肖东
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中山大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省重点攻关基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 基于四环素调控系统的ApoE-rtTA/TRE-HCV-C双转基因小鼠的制备被引量：1
- 2007年
- 目的为了丰富现有的四环素调控系统的小鼠资源库,同时也为更好地研究目的基因HCV-C的作用机制提供一个活体的动物模型,制备基于四环素调控系统原理的调控部分ApoE-rtTA的转基因小鼠,与反应部分TRE-HCV-C转基因小鼠,相互交配制作出双转基因小鼠。方法应用显微注射法将构建好的两种基因片段ApoE-rtTA及TRE-HCV-C分别注入超排的昆明母鼠的受精卵,再植入假母输卵管,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,将两者及阳性后代交配产生携带5只转基因鼠再经Western blot和RT-PCR在RNA和蛋白水平上进一步鉴定。结果产生了3只整合有ApoE-rtTA基因的首见鼠和125只阳性子代,以及产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首见鼠和16只阳性子代。PCR及Southern Blot证实上述阳性鼠确有转基因整合。将两者交配产生携带5只双转基因鼠。结论成功制备了携带有ApoE-rtTA及TRE-HCV-C转基因小鼠,建立了分别携带有这两种基因的鼠群,以及同时携带有两种基因的双转基因小鼠,为四环素调控系统提供了一个良好的通用型的调控动物模型,同时也可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。
- 杨国柱陈系古黄冰单于肖东马芸邓新燕
- 关键词：载脂蛋白转基因鼠
- 肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立被引量：2
- 2007年
- 【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40 polyA的转基因载体pTRE-HCV-C,以显微注射的方法将1.153kb的转基因片段注入BALB/C母鼠的受精卵,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的另一品系转基因小鼠杂交,得到子代F1小鼠,通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠,以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后,得到子代F1小鼠,特定时间与DOX作用后,小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明,TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠,可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。
- 杨国柱傅思莹黄冰单于肖东马芸邓新燕陈系古
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白转基因小鼠模型组织特异性表达
- 细胞可透过性Cre重组酶表达、纯化及生物活性检测(英文)被引量：1
- 2004年
- Cre/loxP系统由Cre位点特异重组酶和可被Cre特异性识别的loxP位点构成,该系统广泛用于条件性基因敲除和表达,以研究基因功能.为了表达和纯化一种细胞可透过性Cre重组酶(即His6 NLS Cre MTS);经IPTG诱导,在BL2 1(DE3)宿主菌成功表达His6 NLS Cre MTS融合蛋白,通过His BondNi NTA树脂分离并纯化了该蛋白质,随后借助细胞和非细胞的重组系统成功检测了His6 NLS Cre MTS的生物活性.
- 郭中敏徐康岳颖黄冰唐欢马芸洪迅陈系古肖东
- 关键词：CRE/LOXP系统纯化生物活性检测
