目的研究扩增后脐血巨核细胞的生物学特性和功能,为脐血巨核细胞的扩增和临床应用提供依据。方法收集足月妊娠健康新生儿的脐带血,免疫磁珠法分离出其中的 CD_(34)^+细胞。采用血小板生长因子(thrombopoietin,TPO)+干细胞因子(stem cell factor,SCF)+白细胞介素3(interleukin-3,IL-3)+IL-6和 TPO+SCF 两种细胞因子组合,将富集的脐血 CD_(34)^+接种于无血清无基质细胞的悬浮培养体系中,分别在3、7、10、14 d 收集扩增产物。运用流式细胞术检测巨核细胞的表型;血浆块法检测巨核细胞集落(colony forming unit-megakaryocyte,CFU-MK)的形成;对巨核细胞进行 DNA 含量检测以评价其成熟程度;血小板体外活化实验及 SCID 小鼠体内移植实验评价扩增后巨核细胞的功能。结果不同细胞因子组合和培养时间扩增后,巨核细胞的数量和生物学特性不同。随着培养时间的延长,巨核细胞(CD_(41)^+)的数量逐渐增加,但培养至14 d 时增势减缓。因子组合TPO+SCF+IL-3+IL-6各时间段的扩增能力(分别扩增5.2、40.7、121.2、149.7倍)均比因子组合TPO+SCF(分别扩增3.8、27.4、85.9、106.5倍)强,但因子组合 TPO+SCF 的扩增能力仍能满足临床的需要。巨核祖细胞(CD_(34)^+CD_(41)^+)的数量在第7天时最多(分别增加43.4和36.2倍),这也被 CFU-Mk 所证实。DNA 含量检测发现,随着培养天数的增加,多倍体细胞所占的百分比增加。体外血小板活化实验证实,扩增的巨核细胞在体外可产生血小板,有正常巨核细胞功能。移植后两组小鼠的骨髓中均检测到人 CD_(45)^+和 CD_(41)^+细胞。小鼠外周血中人血小板在移植后3 d 就可测到,5 d 就可达到高水平(分别为20.7%和17.9%),维持20 d 以后才逐渐下降。结论通过对扩增后巨核细胞的生物学特性的研究,有助于寻找有效、简便、易于植入受者体内的扩增方法。体外扩增的脐血巨核细胞可植入骨髓并产生功能正常的血小�
