王团结 作品数:38 被引量:55 H指数:4 供职机构: 中国兽医药品监察所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 北京市科技计划项目 北京市自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 环境科学与工程 更多>>
猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立与应用 被引量:1 2023年 为建立一种高效准确检测猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的实时荧光定量PCR方法,以FIPV N基因为靶基因设计特异性探针和引物,构建质粒标准品。通过优化反应条件,建立real-time PCR方法,并进行临床检测。经方法优化,所建立方法的标准曲线为y=-3.137x+42.243,R^(2)值为0.999,扩增效率E为108.0%。该方法与猫瘟病毒(FPV)、猫疱疹病毒(FHV)和猫杯状病毒(FCV)无交叉反应,特异性良好;检测最低拷贝数为9.250 copies/μL,比常规PCR方法高出100倍;组内、组间变异系数均小于5.0%,重复性好。采用建立的方法和EvaGreen real-time PCR方法对39份临床样品进行检测,结果,检出阳性样品数分别为24和22,经Kappa检验,两者高度一致。上述结果表明,本研究成功建立了高效、敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,可用于FIPV的临床病例检测。 刘妍 黄金龙 杜吉革 朱真 朱真 陈小云 王团结 罗玉峰 孙卫东关键词:实时荧光定量PCR 猪瘟病毒中等致病力毒株在体内的动态分布 被引量:1 2018年 【目的】目前我国猪瘟的感染类型主要是亚急性感染及慢性感染,研究猪瘟亚急性感染后体内病毒RNA和蛋白的分布情况,有助于阐述亚急性病程猪瘟病毒的复制分布规律,为猪瘟的早期诊断和预防奠定重要基础。【方法】成功以中等致病力毒株(HeBHH1/95)构建了亚急性猪瘟感染动物模型,分别采集感染后第1、3、6、10、13、20、24、28天感染猪的十二指肠、脾脏、肾脏、肺脏、胰、回盲瓣6种组织器官并进行连续切片。应用建立的猪瘟病毒可视化原位杂交技术(ViewRNA ISH)研究感染组织中病毒RNA动态分布,同时采用免疫组化(IHC)、H.E染色分别检测感染组织中蛋白的分布情况及其组织损伤位置,从而在病毒核酸和蛋白水平系统性的观察病毒的分布情况。【结果】采用Mittelholzer方法进行临床计分发现感染后6—10 d感染猪猪瘟临床症状记分迅速增加,11—26 d感染猪临床记分一直维持在15分左右,直到28 d临床记分达到最高值20分。感染后8—10 d感染猪体温呈上升趋势;13—24 d感染猪体温呈现稽留热,持续在40℃左右;此后体温开始回落,至濒死前体温回落至39.5℃左右。应用CSFV ViewRNA ISH感染后第1天在十二指肠绒毛杯状细胞及胰腺的腺泡、回盲瓣的固有层、肾脏的肾小管等这些具有分泌功能的结构组织周围检测到病毒RNA阳性信号;感染后第3天在肺脏的细支气管和脾脏的椭圆体周围检测到病毒RNA阳性信号;第13天阳性信号富集显著,至第28天病毒RNA广泛分布在脾脏动脉周围淋巴鞘及胰腺腺泡和肾小管等组织周围。采用IHC和H.E染色法在连续切片的相似视野下验证ViewRNA ISH检测结果,发现感染后第1天十二指肠、胰腺、肾脏亦可检测到病毒蛋白阳性信号和相应组织的病理变化,但回盲瓣在第3天检测到病毒蛋白阳性信号和组织的病理变化,在之后的病程中各组织中病毒RNA、蛋白定位情况� 孙骏翔 张乾义 徐和敏 王团结 徐璐 邹兴启 朱元源 李翠 夏应菊 徐嫄 陈锴 张玉杰 赵启祖 王琴关键词:猪瘟病毒 RNA 犬细小病毒BJ06/06株致病模型的初步建立 2023年 犬细小病毒在全国乃至世界范围内广泛流行,而现阶段常用的疫苗对新变异毒株的预防效果并不理想。在新型疫苗的研发过程中,亟需建立评价动物免疫效果的流行毒株攻毒标准。通过对比格犬进行犬细小病毒流行毒株的人工感染试验,从临床症状、血液生化和病理变化等对患病犬进行多维度的综合评价。结果显示,患病犬均表现出了典型的体温升高、呕吐、精神沉郁、腹泻、血便等临床症状,白细胞数量显著降低,血浆白蛋白含量降低、碱性磷酸酶和血清磷含量升高,且不同攻毒剂量组间有显著差异。本研究初步建立了犬细小病毒(BJ06/06株)的致病模型,接种方式为每只比格犬灌服5 mL病毒液(104.5 TCID 50/0.1mL),同时左右后肢各肌肉注射1 mL病毒液。本模型为后续犬细小病毒病新型疫苗的研发和免疫效果评价提供了参考依据。 赵洋 杜吉革 朱真 刘妍 黄金龙 王团结 罗玉峰 印春生关键词:犬细小病毒 流行毒株 临床症状 血液生化 病理变化 基于FIPV S蛋白单抗的竞争ELISA方法建立及应用 2024年 为给猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的流行和地理分布提供有价值的检测手段,以FIPV S蛋白为包被抗原,利用FIPV的特异性单克隆抗体(FIPV MAb 3D8)为竞争抗体,经条件优化,建立一种快速检测FIPV抗体的竞争ELISA法。优化结果表明最佳条件为:包被抗原质量浓度10μg/mL,血清稀释度1∶4;FIPV MAb 3D8稀释倍数1∶100,酶标二抗稀释倍数1∶5000;CBS在37℃包被1 h,5%BSA在37℃封闭2 h,FIPV MAb 3D8在37℃孵育1 h,TMD底物显色液37℃避光5 min。临界值PI≥25.76%时为阳性,PI<20.22%为阴性。该方法特异性较强,重复性较好。利用该方法和已发表的其他方法同时对来自宠物医院的62份临床血清样本进行检测,总体符合率为85.5%,表明该方法准确性较高。本研究建立了快速准确测定FIPV抗体的竞争ELISA方法,适用于临床样本检测,为猫传染性腹膜炎的鉴定、防控和流行病学调查提供支持。 刘妍 刘妍 朱真 朱真 张石豪 王团结 王团结 印春生 印春生关键词:竞争ELISA 单克隆抗体 禽结核菌素生产用菌种的制备与鉴定 2023年 为制备禽结核菌素国家标准品,研究禽结核菌素生产用菌株禽分枝杆菌的菌种特性,对1992年冻干保存的3株菌CVCC68201、CVCC68202和CVCC68203进行复苏,采用SPF鸡复壮,分离培养后冻干了新批次菌种,对菌种形态、生化特性、培养特性、毒力和抗原性进行了鉴定。结果表明,制备的菌种纯粹,形态、生化和培养特性符合禽分枝杆菌的生物学特征,免疫原性符合的兽用生物制品质量标准的规定。本研究为禽分枝杆菌的鉴定提供参考,也为制造禽结核菌素的工艺改进奠定基础。 王楠 辛凌翔 徐磊 程君生 王团结 任小侠 毛开荣 李俊平新型重组H7N9禽流感研究进展 被引量:3 2018年 H7N9禽流感病毒是威胁人类健康的主要病原之一,自2013年3月爆发至2018年3月,已造成1438人感染,病死率高达39.63%。从H7N9病毒的生物学特性和遗传演化分析、H7N9病毒流行病学调查数据、病毒致病机制方面综合系统地对H7N9禽流感的综合防控措施进行综述,预测H7N9存在人际传播的可能性,以期为新型H7N9流感病毒的监测和预防提供参考。 赵俊杰 王团结 姚文生 康凯 陈耀星 徐和敏 张乾义 何伟勇关键词:生物学特性 流行病学调查 个人防护装备在高等级兽医生物安全实验室中的使用原则 被引量:2 2019年 兽医生物安全实验室的个体防护包括个体防护装备和防护操作程序,其中个体防护装备是用于防止实验室工作人员受到生物性、化学性或物理性等危害因子伤害,而穿戴和配备的器材和用品的总称。实验室内不同区域面对生物因子的暴露风险等级不同,导致各区域的防护级别不同,因此应采取相应的防护措施,选择适合的个人防护装备。 吴思捷 李增顺 康凯 姚文生 张媛 李宁 王团结 张一帜 万建青 王利永关键词:兽医 生物安全 个体防护装备 单色光对鸡胚肝脏发育和IGF-1分泌的影响及其作用的信号通路 前期研究证实不同波长的单色光能够影响孵化期鸡胚骨骼肌卫星细胞的增殖与分化。而类胰岛素生长因子IGF-1是调控肌肉生长发育的重要因子,但是光色信息对鸡胚肝脏IGF-1分泌的影响及其作用机理尚不清楚。本研究利用鸡胚孵化期间给... 王团结关键词:单色光 鸡胚 肝脏 IGF-1 一种山羊痘病毒单克隆抗体及其应用 本发明涉及医药技术领域,具体涉及一种山羊痘病毒单克隆抗体及其应用。一种具有免疫原性的蛋白rGP32Δ,所述蛋白rGP32Δ的编码序列如SEQ ID No.1的第4~717位所示;所述的蛋白rGP32Δ的氨基酸序列如SEQ... 杜吉革 陈小云 刘莹 王团结 朱真 曾荟燕 李婉清 姚文生不同波长光照对鸡胚肝脏褪黑激素受体表达的影响 本研究旨在探究不同波长光照对鸡胚肝脏褪黑激素受体表达的影响。选用AA肉鸡鸡胚,按试验要求随机分为5组,蛋壳上的光照强度为151x,在E21取肝脏用于PCR、Westernblot和免疫组化研究。结果表明,在鸡胚孵化期给予... 王团结 王子旭 董玉兰 曹静 陈耀星关键词:光波长 鸡胚 褪黑激素 文献传递