王乾宇
- 作品数：20 被引量：24H指数：3
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- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 抗蛔虫人源单链抗体库的构建及鉴定
- 2011年
- 目的:构建抗蛔虫人源单链抗体库,从中筛选建抗蛔虫人源特异性单链抗体.方法:分离10个患蛔虫病人的淋巴细胞,提取总RNA反转录为cDNA,PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建噬菌体单链抗体库.结果:初级库库容量为1.8×106,在大肠杆菌TG1中重组后得到1.6×106的次级抗体库.结论:本研究成功构建抗蛔虫人源单链抗体库,拟在为蛔虫病的预防、诊断、治疗奠定基础.
- 何光志田维毅高英王平王文佳奚锦俞琦王乾宇黄高
- 关键词：蛔虫单链抗体
- 抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选
- 2012年
- 为了构建抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体库,从中筛选抗乙肝病毒人源噬菌体单链抗体库特异性单链抗体,试验提取患者外周淋巴细胞总RNA,以总RNA为模板,通过RT-PCR技术分别扩增出H链和L链可变区基因,采用SOE-PCR方法将VH和VL片段随机拼接成ScFv片段,然后将ScFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转E.coil TG1,构建抗乙肝病毒人源单链抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体。结果表明:经过5轮筛选,获得2株能与乙肝病毒抗原特异性结合的阳性克隆。说明利用噬菌体抗体技术可不经免疫制备抗乙肝病毒人源噬菌体特异性单链抗体。
- 何光志田维毅高英王平王文佳奚锦俞琦王乾宇黄高蔡琨安传伟
- 杜仲多糖对糖尿病模型小鼠血清SOD、GSH-Px和MDA的影响被引量：9
- 2016年
- 目的 :探讨杜仲多糖对糖尿病小鼠血清中SOD、GSH-Px和MDA的影响。方法 :将健康昆明种小鼠随机分为6组,正常对照组、糖尿病模型组、杜仲多糖高、中、低剂量干预组和盐酸二甲双胍干预组,后五组进行糖尿病造模。造模成功后杜仲多糖组和盐酸二甲双胍组分别连续灌胃给药进行治疗14 d后,从每组小鼠中随机取10只取尾静脉血测定血糖,ELISA法检测小鼠血清SOD、GSH-Px和MDA水平。结果 :与正常对照组相比,模型组小鼠血清血糖浓度、SOD和GSH-Px水平显著降低(P<0.05),MDA含量显著上升(P<0.05);与模型组比较,杜仲多糖和盐酸二甲双胍能显著降低小鼠血清血糖浓度和MDA水平(P<0.05)、升高血清SOD和GSH-Px水平(P<0.05)。结论 :杜仲多糖能明显升高糖尿病模型小鼠血清中SOD和GSH-Px水平和降低MDA水平,这可能是杜仲配伍治疗糖尿病的机制之一。
- 王乾宇何光志黄高
- 关键词：杜仲多糖糖尿病模型GSH-PXMDA
- 凤冈野生天麻抗真菌肽基因(gaf)的克隆与序列分析被引量：1
- 2011年
- 为了克隆凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf),以凤冈野生天麻的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增抗真菌肽基因(gaf),经克隆和测序结果显示:RT-PCR产物电泳扩增的目标条带长度为545 bp;经测序和序列分析,该基因与Genebank中公布的序列编码天麻抗真菌蛋白的基因序列(AY032588)同源性达97%。此研究成功地克隆了凤冈野生天麻抗真菌肽编码基因。
- 何光志田维毅王平王文佳奚锦俞琦黄高蔡琨王乾宇刘安胜安传伟查高武张鹏
- 关键词：野生天麻克隆
- 贵州野生天麻抗真菌肽基因表达载体的构建被引量：1
- 2011年
- 为了构建凤冈野生天麻的抗真菌肽基因(gaf)的表达载体,经BamHI和HindIII酶切的pMD18-T-gaf和pET32a(+)质粒的纯化回收产物并进行连接,连接产物pET32a(+)-gaf转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,采用菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析。结果表明:构建的凤冈野生天麻抗真菌肽基因表达载体通过菌落PCR、酶切鉴定和阳性质粒测序分析,目的片段成功插入载体,目的片段与预期的gaf基因大小(545 bp)相符。试验成功构建了贵州野生天麻抗真菌肽基因表达载体,pET32a(+)-gaf可以用来制备抗真菌蛋白。
- 何光志田维毅王平王文佳奚锦愈奇刘蕾黄高蔡琨韩洁王乾宇刘安胜安传伟查高武张鹏
- 关键词：野生天麻抗真菌肽基因
- 抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库的构建及筛选
- 2012年
- 为了构建重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库,试验用重组蛋白AD41抗原免疫接种Balb/c小鼠,提取小鼠脾脏总RNA,以总RNA为模板经RT-PCR合成cDNA,再以cDNA为模板,用小鼠免疫球蛋白重链和轻链设计引物,分别扩增重链和轻链可变区基因,利用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成单链抗体(ScFv)片段,将其克隆入质粒表达载体pCANTAB5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单链抗体库。结果表明:从30个噬菌体克隆中筛选到25个阳性克隆。说明成功地构建了抗重组猪蛔虫抗原AD41蛋白鼠源性单链抗体库。
- 何光志王文佳田维毅王平奚锦俞琦黄高蔡琨王乾宇
- 关键词：猪蛔虫单链抗体库抗原
- 重组蛔虫ALAg蛋白抗原检测抗蛔虫抗体间接ELISA方法
- 本发明公开了一种重组蛔虫ALAg蛋白抗原检测抗蛔虫抗体间接ELISA方法，该方法以蛔虫成虫虫体或者感染性虫卵的RNA为模板，利用RT-PCR扩增出ALAg基因，构建ALAg表达载体并转化表达菌进行诱导表达，纯化重组蛋白，...
- 何光志田维毅安传伟王平黄高王文佳俞琦奚锦王乾宇
- 文献传递
- 抗类风湿人源单链抗体库的制备及筛选
- 2011年
- 目的通过噬菌体展示技术构建抗类风湿人源单链抗体库,为其进一步的临床应用研究奠定基础。方法提取患者外周淋巴细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以人源免疫球蛋白H链和L链可变区的扩增引物,分别扩增出H链和L链可变区基因。采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建噬菌体单链抗体库。结果初级库库容量为3×106,在大肠杆菌TG1中重组后得到1.2×106的次级抗体库。结论本研究成功构建类风湿人源单链抗体库,拟为类风湿病的预防、诊断、治疗奠定基础。
- 何光志田维毅王平王文佳奚锦俞琦王乾宇黄高韩洁蔡琨安传伟
- 关键词：关节炎类风湿人源单链抗体
- 抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌鼠源化噬菌体抗体库的构建及筛选
- 2011年
- 用灭活的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌免疫小鼠后,取出小鼠脾脏提取总RNA,以RT-PCR扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,以重叠延伸PCR(SOE-PCR)法将VH和VL拼接成ScFv基因,克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中,转化大肠杆菌E.coli TG1,构建鼠源抗金黄色葡萄天然噬菌体抗体库。研究结果表明,构建的鼠源性抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库库容为3.2×106,多样性良好,共筛选出8个阳性克隆。说明已成功构建抗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库,为筛选有效治疗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌奠定了基础。
- 何光志田维毅高英王平王文佳王乾宇奚锦俞琦黄高安传伟
- 关键词：甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌抗体库单链抗体库
- 间接ELISA检测蛔虫抗体方法的建立
- 2011年
- 目的寻找能更准确地对蛔虫感染进行检测的方法。方法以蛔虫虫卵可溶性蛋白为抗原,建立检测蛔虫特异性抗体的间接ELISA方法。结果 ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为1μg/mL,血清最佳稀释度为1∶80,酶标二抗的最佳工作浓度为1∶8 000。对100份人血清样本采用本方法进行检测,其阳性检出率为10.0%;血清样本对应粪便样本进行现场粪检虫卵法确定阳性率为2.0%。结论建立了稳定而特异的抗蛔虫体IgG的间接ELISA检测方法,可用于蛔虫感染的临床监测。
- 何光志田维毅高英王平王文佳奚锦俞琦曹峰黄高蔡琨韩洁王乾宇安传伟刘安胜
- 关键词：蛔虫间接ELISA
