王勃
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- hsa-miR-150慢病毒表达质粒的构建及鉴定
- 2012年
- 目的构建hsa-miR-150慢病毒表达质粒,并鉴定其感染肝癌细胞系Hep3B后miR-150的表达水平。方法根据hsa-miR-150序列化学合成hsa-miR-150基因片段,克隆至慢病毒载体pGIPZ上,构建重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR-150,转染包装细胞293T进行包装,检测病毒滴度。收获并浓缩重组慢病毒颗粒,稳定转染Hep3B细胞,流式细胞术检测GFP的表达率;荧光定量PCR检测miR-150的表达水平。结果重组慢病毒表达质粒pGIPZ-hsa-miR-150经菌落PCR及测序证实构建正确;重组慢病毒的滴度约为5.7×108 TU/ml;稳定转染Hep3B细胞后,GFP的表达率为(97.78±1.14)%,重组慢病毒转染组miR-150的表达水平较空白对照组增加约6倍(P<0.05)。结论成功构建了hsa-miR-150慢病毒表达质粒,其在Hep3B细胞中可高效表达,为进一步研究miR-150的生物学功能奠定了基础。
- 张俊张涛王勃李少林
- 关键词：微RNAS慢病毒载体肝肿瘤
- CXCR4在不同转移潜能肝癌细胞中的表达及意义被引量：5
- 2012年
- 目的研究趋化因子受体CXCR4在高、低转移潜能肝癌细胞中的表达,并探讨其在肝癌细胞增殖和侵袭转移过程中的作用。方法利用3B肝癌细胞株对人工基底膜穿透能力的差异获得不同转移潜能肝癌细胞亚系,并通过Transwell小室侵袭实验比较两细胞亚系的侵袭能力从而对其进行验证,应用RT-PCR和Western blot检测CXCR4在两细胞亚系中的表达。CCK8法检测两细胞亚系生长曲线和倍增时间,流式细胞仪检测两细胞亚系细胞周期和凋亡率。结果成功筛选出高、低转移潜能肝癌细胞亚系,并通过Transwell小室侵袭实验证实高转移潜能肝癌细胞的侵袭能力高于低转移潜能肝癌细胞;RT-PCR和Western blot均显示高转移潜能肝癌细胞在基因水平和蛋白水平的CXCR4表达均显著高于低转移潜能肝癌细胞;且两细胞亚系体外生长速度、倍增时间、细胞周期和凋亡率差异均具有统计学意义。结论上述结果表明CXCR4在肝癌进展中发挥重要的作用,可能为未来肝癌的诊疗提供理论依据。
- 王勃李少林张俊胡敏袁犁
- 关键词：肝癌趋化因子受体CXCR4TRANSWELL
- 上调microRNA-150表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响被引量：7
- 2012年
- 目的探讨上调microRNA-150(miR-150)表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法 SMMC7721细胞分成miR-150感染组(加入pGIPZ-miR-150慢病毒表达载体)、阴性对照组(加入只含GFP的慢病毒载体)和空白对照组(不转染)。采用荧光定量PCR检测miR-150的表达情况,Western blotting检测靶基因c-Myb蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果荧光定量PCR结果显示,转染miR-150pGIPZ后,SMMC7721细胞miR-150表达量(2.48±0.15)较阴性对照组(0.81±0.09)增加了2倍(P<0.01)。CCK-8法检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组比较,miR-150组的细胞增殖率显著降低(P<0.05)。Western blotting检测结果表明,miR-150组细胞c-Myb蛋白表达(0.31±0.07)与空白对照组(0.80±0.09)及阴性对照组(0.81±0.08)相比明显减少(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,miR-150组细胞凋亡率(19.36%±1.78%)与阴性对照组(5.12%±0.54%)及空白对照组(4.68%±0.35%)相比明显增加(P<0.01)。结论上调miR-150表达可通过降低靶基因c-Myb的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-150可能成为肝癌靶向治疗新的靶基因。
- 张俊罗娜王勃李少林朱辉
- 关键词：肝肿瘤细胞增殖细胞凋亡微RNAS
- γ分泌酶抑制剂阻断Notch1信号通路对人结肠癌耐药细胞化疗敏感性的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨应用γ分泌酶抑制剂(Gamma-secretase inhibitor,GSI)阻断Notch1信号通路后对人结肠癌耐药细胞株SW480/L-OHP化疗敏感性的影响。方法应用人结肠癌细胞系SW480,以反复诱导、逐渐递增奥沙利铂(L-OHP)浓度的方法,体外构建耐药细胞株SW480/L-OHP。采用CCK-8法检测细胞株对L-OHP的耐药指数,RT-PCR法检测survivin、notch1、hes1、cyclinD1基因mRNA的转录,Western blot检测Notch1和Hes1蛋白的表达。将耐药细胞分成对照组、L-OHP组(3.0μmol/L)、GSI组(10μmol/L)和GSI+L-OHP组,分别处理后,检测各组细胞的抑制率、凋亡率及survivin、notch1、hes1、cyclinD1基因mRNA的转录水平和Notch1、Nicd、Hes1蛋白的表达水平。结果与SW480亲本细胞相比,SW480/L-OHP细胞中survivin、notch1、hes1和cyclinD1基因mRNA转录水平及Notch1和Hes1蛋白表达水平均上调。GSI组耐药细胞的增殖受到抑制,GSI+L-OHP组抑制作用更明显;GSI组耐药细胞survivin、hes1、cyclinD1基因mRNA转录水平下调,Nicd和Hes1蛋白表达水平下调,GSI+L-OHP组下调更明显。结论 GSI通过阻断Notch1胞内段Nicd的释放,影响下游Hes1基因和蛋白的表达,从而抑制SW480/L-OHP细胞增殖,提高其化疗敏感性;且与L-OHP联合使用具有协同作用。
- 胡敏李少林袁犁王勃
- 关键词：结肠肿瘤NOTCH1
- CXCR4在不同转移潜能肝癌细胞中的表达及意义
- 目的：研究趋化因子受体CXCR4在高、低转移潜能肝癌细胞中的表达，并探讨其在肝癌细胞增值和侵袭转移过程中的作用。 方法：利用3B肝癌细胞株对人工基底膜穿透能力的差异获得不同转移潜能肝癌细胞亚系，并通过Trans wel...
- 王勃
- 关键词：肝癌细胞周期
- 文献传递
