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刘大伟: 作品数：27 被引量：119H指数：5; 供职机构：中国人民解放军更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技基础条件平台建设计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>

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犬细小病毒抗原变异株的分离与鉴定被引量：1: 2006年; 目的:从犬粪便病料中分离和鉴定犬细小病毒(can ine parvovirus,CPV)抗原变异株CPV-2 a和CPV-2b。方法:将疑似犬细小病毒感染的病犬粪便接种猫肾细胞,进行病毒分离、常规病毒学鉴定和分子生物学鉴定。结果:常规病毒学鉴定和分子生物学鉴定表明,分离得到5株犬细小病毒抗原变异株,其中2株为CPV-2 a,3株为CPV-2b。结论:本研究分离的5株犬细小病毒为研究CPV变异及制备CPV特异性诊断试剂奠定基础。; 杨敬刘宏伟刘大伟战大伟范薇隋丽华孙岩松; 关键词：犬细小病毒

饲料钙磷含量和钙磷比对生长期大鼠体重增长与骨骼发育的影响被引量：7: 2007年; 目的研究饲料中不同的钙磷含量和钙磷比对生长期实验大鼠体重及骨骼发育的影响。方法采用完全随机化设计方案,取1月龄(100±10)g清洁级Wistar雄性大鼠70只,随机分成7组,每组10只,饲喂7种不同钙磷含量的饲料。自由采食,饮用去离子水,试验期42 d。各组于实验开始和结束时称重。试验结束后,处死动物并分离一侧胫骨和股骨用于实验指标的检测。结果当保持饲料中钙或者磷中的一种含量不变的情况下,调整另一种的含量即改变钙磷比例时,1.2∶1的正常钙磷比例组生长期实验大鼠增重及骨骼发育要明显好于0.4∶1的低钙磷比例组和4∶1的高钙磷比例组(P<0.05),并且当保持饲料中钙磷比例不变时,即使在低钙低磷和高钙高磷进食水平下,正常钙磷比例组大鼠增重及骨骼发育都较好,但低钙磷比例组和高钙磷比例组大鼠增重及骨骼发育则由于饲料中钙磷含量的变化波动较大(P<0.05)。结论饲料中钙和磷需按比例添加,如果两者绝对含量相差过大就会影响到动物的增重及骨骼发育,本实验证明饲料钙磷比为1.2∶1时生长期实验大鼠增重及骨骼发育较好。; 付强刘源安星兰王志红赵爽吴晓燕刘大伟; 关键词：钙磷比骨骼

犬细小病毒新抗原变异株VP2基因的克隆与序列分析被引量：4: 2008年; 目的鉴定犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)新抗原变异株的病毒型,为研究CPV变异及制备CPV特异性诊断和治疗试剂奠定基础。方法从病毒细胞培养物中提取基因组DNA,设计合成针对VP2基因的1对特异引物,PCR扩增出VP2基因片段,克隆后测序,应用DNAstar进行序列分析。结果得到CPV-VP-2基因序列15份,其中CPV-2a 10份,CPV-2b 5份;FPV-VP-2基因1份。结论各序列与已发表的标准序列比较,同源性在98%以上,未形成明显分支。; 刘大伟杨敬范薇隋丽华刘宏伟邱业峰王鹏赵爽孙岩松; 关键词：犬细小病毒 VP2基因

NOD1真核表达质粒的构建及表达被引量：1: 2010年; 目的:构建天然免疫胞内识别受体核苷酸寡聚域1(NOD1)真核表达质粒。方法:NOD1基因片段经PCR扩增获得,经酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,对挑选出的阳性克隆测序,将序列正确的重组质粒pflag-NOD1转染293T细胞,用Western印迹检测目的蛋白的表达,同时用NF-κB的萤光素酶报告基因检测NOD1蛋白的活性。结果:pflag-NOD1可以在真核细胞293T中表达,并可以增强NF-κB报告基因的转录活性。结论:构建了重组质粒pflag-NOD1,在细胞中表达NOD1后能够提高NF-κB转录的生物活性,为进一步研究NOD1的功能奠定了基础。; 陈宣男何湘姜铮王雪松刘大伟郭燕红袁静甄清; 关键词：NF-ΚB 真核表达萤光素酶报告基因

长双歧杆菌NCC2705葡萄糖与果糖代谢的比较蛋白质组学被引量：3: 2008年; 为揭示长双歧杆菌NCC2705(Bifidobacterium longum NCC2705)果糖代谢途径,建立其果糖发酵模型。以本实验室前期构建的长双歧杆菌NCC2705菌株蛋白质参考图谱为基础,进行了果糖和葡萄糖生长的菌体比较蛋白质组学研究,利用MALDI-TOF和ESI-MS/MS鉴定差异蛋白,进一步通过半定量RT-PCR验证二者显著差异表达蛋白。果糖生长的菌体蛋白中鉴定到了所有葡萄糖降解途径中的酶和蛋白质,另外鉴定到3倍以上差异蛋白点9个,其对应的5个蛋白在果糖发酵中上调。半定量RT-PCR验证显著差异蛋白,显示在果糖发酵中具有高水平表达是ABC转运系统的果糖特异性-结合蛋白BL0033和ATP结合蛋白BL0034。果糖的发酵时间和浓度梯度试验显示诱导时间越长、浓度越高,BL0033的表达量越高。第一,比较蛋白谱证明果糖和葡萄糖以相同途径降解。第二,BL0033的表达是受果糖诱导的,果糖的吸收可能是通过一个特殊的转运系统,即ABC转运系统将果糖从胞外转运到胞内,其中BL0033和BL0034共同作为系统元件扮演了重要角色。; 孙忠科卜歆何湘姜铮王芳赵红庆刘大伟袁静; 关键词：比较蛋白质组半定量RT-PCR

志贺氏菌福氏2a 301株ipaH4.5突变株的构建及生物学功能分析被引量：6: 2010年; 利用λ-Red重组系统对福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因进行缺失突变,构建了福氏2a志贺氏菌301株ipaH4.5基因缺失突变株?ipaH4.5,利用低拷贝质粒构建ipaH4.5缺失突变株的回复突变株△ipaH4.5HF。PCR方法证实了ipaH4.5基因的缺失和回复。对野生株、突变株和回复突变株的生长代谢及细胞侵袭能力进行比较;ELISA方法检测3株菌侵袭鼠J774巨噬细胞后培养上清中炎性因子的水平。生长代谢实验表明缺失和回复ipaH4.5不影响志贺氏菌的生长速度,侵袭实验表明缺失和回复ipaH4.5也不影响志贺氏菌对HeLa细胞和鼠J774巨噬细胞的侵袭能力,表明ipaH4.5基因与志贺氏菌的生长代谢和侵袭能力无关;鼠J774巨噬细胞培养上清中细胞因子水平的改变提示该基因在志贺氏菌侵入细胞后抑制宿主细胞炎症反应。; 王芳王芳赵江丽何湘姜铮刘大伟陈宣楠袁静; 关键词：福氏志贺氏菌基因缺失生物学功能

日粮钙磷含量和比例对实验大鼠成骨细胞功能的影响及机理研究: 目的研究日粮不同的钙磷含量和比例对生长期实验大鼠成骨细胞功能的影响.方法采用完全随机化设计方案,取1月龄体重相近(100±1O)g的清洁级Wistar雄性大鼠70只,随机分成7组,每组10只,饲喂7种不同...; 付强刘源赵爽张涛高青松王志红刘大伟; 关键词：钙钙磷比成骨细胞

实验动物CAR杆菌PCR监测方法的建立: CAR杆菌(cilia-associated respiratory bacillus)是目前尚未分类的、一种实验啮齿类和兔类的呼吸道感染细菌。CAR杆菌体外培养困难,因为CAR杆菌不能在无细胞培养基上生长,给CAR杆菌...; 范薇隋丽华刘大伟; 关键词：PCR; 文献传递

犬细小病毒抗原变异株的分离与鉴定: 2006年; 目的从犬粪便病料中分离和鉴定犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗原变异株CPV-2a和CPV-2b。方法将疑似犬细小病毒感染的病犬粪便接种猫肾细胞,进行病毒分离、常规病毒学鉴定和分子生物学鉴定。结果常规病毒学鉴定和分子生物学鉴定表明,分离得到5株犬细小病毒抗原变异株,其中2株为CPV-2a,3株为CPV-2b。结论本研究分离的5株犬细小病毒为研究CPV变异及制备CPV特异性诊断试剂奠定基础。; 杨敬刘宏伟刘大伟战大伟范薇隋丽华孙岩松; 关键词：犬细小病毒

长双歧杆菌NCC2705葡萄糖与乳糖代谢的比较蛋白质组学被引量：4: 2008年; 【目的】以本实验室前期构建的长双歧杆菌NCC2705菌株蛋白质参考图谱为基础,研究长双歧杆菌发酵乳糖和葡萄糖的比较蛋白质组学。【方法】采用ImageMaster 2D Elite Platnum Version5.0比较分析3倍以上蛋白差异点;利用MALDI-TOF进行差异蛋白鉴定,每个蛋白质点的肽指纹图谱在长双歧杆菌NCC2705菌株的蛋白质数据库用Mascot进行检索;采用Pro-Q磷酸化试剂进行磷酸化蛋白的染色。【结果】鉴定到31个蛋白表达发生显著变化,在乳糖发酵中14个蛋白上调17个蛋白下调。这些蛋白为亲水性酸性蛋白,它们基因的CAI值均在0.5以上,主要包括糖代谢相关蛋白、应激蛋白、转录和翻译相关蛋白,还有一些未知功能的蛋白。此外,有两个蛋白:转醛缩酶(BL0715,transaldolase,tal)L3蛋白点和丙酮酸激酶(BL0988,pyruvate kinase,pyk)G9蛋白点发生了磷酸化作用。【结论】长双歧杆菌NCC2705在乳糖中生长快于葡萄糖,它们的降解途径是相同的;转醛缩酶和丙酮酸激酶发生了翻译后修饰作用,推测转醛缩酶在43T和47S发生了磷酸化,而丙酮酸激酶在65S发生了磷酸化。; 何湘刘大伟孙忠科王芳姜铮赵红庆陈宣男黄留玉袁静; 关键词：比较蛋白质组双向电泳磷酸化蛋白

刘大伟

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