王琦
- 作品数：18 被引量：275H指数：6
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EBV-LMP2多肽激活的特异性CTL抑制同HLA-I亚型的鼻咽癌移植瘤形成被引量：6
- 2004年
- 目的:研究异体的EBV-LMP2表位多肽所激活的特异性CTL对具有相同HLA-Ⅰ类分子亚型鼻咽癌细胞(CNE2) 移植瘤的抑制作用,探讨异体间的免疫治疗。方法:先将CNE2细胞接种于Scid鼠背部皮下建立移植瘤模型;然后通过SSP- PCR确定CNE2的HLA-Ⅰ类分子亚型,并选取与CNE2有相同HLA-Ⅰ类分子亚型的外周血淋巴细胞;实验再将3组不同细 胞分别接种于Scid鼠北部皮下,(1)对照组:仅接种CNE2细胞;(2)T细胞组:接种未激活的淋巴细胞与CNE2混合细胞。 (3)CTL组接种经EBV-LNP2多肽激活的特异性CTL与CNE2混合细胞。观察EBV-LMP2多肽激活的CTL对CNE2移植瘤生 长的影响。结果:CNE2于一周左右在Scid鼠背部形成肿块,病理学鉴定为低分化上皮癌;SSP-PCR显示CNE2含有HLA-A11 基因位点;含有相同基因位点的DC负载LMP2-A11多肽所激活的CTL,明显抑制CNE2移植瘤生长。结论:EBV-LMP2多肽 所激活的特异性CTL抑制HLA亚型相同的CNE2移植瘤的形成。
- 杜海军周玲左建民付华王琦李红霞曾毅
- 关键词：CNE2移植瘤特异性CTL多肽
- 手足口病多次感染的地理流行病学研究被引量：37
- 2010年
- 目的揭示手足口病多次感染的发生率、人群及空间分布的特点,为手足口病的防控提供科学依据。方法利用疾病监测信息报告管理系统手足口病的个案数据,在数据库软件的支持下筛选多次感染的病例,计算发生率、分析人群的特点并遵照地理流行病学的原理与方法,揭示其空间分布的规律和特点。结果在全国2008年5月至2009年5月间发生的70多万个手足口病患儿中,有798名患两次及以上的感染,发生率约为千分之一。其空间分布多集中在我国南方(广东、广西)及手足口病病原复杂地区,全国除西藏、黑龙江等少数几个省外普遍存在。多次感染的患者中,男性多于女性,年龄多小于5岁,3岁以下儿童多为散居儿童,3岁以上儿童多为托幼机构抚育。结论手足口病的分布有明显的地域差异,且在不同年龄组与性别间也有明显的不同。地理流行病学方法是快速、直观揭示这些变化的有效手段。
- 闫磊黄晓霞王晓芳王琦阎守邕张彦平王世文
- 关键词：手足口病地理流行病学地理信息系统
- EB病毒LMP1 C-端序列缺失对细胞增殖的影响
- 2006年
- 潜伏膜蛋白1(Latent membrane protein 1,LMP1)是由γ疱疹病毒亚科的EB病毒基因编码的能够使正常细胞发生恶性转化的跨膜信号蛋白,C-端为LMP1的主要功能区。通过PCR从B95-8细胞和鼻咽癌活检组织中获得lmp1和lmp1 C-端30bp缺失(lmp1 C-terminal deleted,lmp1-ctd)基因;利用体外基因重组技术,将lmp1和lmp1-ctd分别插入AAV质粒载体中;应用Lipofectamine介导转染HEK-293包装细胞,获得含lmp1和lmp1-ctd的rAAV;再以rAAV感染猴肾上皮细胞。利用RT-PCR检测lmp1和lmp1-ctd在猴肾上皮细胞中的转录;MTT法、流式细胞仪技术检测细胞生长和DNA合成,探讨lmp1和lmp1-ctd对其在细胞中活性的影响。结果显示:lmp1在转化细胞中转录,导致细胞生长速度加快,其中lmp1-ctd转化细胞的生长速度和处于增殖期比例高于lmp1转化细胞。提示lmp1-ctd较lmp1具有更强的促细胞增殖作用。
- 杜海军赵健周玲王琦李红霞曾毅
- 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白1细胞增殖
- EBV-LMP2基因密码子优化对其蛋白表达及免疫效果的影响被引量：3
- 2004年
- 为了研究对EBV LMP2基因按照真核密码子偏好进行密码子优化后 ,对其在真核细胞蛋白表达水平以及引发细胞免疫能力的影响 ,我们对EBV LMP2基因进行了完全改造 ,并构建了改造前后的Psectag/LMP2重组质粒 ,通过瞬时转染COS 7细胞检测其蛋白表达并进行了小鼠的DNA疫苗实验。结果表明 ,改造后的LMP2基因在真核细胞中的表达未见大幅提高 ,同时引发细胞免疫的能力也没有明显上升。结果提示 ,我们单纯按照密码子的偏好来改造基因并不一定能使蛋白的表达量和引发免疫反应的能力提高。
- 左建民周玲王琦曾毅
- 关键词：密码子优化LMP2瞬时转染CTL
- EBV-LMP2多肽所激活的特异性CTL对鼻咽癌细胞杀伤活性的研究被引量：5
- 2004年
- [目的]研究EB病毒编码的LMP2多肽片段所激活的肿瘤特异性CTL对鼻咽癌细胞的杀伤作用,探讨利用LMP2多肽对鼻咽癌进行免疫治疗。[方法]通过细胞免疫方法鉴定鼻咽癌细胞(CNE2)中的LMP2蛋白是否表达;外周血分离树突状细胞(DC)体外培养,以LMP2多肽片段负载DC激活产生特异性CTL;通过流式细胞仪、MTT法检测特异性CTL对CNE2细胞杀伤活性。[结果]在CNE2中表达LMP2蛋白,LMP2多肽所激活的肿瘤特异性CTL对鼻咽癌细胞具有杀伤活性。[结论]LMP2多肽片段所激活的肿瘤特异性CTL在体外对鼻咽癌细胞具有杀伤作用。
- 杜海军周玲左建民王琦李红霞曾毅
- 关键词：免疫疗法肿瘤特异性CTL
- HIV DNA疫苗与重组腺病毒伴随病毒联合免疫效果的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 构建含HIV 1B亚型中国株gagV3基因的DNA疫苗及重组腺病毒伴随病毒(rAAV)疫苗 ,并研究DNA疫苗和rAAV联合免疫的免疫效果。方法 将HIV 1B亚型中国株gagV3基因克隆入真核表达载体pCI neo上 ,构建了含HIV 1gagV3基因的DNA疫苗pCI gagV3。采用电击法将pCI gagV3质粒转染p815细胞 ,用G4 18压力筛选 ,得到转入重组质粒的细胞系p815 gagV3,用免疫酶法检测细胞系中HIV 1基因的表达。用该DNA疫苗进行小鼠免疫实验 ,检测免疫效果 ;用该DNA疫苗初次免疫 ,含同样gagV3基因的重组腺病毒伴随病毒rAAV gagV3加强免疫 ,采用免疫酶法检测免疫小鼠血清中HIV 1特异性的抗体水平 ,用乳酸脱氢酶法检测免疫小鼠的HIV 1特异性CTL水平。结果 pCI gagV3可以在p815细胞中表达HIV 1的基因 ,免疫BALB c小鼠后可以在小鼠体内诱发HIV 1特异性的细胞和体液免疫反应。HIV 1特异性抗体滴度为 1∶2 0 ;效靶比为 5 0∶1时 ,CTL平均杀伤率为4 1 7%。pCI gagV3与rAAV gagV3联合免疫并不能明显提高抗体水平 ,但可以提高CTL反应 ,效靶比为 5 0∶1时 ,CTL平均杀伤率为 6 1 3% ,高于单独用DNA疫苗或重组AAV疫苗免疫后产生的CTL活性。结论 DNA疫苗与重组腺病毒伴随病毒联合免疫可以提高免疫小鼠产生的HIV 1特异性CTL反应。
- 刘雁征周玲王琦叶树清李红霞曾毅
- 关键词：DNA疫苗联合免疫B亚型特异性CTL免疫小鼠中国株
- Ad5F35-LMP2重组腺病毒免疫效果的研究被引量：2
- 2007年
- 目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒（Ad5F35-LMP2），免疫恒河猴的特异性细胞和体液免疫的效果。方法分别使用高剂量（1．5×10^10TCID50/只）、中剂量（1．5×10^9TCID50/只）、低剂量（1．5×10^8TCID50/只）Ad5F35-LMP2重组腺病毒，同时设对照组（PBS4．0 ml／只）。肌内注射免疫恒河猴，每个月一次，共免疫3次，第0、4、8、12周时使用Elispot方法检测猴外周血EBV—LMP2细胞毒性T细胞应答，同时应用免疫酶方法检测血清中LMP2抗体。结果3个剂量Ad5F35-LMP2腺病毒免疫恒河猴均可以诱导出有效的细胞免疫应答及一定的抗体应答，免疫应答水平的高低与病毒剂量的高低有一定的关系，较高剂量产生的细胞及体液免疫应答水平比低剂量的高。结论Ad5F35-LMP2非复制型重组腺病毒疫苗可以有效的诱导恒河猴产生EBV—LMP2特异性细胞和体液免疫反应。
- 莫武宁周玲吴小兵王湛唐安洲黄光武余双庆王琦叶树清杜海军曾毅
- 关键词：腺病毒疱疹病毒4型膜蛋白质类恒河猴
- 去除致癌基因的EB病毒潜伏膜蛋白1的重组腺病毒的构建及其免疫效果被引量：1
- 2003年
- 为进一步研究利用EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)进行免疫治疗的可行性,构建了含有去除致癌基因的EB病毒LMP1片段(LMP1△)的穿梭质粒pAdTrack CMV LMP1△,将它与腺病毒骨架质粒pAdEasy 1用电转染的方法共同导入大肠杆菌BJ5183中,在宿主菌重组酶的介导下进行同源重组。通过抗性筛选,获得含有重组腺病毒基因的质粒;然后再通过脂质体将重组腺病毒质粒导入腺病毒包装细胞HEK293细胞中,在HEK293细胞E1蛋白的反式作用下,病毒被包装。将包装病毒的细胞裂解上清进行PCR鉴定证实,病毒DNA中含有目的基因的特异性片段。RT PCR证明了外源基因在真核细胞中得以转录,免疫酶和Westernblot的结果也显示,LMP1△蛋白在真核细胞得到表达。将扩增后的病毒感染HeLa细胞,测定病毒滴度为3.0×109PFU/ml。为初步探讨其免疫效果,采用肌肉注射和滴鼻的方式感染Balb/c纯系小鼠,免疫酶检测其特异性抗体,LDH法检测特异性CTL的杀伤作用,结果发现,两种免疫途径均可诱发小鼠针对LMP1的特异性体液免疫和细胞免疫,而且Ad5作为免疫对照组的小鼠则没有引起相应的免疫反应。
- 贾俊岭周玲左建民王琦曾毅
- 关键词：致癌基因EB病毒潜伏膜蛋白1重组腺病毒免疫效果
- 北京地区儿童EB病毒感染的血清学调查被引量：13
- 2008年
- 目的了解北京地区儿童EB病毒感染现状。方法选取北京地区0-14岁儿童的血清589份，应用微润赛润ELISA classic EBV VCA ISG试剂盒，在波长405nm下检测血清样品的吸光度值。参照试剂盒内专用的标准曲线和临界值判定血清样品EB病毒感染与否。根据专用公式计算EBV VCA IgG抗体活性。利用统计学软件SPSS13．0分析比较北京城区和农村儿童EBV感染阳性百分率及EBV VCA ISG抗体强度。结果血清学检测显示北京地区0-14岁儿童EBV感染阳性率为83．6％，其中城市为80．8％，农村为86．2％。EBV感染高峰集中在3岁之前为71％，其中城市为67.7％低于农村75．3％，6岁之前为82．5％。统计学分析比较城市和农村儿童不同年龄的EBV感染阳性百分率和EBV VCA IgG抗体活性具有显著差异。结论北京城区儿童6岁之前EBV感染阳性百分率有所降低，部分儿童初次感染年龄向后推移。
- 杜海军周玲刘宏图王琦詹少兵贾志远毛乃颖曾毅
- 关键词：疱疹病毒4型免疫球蛋白G病毒包膜蛋白质类血清学试验
- 人禽流感酶联免疫诊断方法的建立及其初步应用
- 2007年
- 目的建立人禽流感H5抗体的酶联免疫检测方法（ELISA）。方法用ELISA法检测疑似高致病性禽流感患者及正常人群血清标本中H5IgG抗体。结果23例疑似高致病性禽流感患者血清样品中有4例H5IsG抗体阳性，阳性率为17．40％，与血凝抑制试验（HI）和微量中和试验（NI）相比较，三者符和率为100％。234例正常人群血清H5 IgG抗体检测均为阴性。结论建立的ELISA方法可用于高致病性人禽流感的血清样品初步筛查。
- 鲁健郭瑜李梓曹玉玺王琦王秀平黄晶晶王敏毕胜利舒跃龙
- 关键词：人禽流感免疫球蛋白G酶联免疫吸附测定
