王绘砖
- 作品数：11 被引量：19H指数：2
- 供职机构：南开大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家自然科学基金海洋公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学环境科学与工程化学工程更多>>
- 甘蓝型油菜γ-生育酚甲基转移酶基因的克隆和功能验证被引量：2
- 2007年
- 采用RACE技术,从甘蓝型油菜中克隆出一含1044个碱基的开放阅读框架的γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT)基因全长cDNA。将其成熟蛋白编码区克隆进pET21b(+)多克隆位点,在大肠杆菌BL21(DE3)CodonPlus中表达出一个分子量为36kDa的融合蛋白。酶学分析显示,重组酶具有γ-TMT活性。
- 钱文成陈德富王绘砖王永芹陈喜文
- 关键词：生育酚甘蓝型油菜
- 几种高通量定向筛选技术及其比较
- 2006年
- 在定向进化过程中,多样性的突变文库一旦构建好后,实验成败与否的关键就在于建立针对目的改造特征的高通量筛选方案。从突变文库中筛选需要的、功能进化的目的基因,关键在于是否有一种或几种高通量筛选技术。介绍了几种目前常用高通量定向筛选技术的基本原理,并对其特性进行了比较。
- 王绘砖陈喜文陈德富
- 关键词：定向进化高通量
- 工业生产β-胡萝卜素杜氏藻的分离及种属鉴定被引量：2
- 2009年
- 杜氏藻(Dunaliella)是生产天然β-胡萝卜素的良好资源,受到世界各国的广泛关注。为了研究和改造其类胡萝卜素代谢途径,利用离心和抗生素筛选相结合的方法对7株生产β-胡萝卜素用的工业藻种进行了分离和纯化。rDNA凝胶电泳图显示,分离的7株藻种中,6株能扩增出0.9 kb^1.7 kb不等的单一条带,表明已分离到单一藻种。在此基础上测定了各藻种转录间隔区1(ITS1)序列,并建立了系统进化树。结果显示,其中3株属于D.viridis类,另3株为D.salina。同时对杜氏藻的生长、工业藻种的分离、D.viridis对生产β-胡萝卜素工业藻的污染及D.salina与D.bardawil分类等问题进行了讨论。
- 牟春琳陈喜文侯召丽王绘砖陈德富辛乃宏郭连城张俊杰
- 关键词：杜氏藻系统进化树种属鉴定Β-胡萝卜素
- 大豆球蛋白G1启动子的克隆及植物表达载体构建被引量：1
- 2009年
- 从大豆冀nf37和冀豆15中克隆了大豆球蛋白G1基因的启动子片段。序列分析表明,两种启动子片段均为688bp,与GenBank现有的3种启动子序列(四川大豆(DQ250808)、南农87-c38(AY649096)和Dare(X15121))间的同源性在96.4%～99.6%之间。其中来自冀nf37的启动子片段除Legumin盒上有一个碱基差异外,其它元件与DQ250808完全相同,据此推测该启动子片段具有种子特异性启动子活性。将其与已有γ-生育酚甲基转移酶基因连接,构建了种子特异性表达载体pBG1TMT,为通过代谢工程手段调控油料作物种子维生素E组成、提高其营养品质奠定了基础。
- 王永芹陈德富王绘砖陈喜文
- 关键词：大豆启动子
- 针对结构未知酶的高效定向进化策略研究
- 陈德富陈喜文王绘砖陶苏丹杨鹏刘健
- 项目来源：国家自然科学基金。论据：定向进化是改造酶、获取进化子的重要方法。对于结构未知酶，通常的定向进化策略是：先构建随机突变文库，然后用高通量筛选方法获取进化子。由于随机突变文库中的突变大多为中性或有害突变，仅少量为有...
- 关键词：
- 关键词：生物技术
- 阿特拉津氯水解酶基因的遗传转化与定向改造研究
- 阿特拉津(atrazine)，化学名2-氯-4-乙胺基-6-异丙胺基-1,3,5三嗪，商品名莠去津，是一种世界范围内广泛使用的三嗪类除草剂，主要用于玉米、高粱、甘蔗、柑橘等抗阿特拉津作物田间阔叶杂草和禾草的防除。由于阿特...
- 王绘砖
- 关键词：阿特拉津转基因烟草植物修复雨生红球藻
- 文献传递
- 转阿特拉津氯水解酶基因烟草的获得及其生物降解能力分析被引量：3
- 2008年
- 阿特拉津氯水解酶(AtzA)能有效催化有毒的阿特拉津脱氯生成无毒的羟基阿特拉津。本文将来自假单胞菌ADP的atzA-ADP和来自节杆菌AD1的atzA-NK分别插入Ti载体pBin438,构建了atzA植物表达载体pBin438-atzA-ADP和pBin438-atzA-NK。并通过农杆菌介导法将其转入烟草,经基因组PCR筛选及RT-PCR分析,获得16株转atzA-ADP烟草株系和11株转atzA-NK烟草株系。在含150mgL-1阿特拉津的1/2MS培养基上生长50d时,株系401的降解能力最高,达79.26%,远高于野生型烟草的0.47%,说明转基因烟草可用于建立阿特拉津残留环境的植物修复系统。
- 王绘砖陈喜文王永芹蔡宝立陈德富
- 关键词：转基因农杆菌介导法烟草
- 利用雨生红球藻表达系统高通量筛选活力提高的阿特拉津氯水解酶突变子被引量：1
- 2011年
- 阿特拉津氯水解酶定向改造的关键是开发一种廉价的、表型改变明显的高通量筛选方法。利用高错误倾向PCR和DNA洗牌相结合的突变方法,对来源于假单胞菌ADP和节杆菌AD1的阿特拉津氯水解酶基因进行随机突变,以雨生红球藻为受体、以阿特拉津为选择压力对突变文库进行高通量筛选。筛选到的12个突变子序列分析显示,突变均为点替换,位点分散在全基因上,是在高错误倾向PCR及DNA洗牌过程中逐渐累积形成的。酶活力分析显示,突变子的酶活力均高于野生株,在添加1.0 mg/L阿特拉津培养液中的活力是野生株的1.9~3.6倍,在添加2.0 mg/L阿特拉津培养液中的活力是野生株的1.7~2.6倍,粗酶提取物的活力是野生株的1.7~2.7倍。上述结果表明,雨生红球藻表达系统是定向改造阿特拉津氯水解酶的高通量筛选平台。
- 王绘砖陈喜文郝晓华陈德富
- 关键词：定向进化雨生红球藻高通量筛选酶活性
- FAE1启动子的克隆和转γ-TMT基因大豆的获得被引量：2
- 2010年
- 脂肪酸链延长酶组分1(FAE1)是广泛存在于植物中催化脂肪酸碳链延长的酮脂酰CoA合成酶,该反应是脂肪酸碳链延长的限速步骤,在油料种子胚中特异性表达.以拟南芥基因组DNA为模板,设计引物,扩增到该基因的启动子片段.序列分析表明,该片段长度为943 bp,与GenBank注册序列AF355982达99.5%同源,并含有与之完全相同的种子特异性表达元件,据此认定它具有种子特异性启动活性.将其与甘蓝型油菜γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT)基因连接,构建成表达载体pFAE1-TMT,通过农杆菌介导的方法转化大豆胚尖,获得28株卡那霉素抗性筛选植株,进一步PCR检测获得2株转γ-TMT基因植株.
- 张明陈德富王永芹王绘砖陈喜文
- 关键词：启动子转基因大豆
- 曲霉属糖化酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：8
- 2007年
- 从黑曲霉、无花果曲霉、米曲霉中提取总 RNA,RT-PCR 分别获得其糖化酶基因,所得序列在 Gen-Bank 数据库中注册,注册号分别为 AY652617、AY642120和 DQ211971.BLAST 分析显示,克隆的曲霉属糖化酶基因与 GenBank 数据库相应序列同源性很高.将这些糖化酶基因与表达载体 pPIC9重组后,电转化进毕赤酵母株 GS115,均获得了分泌表达糖化酶的酵母工程菌株.甲醇诱导72 h 后,糖化酶的分泌量达到最高,分别为(11.6±0.2)、(12.4±0.2)和(10.0±0.2)U/mL.SDS-PAGE 显示,分泌表达的糖化酶分子量均约为80 kDa.
- 马丽娜陈喜文陈德富王绘砖宋嵘
- 关键词：糖化酶分泌表达曲霉属毕赤酵母
