陈海
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省普通高校研究生科研创新计划项目国家教育部博士点基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 用于蛋白质间相互作用研究的分析技术被引量：1
- 2010年
- 概述近年来用于蛋白质间相互作用研究的分析技术,如酵母双杂交系统、荧光共振能量转移技术、表面等离子体共振技术、蛋白质芯片技术和生物信息学方法等,分别介绍其应用原理和特点,为蛋白质间相互作用研究及构建蛋白质相互作用图谱提供理论依据。
- 徐志洲梁翠荣陈海田浤高向东
- 关键词：蛋白质间相互作用分析技术酵母双杂交系统荧光共振能量转移表面等离子共振蛋白质芯片
- 基于神经网络和遗传算法的非天然氨基酸突变蛋白的培养优化
- 2013年
- 非天然氨基酸定点改构技术已被广泛应用于蛋白质结构与功能研究以及新药开发等,然而常用的无机盐培养基营养匮乏导致突变蛋白的产量过低,严重限制了该技术的进一步应用。相比传统的优化方法,文章结合了人工神经网络以及遗传算法,更方便、更准确地对大肠杆菌发酵突变蛋白的培养条件进行了优化。试验以引入对乙酰基苯丙氨酸的尿酸酶作为模式蛋白,以尿酸酶的酶活测定直观反映蛋白表达量,对培养条件中4个因素进行了摸索并优化,最终获得了最佳培养条件为:甘油1.04%、非天然氨基酸溶液1 mmol/L、金属离子综合液0.86×、IPTG 0.5 mmol/L,并且利用优化后的培养条件发酵获得的尿酸酶产量较未优化前提高了14%。并且通过测定尿酸酶酶活的精确比较,验证了ANN方法较响应面法在优化复杂的非线性生物工艺方面的优势。本试验的顺利完成,不仅提高了引入对乙酰基苯丙氨酸的尿酸酶的产量,同时也为其他非天然氨基酸定点引入蛋白的发酵培养基优化提供了重要参考。
- 黄捷田浤陈海姚文兵
- 关键词：人工神经网络遗传算法非天然氨基酸尿酸酶培养基优化
- 蛋白质中赖氨酸衍生物定点引入的应用研究进展
- 2013年
- 赖氨酸是蛋白质的翻译后修饰位点以及多种酶活性中心关键残基,与蛋白质的结构与功能密切相关。应用遗传密码扩充技术,由来自于M.barkeri的吡咯赖氨酰tRNA合成酶(PylRS)和吡咯赖氨酰tRNA(tRNA-Pyl)构成非天然氨基酸定点引入系统,可以实现蛋白质中赖氨酸残基的定点修饰,在蛋白质中定点引入乙酰基等翻译后修饰基团、光反应基团、正交反应基团和光谱活性基团等。目前该系统已在大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞中及线虫体内成功地将10种赖氨酸衍生物编码入蛋白质中,为研究蛋白质翻译后修饰、定点标记和定点修饰、蛋白质相互作用提供了有力的工具。综述了应用该系统在蛋白质中定点引入赖氨酸衍生物的应用研究进展,并分析了该系统与目前最常用的系统相比的优势所在。
- 陆颖菲陈海姚文兵高向东
- 关键词：翻译后修饰
- 含有对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素的表达及纯化
- 2012年
- 优化定点引入对叠氮苯丙氨酸的詹氏甲烷球菌属正交酪氨酰tRNA合成酶/tRNA系统,使用优化后的正交系统在大肠杆菌内表达并纯化在特定氨基酸位点引入对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素突变体。首先将正交酪氨酰tRNA合成酶启动子-15区的TATAA序列突变为TTAA序列,同时将正交酪氨酰tRNA合成酶的第286位天冬氨酸突变为精氨酸以提高对抑制型tRNA反密码子CUA的识别力。然后将质粒pST和pET32a-mhEn转化到大肠杆菌DH10BDE3中得到重组工程菌。该重组菌在含有对叠氮苯丙氨酸的培养基中培养,并经IPTG诱导表达人内皮抑素突变体。利用镍亲和色谱纯化获得人内皮抑素突变体,纯度大于90%。通过对正交酪氨酰tRNA合成酶/tRNA系统的优化,有效提高了系统引入对叠氮苯丙氨酸的效率,人内皮抑素突变体的表达量有了显著提高。
- 刘静娴田浤姚文兵陈海尹骏高向东
