孙琦
- 作品数：22 被引量：75H指数：5
- 供职机构：杭州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划浙江省自然科学基金浙江省科技厅科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 静脉导管细菌感染及相关因素的分析被引量：1
- 2007年
- 目的:静脉导管引起细菌感染及相关因素的分析。方法:对本院2002年8月到2005年12月所有送检静脉导管培养的患者进行回顾性分析。结果:1.所有送检的605例样本中,静脉导管培养阳性有149例,阳性率为24.6%。2.静脉导管培养阳性患者病区分布情况没有显著差异(P>0.05)。3.对静脉导管培养阳性患者的年龄进行分段统计,老年组与非老年组比较有显著差异(P<0.05)。4.静脉导管培养阳性的病原菌中阳性球菌62株,占41.6%;阴性杆菌52株,占34.9%;真菌30株,占20.1%;阳性杆菌5株,占3.4%。在阳性球菌中葡萄球菌为51株,肠球菌11株,在阴性杆菌中非发酵菌为35株,肠杆菌科细菌为17株。结论:静脉导管感染是引起医源性感染的重要因素之一,临床应规范操作以减低感染率。
- 孙琦贾小渊陈国强
- 关键词：静脉导管细菌
- 不同Alloferon-1体外抗病毒效果
- 2009年
- Alloferon-1是Chernysh等于2002报道的一种由13个氨基酸组成、相对分子质量为1481．53的新型抗菌肽，动物实验证实该抗菌肽有较强的抗流感病毒和抗白血病细胞的活性。人工合成或重组表达的抗菌肽Magainin—Ⅱ的生物学活性与天然产物相同。本研究中构建了串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统得到rAlloferon-1-EK，同时人工合成了sAlloferon-1和sAlloferon-1-EK，比较重组及人工合成的3种Alloferon-1体外抗病毒活性，以期为抗病毒新药研发提供实验依据。
- 孙琦孙爱华严杰
- 关键词：MAGAININ生物学活性相对分子质量
- 肺炎链球菌comD/E/C基因重组表达及ComD/C与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性被引量：4
- 2009年
- 目的：构建肺炎链球菌调控感受态形成的二元信号传导系统（TCS）基因comD/comE/comC的原核表达系统,探讨ComD和ComC封闭后细菌耐药性变化。方法：采用PCR扩增全长comD、comE和comC基因,并用常规基因工程技术建立其原核表达系统。采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组蛋白rComD、rComE和rComC表达量。免疫家兔制备rComD、rComE和rComC抗血清。检测肺炎链球菌菌株ComD和ComC被抗血清封闭后对青霉素和头孢胺噻耐药性的变化。结果：与报道序列比较,所克隆的comD、comE和comC基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.4%-99.3%和99.1%-100%。所构建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-comD、E.coliBL21DE3pET42a-comE和E.coli BL21DE3pET32a-comC能有效表达目的重组蛋白rComD、rComE和rComC,其产量分别为细菌总蛋白的28%、25%和35%。rComD、rComE和rComC抗血清免疫双扩散效价分别为1∶4、1∶4和1∶8。ComD和/或ComC被抗血清封闭后,头孢胺噻敏感菌株可出现耐药性,但耐药菌株耐药性无明显改变,也不影响各菌株对青霉素的耐药性。结论：本研究成功地构建了肺炎链球菌comD/come/comC基因原核表达系统,为深入研究感受态形成相关TCS与耐药性关系奠定了基础。ComD和ComC与肺炎链球菌对头孢胺噻耐药性有关。
- 樊欢孙爱华夏肖萍孙琦严杰
- 关键词：Β内酰胺酶类基因表达重组蛋白质类
- 急性有机磷农药中毒时血清胆碱酯酶活性动态监测的临床意义被引量：9
- 2007年
- 目的:探讨急性有机磷农药中毒(AOPP)患者血清胆碱酯酶(ChE)变化特点及其临床意义。方法:将88例AOPP患者根据中毒的程度分为轻度中毒、中度中毒和重度中毒组,采用硫代丁酰胆碱法检测患者血清ChE活性的动态变化,并结合患者临床症状改变进行分析和比较。实验中以31例健康体检者作为正常对照。结果:与正常对照组比较,AOPP患者血清ChE活性均明显降低(P<0.01),其下降幅度与临床中毒程度呈平行关系。结论:检测AOPP患者血清ChE活性对明确诊断、判断中毒程度及用药剂量等均有重要参考价值。
- 孙琦李伟中孙爱华
- 关键词：急性有机磷农药中毒血清胆碱酯酶
- 胸腹水中癌胚抗原和LDH及Glu水平的临床鉴别诊断价值被引量：2
- 2005年
- 目的探讨癌胚抗原(CEA)和乳酸脱氢酶(LDH)及葡萄糖(Glu)水平在良恶性胸腹水中的临床鉴别诊断意义。方法分别采用化学发光标记免疫法、速率法和葡萄糖氧化酶法检测105例患者不同性质胸腹水中CEA和LDH及Glu的浓度,检测结果采用方差分析和Dunett’C法进行统计分析。结果恶性肿瘤组患者胸腹水标本中CEA值较结核性胸膜炎组和慢性非特异性炎症组明显升高(P<0.05);恶性肿瘤组和结核性胸膜炎组标本LDH值之间差异无显著性(P>0.05),但均高于慢性非特异性炎症组(P<0.05);恶性肿瘤组和慢性非特异性炎症组标本Glu值差异无显著性(P>0.05),但均高于结核性胸膜炎组(P<0.05)。结论联合定量检测CEA和LDH及Glu对胸腹水性质的鉴别诊断有重要临床参考价值。
- 褚美芬吴茅孙琦孙爱华
- 关键词：GLULDH慢性非特异性炎症良恶性胸腹水腹水性质
- 问号钩端螺旋体fliN基因原核表达及其产物的鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的克隆问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株鞭毛相关基因fliN并构建其原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性。方法提取钩体株基因组DNA,高保真PCR扩增全长fliN基因片断,T-A克隆后测序。按常规方法构建fliN基因原核表达系统,并用IPTG诱导目的重组蛋白rFliN表达。采用SDS-PAGE结合Bio-Rad凝胶图象分析系统检测rFliN表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rFliN。采用兔抗问号钩体黄疸出血群赖株全菌抗血清的Western blot鉴定rFliN及其免疫反应性。结果与报道的相应序列比较,所克隆的fliN基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%。IPTG诱导原核表达系统pET32a-fliN-E.coliBL21DE3的rFliN表达量约占细菌总蛋白的30%,rFliN提纯后仅见单一的蛋白条带。rF-liN能与抗血清发生免疫结合反应。结论本研究成功地构建了高效表达目的重组蛋白的问号钩体fliN基因原核表达系统,RFliN有良好的免疫反应性,为深入研究FliN致病及免疫保护作用奠定了基础。
- 孙琦陈蔚青孙爱华严杰
- 关键词：问号钩端螺旋体克隆原核表达
- 二重PCR检测龈下菌斑中齿垢密螺旋体感染及其与牙周炎病变程度的关系
- 2004年
- 目的 建立龈下菌斑标本中齿垢密螺旋体二重PCR临床快速检测方法,了解齿垢密螺旋体感染与慢性牙周炎病变程度之间的关系。方法 采取158例不同病变程度的慢性牙周炎龈下菌斑标本,用终浓度为1％的Triton X-100 100℃水浴10 min处理标本以制备DNA模板。采用PCR检测标本中齿垢密螺旋体16S rDNA和特征性外膜蛋白基因tdpA。采用卡方检验分析齿垢密螺旋体感染与慢性牙周炎(CP)不同病变程度的关系。结果 85.4％(135/158)标本16S rDNA阳性,77.2％(122/158)tdpA阳性,14.6％(23/158)两者均阴性,未发现tdpA阳性而16S rDNA阴性的标本。重度CP龈下菌斑标本16S rDNA和tdpA检出率均高于中度cP(r2=4.03,5.71;P<0.05),中度CP龈下菌斑标本16S rDNA和tdpA检出率均明显高于轻度(X2=9.32,16.06,P<0.01)。结论 所建立的二重PCR可用于牙周炎龈下标本中齿垢密螺旋体的临床快速诊断,齿垢密螺旋体感染与牙周病变程度密切相关。
- 孙爱华翁惠华孙琦严杰
- 关键词：慢性牙周炎齿垢密螺旋体聚合酶链反应
- Alloferon-1抗生肽串联重组表达及重组Alloferon-1体外抗肿瘤活性
- 2011年
- 目的:构建含胰蛋白酶酶切位点的Alloferon-1抗生肽重复串联DNA片段及其原核表达系统,了解有赖氨酸尾重组Alloferon-1(rAlloferon-1)体外抗肿瘤活性。方法:根据Alloferon-1序列不含精氨酸和赖氨酸的特点,构建C端加有含胰蛋白酶酶切位点赖氨酸的14×Alloferon-1抗生肽重复串联DNA片段。采用pET42a表达载体和E.coli BL21DE3表达宿主菌,构建Alloferon-1重复串联DNA片段原核表达系统。SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组产物表达量,Ni-NTA亲和层析、胰蛋白酶酶切和Sephadex G-50层析法提纯14×rAlloferon-1-K及其rAlloferon-1-K单体。BALB/c小鼠脾细胞分别与K562、KB和SGC肿瘤细胞共培养模,采用CCK-8法检测rAlloferon-1-K、化学合成Alloferon-1(cAlloferon-1)及Alloferon-1-K(cAlloferon-1-K)体外抑制肿瘤细胞生长及增殖的活性并进行比较。结果:原核表达系统E.coli BL21DE3pET42a-14×Alloferon-1-K在IPTG诱导下能有效表达14×rAlloferon-1-K蛋白,其产量约为细菌总蛋白的30%。0.1～10 ng/ml的rAlloferon-1-K具有明显提高小鼠脾细胞抑制K562、KB和SGC肿瘤细胞的生长及增殖(P<0.01),rAlloferon-1-K的抗肿瘤活性与cAlloferon-1及cAlloferon-1-K比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究成功构建了Alloferon-1抗生肽重复串联原核表达系统,有效地提高了Alloferon-1产量;而且rAlloferon-1-K仍保持原有的体外抗肿瘤活性。
- 徐小寅严杰孙琦
- 关键词：重组融合蛋白质类
- 抗菌肽Alloferon-1串联式重组表达及其表达产物体外抗肿瘤活性的研究被引量：6
- 2008年
- 目的:构建串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统,检测合成及重组表达的Alloferon-1体外抗肿瘤细胞活性。方法:采用连接引物PCR法,构建含6×His-EK-8×Alloferon-1-EK-6×His序列的人工融合基因;采用常规分子生物学方法克隆并构建该人工融合基因及其原核表达系统;采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统了解目的重组产物8×rAlloferon-1-EK表达情况和产量;采用Ni-NTA亲和层析及EK酶切和Sephadex G-50层析法提纯8×rAlloferon-1-EK及rAlloferon-1-EK;采用MTT法检测rAlloferon-1-EK体外抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞增殖的作用,并与直接合成的Alloferon-1(sAlloferon-1)和Alloferon-1-EK(sAlloferon-1-EK)的抗肿瘤作用比较。结果:获得了序列正确的目的人工融合基因克隆及其原核表达系统pET42a-8×rAlloferon-1-EK-E.coliBLDE3。在IPTG诱导下,该原核重组表达系统可表达串联式目的重组蛋白8×rAlloferon-1-EK,其产量约为细菌总蛋白的30%。Ni-NTA和Sephadex G-50层析后,可分别获得8×rAlloferon-1-EK和rAlloferon-1-EK。在25~100μg/ml剂量范围内,sAlloferon-1、sAlloferon-1-EK和rAlloferon-1、rAlloferon-1-EK均有明显抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞生长及增殖的效果(P<0.01),且四者抑制作用无明显差异(P>0.05)。结论:本研究成功构建了串联表达rAlloferon-1的原核表达系统,其表达产物具有与合成的Alloferon-1和Alloferon-1-EK相似的体外抗肿瘤细胞活性。
- 孙琦孙爱华严杰
- 关键词：抗感染药抗菌药抗肿瘤药肽类
- 环氧合酶-2与胰腺癌
- 2005年
- 褚美芬孙琦孙爱华
- 关键词：环氧合酶-2胰腺癌COX-2前列腺素多种肿瘤
