王宏斌
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 中心体异常与白血病
- 2007年
- 中心体（centrosome）作为大多数真核细胞的主要微管组织中心（microtubule organizing center），在有丝分裂纺锤体（mitotic spindle）的形成及染色体的分离过程中扮演了重要角色。几乎所有的实体瘤都发生了不同程度的数量和结构中心体异常。此外，中心体异常已经在几种不同的白血病中有所研究，如急性髓系白血病、慢性髓系白血病、慢性淋巴细胞白血病和成人T细胞白血病等。中心体异常与肿瘤进展及临床侵袭性之间存在着一定相关性，并导致非整倍体（aneuploid）和基因组不稳定（genome instability）。
- 王宏斌冯文莉
- 关键词：中心体白血病细胞周期有丝分裂
- 野生型p53对白血病K562细胞中心体过度复制的抑制作用被引量：1
- 2009年
- 背景与目的:肿瘤组织细胞中p53基因突变或缺失是导致非整倍体的发生和基因组不稳定的主要原因之一;最近研究发现慢性粒细胞白血病(chronicmyelogenous leukemia,CML)各期患者均有中心体异常,且异常的程度与临床分期有关,急变期显示更为严重的中心体异常。本研究建立携野生型p53基因的CML急变K562细胞株,以研究该细胞内野生型p53基因表达后p53信号转导通路对K562细胞中心体的影响。方法:用HEK293细胞扩增重组p53野生型、突变型及空载腺病毒载体,联合polybrene分别感染K562细胞;未接受感染的细胞作为空白对照。流式细胞术检测重组腺病毒载体感染效率,Western blot检测P53蛋白表达。间接免疫荧光染色后用激光共聚焦计数K562细胞中心体的变化。Western blot检测p53信号转导通路下游效应分子生长阻滞和DNA损伤应答基因Gadd45a(growth arrest and DNAdamage)、BubR1(Bub1related)、Aurora A的表达。结果:成功建立携野生型p53基因的K562细胞株,腺病毒载体感染效率达60%以上,野生型p53可在K562细胞中持续表达。感染72h后,携野生型p53基因的K562细胞中中心体数量异常(n>2)的细胞比例降至(0.38±0.02)%,与空白对照组(0.71±0.14)%比较其差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot结果发现p53信号转导通路下游效应分子Gadd45a、BubR1表达分别上调93%、88%,而Aurora A的表达下降56%(P值均<0.05)。结论:重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达;野生型P53蛋白可能通过转录激活-依赖途径上调Gadd45a、BubR1表达以及转录激活-非依赖途径使Aurora A的表达下降,从而抑制K562细胞中心体的过度复制。
- 田文君冯文莉王宏斌黄世峰曹唯希黄宗干
- 关键词：P53基因中心体K562细胞AURORA
- 野生型p53基因对白血病K562细胞增殖抑制作用及机制被引量：1
- 2008年
- 目的:研究重组腺病毒介导的野生型p53基因(Ad5wtp53)对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制.方法:分别将含有Ad5wtp53,突变型p53基因(Ad5mtp53)和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体(Ad5GFP),联合阳离子多聚季胺(polybrene)共感染K562细胞,经RT-PCR和Western Blot检测p53mRNA和P53蛋白的表达后,应用流式细胞术分析K562细胞周期、DNA含量的变化.WesternBlot检测P21蛋白、核磷蛋白(NPM)、磷酸化核磷蛋白(Thr199-NPM)的表达情况.结果:Ad5wtp53和Ad5mtp53能在K562细胞中表达p53mRNA和P53蛋白.Ad5wtp53感染K562细胞48,72h后分别有(74.45±12.09)%和(69.80±11.70)%的细胞周期出现G0/G1期阻滞,DNA含量分别下降了32.25%和38.13%;同时P21蛋白的表达升高,核磷蛋白的表达无改变,磷酸化核磷蛋白(Thr199)表达下降.而Ad5mtp53感染组和Ad5GFP感染组未见相应改变.结论:野生型P53蛋白可能通过上调P21的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制S期DNA的合成,降低核磷蛋白第199位苏氨酸残基的磷酸化来抑制K562细胞的增殖.
- 王宏斌冯文莉黄世峰田文君曹唯希黄宗干
- 关键词：慢性粒细胞白血病P53基因中心体
- 野生型p53基因对白血病K562细胞中心体的影响
- 最近大量的研究表明,实体瘤的发生和进展与中心体异常有关。中心体的异常导致异常有丝分裂、非整倍体的发生和基因组不稳定。中心体异常包括中心体数量增多和中心体结构异常。中心体数量增多与中心体过度复制、胞质分裂失败或中心体过早分...
- 王宏斌
- 关键词：P53基因中心体K562细胞腺病毒载体
- 文献传递
- 野生型p53基因对K562细胞中心体数量和蛋白的影响被引量：1
- 2009年
- 目的研究重组腺病毒介导的野生型p53基因（Ad5wtp53）对人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞系中心体数量和中心体蛋白表达的影响。探讨应用重组腺病毒p53基因对CML进行基因治疗的可行性。方法分别将含有野生型p53基因、突变型p53基因和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体（Ad5wtp53、Ad5mtp53和AdSGFP）反复扩增，联合多聚季胺共同感染K562细胞，观察感染效率。MTT法确定最适重组腺病毒感染滴度和感染时间。然后用RT-PCR和Western blot检测p53 mRNA和蛋白的表达。最后应用间接免疫荧光染色法对中心体γ-微管蛋白和纺锤体α-微管蛋白同时进行标记，在激光共聚焦显微镜下观察中心体γ-微管蛋白的表达和有丝分裂，并对中心体进行计数。结果多聚季胺可显著提高腺病毒载体对K562细胞的感染效率。多聚季胺的剂量选择为4μg／ml；感染K562细胞的最适腺病毒滴度为20 000 MOI，感染时间为72h；Ad5wtp53和AdSmtp53转染的K562细胞均可表达p53 mRNA和蛋白。Ad5wtp53感染K562细胞后，中心体数量减少，γ-微管蛋白的表达降低。结论重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达；野生型P53蛋白能够降低K562细胞中心体数量及中心体γ-微管蛋白的表达。
- 王宏斌冯文莉黄世峰田文君曹唯希黄宗干
- 关键词：基因P53中心体K562细胞腺病毒载体
