霍倩
- 作品数：10 被引量：26H指数：3
- 供职机构：昆明医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省科技计划项目云南省科技厅-昆明医学院应用基础研究联合专项资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA沉默EZH2表达对人膀胱癌细胞迁移和凋亡的影响被引量：3
- 2014年
- 目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默EZH2表达对人膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,以及对凋亡的影响。方法构建靶向EZH2基因的siRNA质粒并转染至人膀胱癌细胞中(干扰组),采用RT-PCR法检测EZH2mRNA的表达情况,利用噻唑蓝(MTT)、Transwell细胞小室及划痕实验检测转染后细胞增殖、侵袭和转移能力的变化,通过流式细胞术实验观察转染后细胞的凋亡情况。结果转染EZH2基因的siRNA质粒后(分干扰1组,干扰2组,干扰3组),干扰各组EZH2mRNA表达较阴性对照组有明显抑制(P<0.05),且干扰2组效果最好,因此选干扰2组作后期实验;在转染48h后,干扰2组生长抑制率达37.9%,较阴性对照组受到明显抑制(P<0.05);划痕实验处理24h后,干扰2组细胞的迁移距离较阴性对照组明显降低(P<0.01);干扰2组细胞侵袭能力较阴性对照组下降了67%,差异有统计学意义(P<0.01);转染48h后,干扰2组早、晚期凋亡率分别为22.80%和3.60%,较阴性对照组增加,且以早期明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 EZH2基因沉默能有效抑制人膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并促进其凋亡,为深入研究膀胱癌的基因治疗提供理论依据。
- 王海峰杨宏胡礼炳雷永虹秦扬李俊毕城伟霍倩
- 关键词：膀胱肿瘤EZH2基因迁移凋亡
- 基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4对膀胱癌细胞侵袭能力及腔内种植的影响被引量：10
- 2014年
- 目的复发和转移是膀胱癌治疗失败的主要原因。文中利用RNA干扰技术使趋化性细胞因子受体CXCR4基因沉默,探讨其沉默对膀胱癌细胞侵袭能力及腔内种植的影响。方法设计合成CXCR4的特异性短发卡状RNA(short hairpin,shRNA),筛选出能够稳定抑制CXCR4表达的细胞,并分为空白对照组、阴性对照质粒组、pshRNA-CXCR4-1实验组,pshRNA-CXCR4-2实验组,应用RT-PCR和免疫荧光分别检测CXCR4 mRNA和蛋白表达水平,应用Boyden小室模型检测体外侵袭能力的变化。将20只裸小鼠随机数表法分为实验裸小鼠和对照裸小鼠,各10只。向实验裸小鼠膀胱内注入100μL ShRNA-EJ-M3,向对照裸小鼠膀胱内注入100μL EJ-M3细胞,检测shRNA-CXCR4对膀胱癌细胞腔内种植能力的影响。结果稳定转染后的pshRNA-CXCR4-1实验组CXCR4 mRNA表达(62.05±1.35)较空白对照组(174.38±1.96)和阴性对照组(166.27±1.82)明显下降(P<0.05),pshRNA-CXCR4-2实验组CXCR4 mRNA表达水平(182.58±4.2)与空白对照组和阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);免疫荧光实验中pshRNA-CXCR4-1实验组红色免疫荧光细胞数(32.24±2.23)较空白对照组(89.61±4.47)和阴性对照组(92.45±3.68)降低(P<0.05);pshRNA-CXCR4-2实验组红色免疫荧光细胞数(76.87±5.11)与空白对照组和阴性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。体外趋化侵袭实验结果显示,pshRNACXCR4-1实验组穿膜细胞数(39.67±8.45)明显少于空白对照组(135.33±9.28)及阴性对照组(123.63±6.36),差异有统计学意义(P<0.05)。实验裸小鼠腔内种植能力与对照裸小鼠比较,差异有统计学意义(10%vs 70%,P<0.01)。结论以CXCR4为靶向的特异性shRNA能有效抑制膀胱癌细胞基因CXCR4的表达,显著降低膀胱癌细胞体外侵袭能力及腔内种植能力,SDF-1/CXCR4生物轴有望成为预防和治疗膀胱癌侵袭和转移的重要靶点之一。
- 杨德林霍倩王乙水杨旭升王凯王剑松徐鸿毅王海峰
- 关键词：CXCR4基因短发卡状RNA膀胱癌
- 血管紧张素抑制剂缬沙坦对膀胱癌细胞表达的影响
- 2015年
- 目的探讨缬沙坦对不同侵袭能力的膀胱癌细胞株血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)抗原、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。方法对三株不同侵袭能力的细胞株EJM3、EJ、BIU-87进行培养,使用10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L缬沙坦的1640培养液作用于细胞株,采用细胞生长状态测定法检测细胞增殖状况,确定最终药物浓度。根据细胞株不同分为EJ-M3组、EJ组、BIU-87组,每组细胞分为实验亚组和对照亚组,实验亚组加入含有10-3mol/L缬沙坦的RPMI-1640培养液,对照亚组仅加入无血清RPMI-1640培养液,培养48 h后抽提相应蛋白和mRNA。采用Western blotting法测定AT1R、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测AT1R、MMP-2和MMP-9基因的相对表达。采用细胞划痕实验、Transwell体外细胞侵袭实验检测3种膀胱癌细胞株的迁移能力和侵袭能力的改变。结果依据MTT实验测定出的生长曲线选择浓度为10-3mol/L的缬沙坦作为最终药物浓度。Western blotting电泳结果显示,AT1R、MMP-2、MMP-9在3个细胞株中均有表达,但均较对照亚组表达明显降低。3组细胞株对照亚组AT1R、MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达均高于实验亚组(P<0.05)。3组细胞株实验亚组细胞迁移距离短于对照亚组(t=7.24、6.14、4.30,P<0.01)。3组细胞株实验亚组侵入细胞数量较对照亚组少(t=6.24、4.33、2.81,P<0.01)。结论缬沙坦可有效抑制膀胱癌细胞AT1R表达,进而抑制MMP-2和MMP-9表达。AT1R抑制剂有可能成为一种新的抑制膀胱癌转移和延长膀胱癌患者生存期的药物。
- 霍倩杨德林杨定芳颜汝平王海峰韦海荣丁祥黎唐钊然
- 关键词：膀胱肿瘤基质金属蛋白酶类
- EZH2的小干扰RNA真核表达载体的构建及其在膀胱癌T24细胞系稳定表达的研究被引量：1
- 2013年
- 目的构建EZH2的小干扰RNA(siRNA2)真核表达载体质粒,获得稳定表达干扰质粒的膀胱癌细胞系,并探讨EZH2在膀胱癌中的作用。方法通过合成特异性沉默EZH2的siRNA2片段,获得pEGFP-C1-siEZH2表达载体;脂质体介导重组质粒转染T24细胞,经G418加压筛选获得稳定转染细胞株,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测转染后细胞系T24 EZH2的表达。结果经测序证明重组载体构建成功,稳定转染siRNA2的T24细胞EZH2的mRNA和蛋白水平均较空白对照组下降(P<0.01)。结论成功构建EZH2的siRNA2真核表达载体,获得EZH2稳定沉默的T24细胞系,为进一步研究以EZH2为靶点的膀胱癌基因治疗奠定实验基础。
- 王海峰杨宏胡礼炳雷永虹秦扬李俊毕城伟霍倩
- 关键词：EZH2膀胱肿瘤RNA干扰
- 苯并(a)芘对大鼠睾丸支持细胞连接蛋白基因表达的影响被引量：3
- 2013年
- [目的]探讨苯并(a)芘(BaP)对大鼠原代培养睾丸支持细胞的连接蛋白(connexin 43、occludin、ZO-1、N-cadherin)基因mRNA表达的影响及可能机制。[方法]取出生21d SD大鼠睾丸组织,分离支持细胞,细胞分离后,均按照1.5×106个/mL浓度接种于细胞培养板中。培养48h后,以0、1、10、50、100μmol/L浓度的BaP同时染毒于原代培养的大鼠支持细胞12h,每个剂量设置6个平行孔。检测支持细胞活力、凋亡蛋白caspase-3活性,以及连接蛋白基因的mRNA表达。[结果]在BaP 50μmol/L时,支持细胞活力降低(和对照组相比,P<0.01);在BaP 10μmol/L时caspase-3活性升高,连接蛋白connexin 43、occludin、和ZO-1基因的mRNA表达降低(和对照组相比,P<0.05)。在BaP 100μmol/L时连接蛋白N-cadherin基因的mRNA表达降低(和对照组相比,P<0.05)。加入caspase-3抑制剂后,BaP所诱导的连接蛋白基因表达下降,且随caspase-3活性变化而发生改变。[结论]BaP能诱导大鼠支持细胞连接蛋白mRNA表达下降,BaP诱导的caspase-3活性上升是调节连接蛋白mRNA表达下降的可能机制。
- 李翠珍霍倩张晨周志俊吴庆
- 关键词：苯并(A)芘睾丸支持细胞CASPASE-3连接蛋白
- 垃圾焚烧区周边居民血浆中细胞因子的表达水平及其影响因素
- 2014年
- [目的]探讨垃圾焚烧区周边居民外周血中细胞色素P450 1A1(CYP1A1)基因mRNA表达水平和血浆中细胞因子白介素(IL)-6、IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-23的表达水平。[方法]选择居住社区位于垃圾焚烧厂烟囱下风向<10 km范围内某社区的男性居民42名为暴露组;居住区距垃圾焚烧区>10 km且无明显环境接触垃圾焚烧污染物的44名男性居民为对照组。采用半定量逆转录-聚合酶链反应检测研究对象外周血中CYP1A1基因mRNA相对表达水平;Bio-PlexTM悬液芯片测定研究对象血浆中IL-6、IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-23细胞因子的浓度。[结果]暴露组人群外周血CYP1A1基因mRNA相对表达水平高于对照组人群的平均水平(P<0.05)。暴露组人群血浆中细胞因子IL-17F、IL-21、IL-23的浓度均高于对照组(P<0.05)。细胞因子IL-17F、IL-21、IL-23的浓度经自然对数转换后分别与暴露、年龄、体质指数等因素做多元线性回归分析,发现暴露与IL-17F、IL-23表达水平的升高有关(P<0.05)。[结论]暴露组人群外周血CYP1A1基因mRNA表达水平高于对照组人群的平均水平,且两组人群血浆中IL-17F、IL-23的表达水平亦有差异。
- 霍倩张晨于茂辉周志俊吴庆
- 关键词：垃圾焚烧环境污染物白介素-23细胞因子血浆
- 血管紧张素Ⅱ1型受体抑制剂缬沙坦对膀胱癌生物学行为的影响及机制的初步探讨
- 目的：研究血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂缬沙坦对不同侵袭能力的膀胱癌细胞株的细胞增殖、迁移及侵袭能力的关系,探讨缬沙坦对不同侵袭能力的膀胱癌细胞株的血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)抗原、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属...
- 霍倩
- 关键词：膀胱肿瘤
- 文献传递
- 上调microRNA-101沉默EZH2基因表达对人膀胱癌T24细胞系增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2014年
- 目的探讨microRNA-101抑制靶基因EZH2对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响.方法构建靶向EZH2基因的microRNA-101质粒并转染至人膀胱癌细胞中,采用RT-PCR法检测EZH2mRNA的表达情况,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖抑制,通过Annexin V-FITC/PI流式细胞术实验观察转染后细胞的凋亡情况.结果 microRNA-101阳性对照组EZH2 mRNA较阴性对照组和空白对照组表达下降(P<0.05);在转染5 d后,其生长抑制率明显高于对照组(P<0.01);microRNA-101组较阴性对照组及空白对照组G0/G1期细胞数明显增多,S期细胞数明显减少,凋亡率增加(P<0.01).结论上调microRNA-101可抑制EZH2基因的表达,并有效的抑制人膀胱癌细胞的增殖,促进其凋亡,为深入研究膀胱癌的基因治疗提供理论依据.
- 王海峰杨宏胡礼炳霍倩雷永虹秦扬李俊毕城伟
- 关键词：膀胱癌EZH2基因
- 血管紧张素Ⅱ的1型受体在肿瘤中作用的研究进展
- 2013年
- 血管紧张素Ⅱ是肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）中一种主要的多功能活性肽,不仅在调节血压、维持体液和电解质平衡等方面起着不可忽视的作用,而且在新生血管的增殖、迁移和生长因子的生长方面有重要的作用,对血管紧张素受体拮抗剂的研究将可能为恶性肿瘤的治疗提供一个新颖有效的方法.
- 霍倩王海峰杨德林
- 关键词：肿瘤
- 促甲状腺激素受体基因甲基化与甲状腺乳头状癌关联的Meta分析被引量：6
- 2013年
- 目的应用Meta分析方法综合评价促甲状腺激素受体(TSHR)基因的甲基化与人甲状腺乳头状癌的关联,为预防和诊治甲状腺乳头状癌提供参考。方法检索纳入2000年1月—2013年4月发表的8篇有关TSHR基因甲基化和人甲状腺乳头状癌关系的中英文文献,应用随机效应模型和固定效应模型对其进行综合的定量分析。结果来自8篇文献的583份样本被纳入Meta分析,甲状腺乳头状癌样本中TSHR基因发生甲基化数与对照组相比的合并OR值为4.57〔95%CI(1.68,12.43),P<0.01〕。分层分析(对照类型、国家、年龄、肿瘤分期、淋巴结转移)以及回归分析用于探索异质性的来源以及可能的危险因素,结果显示,在中国人群中和年龄小于45岁的甲状腺乳头状癌人群中〔OR=9.18,95%CI(5.19,16.23),P<0.01〕以及在非自体组织为对照的研究中〔OR=8.51,95%CI(3.72,19.46),P<0.01〕,TSHR基因的甲基化发生率均较高。TSHR基因甲基化在各期甲状腺癌中均可出现,TSHR基因甲基化发生率在肿瘤中晚期阶段〔OR=14.12,95%CI(2.93,68.18)〕高于早期〔OR=6.01,95%CI(3.21,11.28)〕,与淋巴结转移也存在关联〔OR=14.29,95%CI(2.47,82.75),P<0.01〕。本研究未观察到存在发表偏倚(t=-0.01,P>0.05),具有较好的代表性。结论 TSHR基因为甲状腺乳头状癌抑制基因,其甲基化的发生与甲状腺乳头状癌具有很强的相关性,可作为一个潜在的分子诊断标志物。
- 张晨霍倩李翠珍周志俊吴庆
- 关键词：甲状腺肿瘤促甲状腺激素受体甲基化META分析
