王立人
- 作品数：8 被引量：27H指数：3
- 供职机构：华东师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市“科技创新行动计划”更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 保存液中Ca^(2+)、Mg^(2+)、K^+对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子体外保存存活率的影响被引量：4
- 2007年
- 提要以伊红染色法检测样品精子存活率为依据,研究了4℃下5种保存液及Ca2+、Mg2+离子对中华绒螯蟹精子体外保存效果的影响。5种保存液分别为人工海水(ASW)、2倍钙离子人工海水(2×Ca2+-ASW)、无镁离子人工海水(Mg2+-FASW)、无钾离子人工海水(K+-FASW)、无钙离子人工海水(Ca2+-FASW),经4天保存后,各保存液中精子样品的存活率和精子密度均出现明显差异,K+-FASW、ASW及2×Ca2+-ASW三种保存液中的精子因发生顶体反应而大量死亡,而Mg2+-FASW、Ca2+-FASW的保存效果较好。在此基础上,进一步探讨了不同Mg2+和Ca2+浓度对精子存活率的影响,结果发现,经24h保存后各实验组精子存活率均随着两种离子浓度的增加而明显下降。上述结果表明:K+-FASW、ASW及2×Ca2+-ASW不适合精子保存,而Mg2+-FASW和Ca2+-FASW均可作为该蟹精子的保存液;Ca2+因可引起精子顶体反应而造成保存液中精子的大量死亡,其浓度与存活率呈明显的负相关;无K+的保存液中,Ca2+、Mg2+的存在与否对精子的保存效果起关键作用;无Mg2+人工海水之所以具有较好的保存效果,可能与Mg2+的缺乏而导致Ca2+逆浓度差转运受阻,避免了因Ca2+进入而诱发顶体反应有关。
- 陈东华李艳东贾林芝厉小波王立人孙菊香王群
- 关键词：中华绒螯蟹精子保存液MG^2+K^+
- 利用CRISPR/Cas9技术构建基因编辑大鼠模型
- 2023年
- RNA介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统由单链引导RNA(sgRNA)与核酸酶Cas9构成。在细胞内,sgRNA能够按照碱基互补配对的原则引导Cas9与靶点结合,由Cas9切割目标DNA,造成双链DNA断裂(double stranded break,DSB)。在随后的DNA修复过程中,细胞主要进行非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)或在有修复模板存在的情况下进行重组修复(homology directed repair,HDR)。如果将CRISPR/Cas9系统以及修复模板通过显微注射的方式导入大鼠的胚胎内,就能借助细胞的修复机制实现大鼠胚胎的基因编辑,由此构建各种基因修饰大鼠模型。本文详细介绍了利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建大鼠模型的具体操作步骤,以期为相关领域的科研人员提供一种大鼠基因修饰模型的构建方法。
- 刘梅珍王立人李咏梅马雪云韩红辉李大力
- 关键词：基因敲除
- CRISPR/Cas9系统:一种强大的在体基因治疗工具被引量：3
- 2017年
- CRISPR/Cas9作为一个通用的基因编辑工具,已被广泛应用于原核和真核基因组的精确改造,极大地推动了基础和应用研究的发展,如何利用该技术进行疾病的治疗更是倍受关注.最近,大量研究表明,CRISPR/Cas9介导的基因编辑在基因治疗方面展现了极大的潜力.本文综述了CRISPR/Cas9在动物模型中通过不同策略开展基因治疗研究的现状,在此基础上讨论了未来发展前景及临床应用中面临的挑战.
- 张晓辉王立人刘明耀李大力
- 关键词：CRISPR基因治疗体外
- CRISPR/CAS系统介导的基因组大片段DNA编辑
- 随着测序技术以及大数据信息科学的发展,越来越多导致疾病的基因突变已经被发现。不仅如此,如今的技术已经可以预测一些疾病的发生可能与基因组上哪些DNA突变相关。然而,需要验证预测的结果,或是对已经发生的基因突变进行治疗,就必...
- 王立人
- 关键词：同源重组
- 冷冻保护剂及预冷时间对河蟹精子体外冷冻保存的影响被引量：17
- 2008年
- 本文以甘油、二甲亚砜(DMSO)为冷冻保护剂,采用两步降温法,以精子存活率和DNA损伤程度为检验其冷冻效果的评价指标,研究了冷冻保护剂和预冷时间对河蟹Eriocheir sinensis精子冷冻保存效果的影响。胰蛋白酶消化法获得河蟹游离精子,液氮冷冻保存8h以上,精子保存密度为107个/mL,伊红染色法检测精子存活率,单细胞凝胶电泳(SCGE)检测精子DNA损伤。实验共设置10个组,分别为不同浓度的单一冷冻保护剂(每种保护剂的体积百分比分别为5%、10%、12.5%、15%)和两种保护剂组合(两种保护剂在同一实验组中的体积百分比含量均为5%、10%)。结果显示,12.5%甘油的保存效果最佳,精子存活率达到62.60%。在此基础上,以10%甘油作为冷冻保护剂,设置5、10、20、30、40min 5个时间梯度,研究了预冷时间对精子冷冻保存效果的影响。结果显示预冷时间的长短对精子冷冻保存效果的影响显著,当预冷时间低于20min时,精子大量死亡,且精子DNA严重损伤;当预冷时间超过30min时,精子存活率明显提高,精子DNA损伤明显减弱。
- 陈东华李艳东贾林芝厉小波王立人曲迪王群
- 关键词：河蟹精子冷冻保存冷冻保护剂二甲亚砜单细胞凝胶电泳
- CRISPR基因编辑技术在治疗地中海贫血中的应用
- 本发明提供了一种CRISPR基因编辑技术在治疗地中海贫血中的应用，该应用中的CRISPR系统包括至少一种核酸酶和至少一种sgRNA，所述sgRNA能够靶向HBG(γ珠蛋白基因)启动子的抑制元件，所述核酸酶能够切割HBG启...
- 王立人李大力吴宇轩刘明耀席在喜
- 文献传递
- 一种凝血因子基因突变的定点修复载体系统及方法
- 本发明公开一种对凝血因子F8/F9进行原位修复的方法，包括：在目标基因组序列中，选定凝血因子基因的突变位点为原位修复的基因位点；设计CRISPR/Cas系统的sgRNA序列的核酸酶的结合位点；设计用于原位修复的同源重组修...
- 李大力关玉婷王立人刘明耀
- 文献传递
