDV VP2蛋白P22表位多肽的原核表达及初步鉴定被引量：2
- 2012年
- 为了进一步了解传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白P22多肽抗原表位的功能,根据IBDVVP2蛋白的三维结构,设计合成编码P22多肽的基因序列,通过大肠杆菌密码子优化,并将基因序列P22串联二次合成并转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。用IPTG诱导P22基因的表达。表达纯化后的P22多肽经SDS-PAGE电泳和Western-blot分析及传染性法氏囊病毒快速检测试纸条检测。结果表明,P22表位多肽的分子质量约为16kD,并能被His单抗识别,用试纸条检测纯化的P22多肽,呈阳性反应结果。提示IBDV VP2蛋白P22多肽能与IBDV单抗特异性反应。
- 王倩倩张改平王选年宋幸辉卢清侠王世红王爱萍
- 关键词：法氏囊病毒SDS-PAGE
- 猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗原多肽的串联表达及活性鉴定
- 2011年
- 为获得含合成肽疫苗抗原多肽的重组表达蛋白,根据猪口蹄疫O型合成肽疫苗中抗原多肽的氨基酸序列,使用大肠杆菌偏好性密码子人工合成该抗原多肽的双拷贝基因序列,并克隆至表达载体pET32a中,构建原核表达质粒pET32a-P2。将重组质粒转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达,收集诱导的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果显示,在分子量27 kD处有1条明显的蛋白表达条带,且能被O型FMDV阳性血清识别。对表达产物进行可溶性分析,结果显示,表达蛋白几乎全部以可溶形式存在。表达蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白在27 kD处有单一目的条带,具有较高的纯度。ELISA检测结果显示,纯化的重组蛋白具有较高的活性。结果表明,该抗原多肽的双拷贝串联重复序列在大肠杆菌中得到了可溶性高效表达,为开发诊断试剂和基因工程疫苗奠定了基础。
- 卢清侠郭军庆郝慧芳杨苏珍邢广旭杨继飞王世红张改平
- 关键词：猪口蹄疫合成肽疫苗抗原多肽蛋白纯化活性鉴定
- A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达纯化及活性检测
- 前言口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMD virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。FMD的传播途径广泛,传染性强,曾在一些地区和国家多次发生...
- 刘畅卢清侠杨继飞王世红王寅彪郭官鹏邓瑞广张改平
- 关键词：A型口蹄疫病毒VP1蛋白蛋白纯化活性鉴定
