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基因治疗中目的基因靶向表达的研究被引量：5: 1994年; 基因治疗中目的基因靶向表达的研究王立群，陈诗书（上海第二医科大学，上海２０００２５）郑仲承（中国科学院上海生化研究所，上海２０００３１）关键词基因治疗，靶向表达基因治疗在近几年取得了许多进展。基因治疗并不单是治疗措施问题，其中有许多基础研究工作还有待...; 王立群陈诗书郑仲承; 关键词：基因治疗靶向表达

hGM-CSF基因克隆、病毒包转及转染人胃癌、肝癌细胞的研究: 1995年; hGM-CSF是一种细胞因子．具有对单核巨噬细胞趋化作用及提高它们对肿瘤的吞噬功能，并且能增加粒细胞粘附分子的表达，ADCC杀瘤作用。为了研究hGM-CSF修饰的肝癌细胞，胃癌细胞的方法．我们从人外周血淋巴细胞通过RT-PCR克隆了hGM-CSF基因．鉴定大小后，克隆人pBIuscript和LXSN中，; 王立群钱关祥陈诗书戈凯郑仲承刘新垣; 关键词：肝癌细胞人胃癌转染 HGM-CSF 人外周血淋巴细胞趋化作用

人原发性肝癌基因的实验研究───肿瘤坏死因子基因的初步应用被引量：12: 1995年; 将含人肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）ｃＤＮＡ的不同逆转录病毒载体（ＬＮＳ－ｔｎｆα、Ｌ－ｔｎｆαＳＮ及ＬＮＣ－ｔｎｆα）和质粒型真核细胞载体（ｐＳＶＫ３－ｔｎｆα），分别用磷酸钙法导入肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１中，观察ＴＮＦ的表达水平。结果：重组质粒型表达载体ｐＳＶＫ３－ｔｎｆα表达好，２４小时开始分泌ＴＮＦα（５０Ｕ／ｍｌ），４８～７２小时达最高值（９０Ｕ／ｍｌ），９６小时后下降（４０Ｕ／ｍｌ）。将ｐＳＶＫ３－ｔｎｆα重组ＤＮＡ用磷酸钙包裹后直接进行瘤内注射，发现裸鼠外周血ＴＮＦα水平有一过性增高，３周后测量瘤体大小，发现实验组的肿瘤体积明显小于对照组（２．５±１．６ｃｍ比３．２±１．８ｃｍ，ｎ＝６，Ｐ＜０．０５），实验组荷瘤裸鼠的生存时间亦明显延长（４４．０±３．３ｄ比２８．２±２．０ｄ，ｎ＝６，Ｐ＜０．０１）。结果表明，应用ＴＮＦα基因转移进行肝癌的基因治疗是一条值得探索的途径。; 冯学胜汤钊猷郑仲承王立群戈凯薛琼刘康达叶胜龙孙瑞霞刘新垣; 关键词：肝肿瘤肿瘤坏死因子基因治疗

α肿瘤坏死因子（TNFα）基因的分离鉴定及在人肝癌细胞中的表达: 1996年; 应用不连续密度梯度法分离获得人肝癌浸润性单个核细胞（ＴＩＭ），ＲＮＡ斑点杂交提示ＴＩＭ中有明显的ＴＮＦαｍＲＮＡ转录。经ＲＴ－ＰＣＲ扩增反应分离得到一特异的７００ｂｐ左右的ＤＮＡ片段，ＤＮＡ序列分析证实这一ＤＮＡ片段中包含编码人ＴＮＦα成熟肽所需的的全部ｃＤＮＡ序列。将这一人ＴＮＦαｃＤＮＡ克隆到真核细胞表达质粒ｐＳＶＫ３，获得真核细胞表达重组ｐＳＶＫ３－ｔｎｆ，用磷酸钙沉淀法将ｐＳＶＫ３－ｔｎｆ导入人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１中的细胞培养上清中可检测到ＴＮＦα的一过性表达。结果提示ＴＩＭ可成为获取ＴＮＦα基因的来源，获得的ｐＳＶＫ３－ｔｎｆ重组质粒为肝癌的基因治疗奠定了基础。; 冯学胜郑仲承戈凯王立群汤钊猷刘新垣; 关键词：肿瘤坏死因子肝肿瘤基因治疗

hGM-CSF 基因转导的人胃癌、肝癌细胞研究被引量：1: 1997年; ｈＧＭ－ＣＳＦ是一种细胞因子，能通过多种机制激活机体免疫功能。为了研究ｈＧＭ－ＣＳＦ修饰的人肝癌、胃癌细胞的免疫功能的变化，将含该基因的逆转录病毒载体ＬＸＳＮ转染ＰＡ３１７包装细胞，经Ｇ４１８筛选较高滴度病毒分泌株（滴度为１．５×１０４ＣＦＵ／ｍｌ），用病毒上清感染肝癌（ＨＨＣＬ）和胃癌（ＭＫＮ４５），筛选后测ｈＧＭ－ＣＳＦ活性，最高分别为２７１Ｕ／１０６细胞·２４小时和２４３．８０Ｕ／１０６细胞·２４小时。ｈＧＭ－ＣＳＦ基因在肝、胃癌细胞中整合，未发生重排。ＭＨＣ分子测定结果显示经修饰的肝癌ＨＨＣＬ细胞ＭＨＣ分子的表达无改变，而修饰后胃癌细胞ＭＫＮ４５的ＭＨＣⅠ类分子表达明显增加。本实验为今后瘤苗研制提供了资料。; 王立群戈凯郑仲承郑仲承钱关祥陈诗书; 关键词：基因治疗肝肿瘤 HGM-CSF

含人TNF-α基因的重组逆转录病毒载体的构建、包装及对人肝癌细胞的感染: 1995年; 利用逆转录病毒载体LN系列的三种载体LXSN，LNCX和LNSX构建了插入TNFα基因的重组逆转录病毒载体L-tnfSN，LNC-tnf和LNS-tnf．重组载体用磷酸钙沉淀法引入病毒包装细胞PA317，经G418筛选后，用NIH3T3细胞测定病毒滴度，结果表明L-tnfSN产生的病毒滴度最高(1×10^5CFU／ml)，; 冯学胜汤钊猷叶胜龙戈凯郑仲承王立群刘新垣; 关键词：TNF-Α基因重组逆转录病毒载体 TNFΑ基因包装细胞

逆转录病毒介导的人TNF在人肝癌细胞系(SMMC)中的表达被引量：5: 1996年; 利用逆转录病毒载体ＬＸＳＮ构建了含人ＴＮＦａ基因的重组逆转录病毒载体Ｌ－ｔｎｆＳＮ。磷酸钙沉淀法将重组载体引入病毒包装细胞ＰＡ３１７，挑选Ｇ４１８抗性克隆，用ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒滴度，获得滴度为１×１０５ＣＦＵ／ｍｌ的细胞克隆。应用这一重组病毒感染人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１，经Ｇ４１８筛选获得抗性克隆。ＰＣＲ可从转导的细胞ＤＮＡ中扩增出ＴＮＦａ基因片段，提示目的基因完整地整合在细胞基因组中。测定转导细胞培养上清中ＴＮＦａ活性，结果显示ＴＮＦａ有相对稳定的表达（１５０～３７０Ｕ／１０６ｃｅｌｌｓ／２４小时）。实验还表明转导细胞的体外生长能力无明显变化，但是其在裸鼠中的致瘤性却明显降低，提示逆转录病毒介导ＴＮＦａ基因对人原发性肝场可能有一定的治疗作用。; 冯学胜郑仲承汤钊猷戈凯王立群薛琼孙兰英刘新垣; 关键词：逆转录病毒肿瘤坏死因子肝癌

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王立群