顾建明
- 作品数：28 被引量：54H指数：4
- 供职机构：苏州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教委资助优秀年轻教师基金更多>>
- 相关领域：医药卫生核科学技术生物学更多>>
- 聚合酶链反应条件控制与优化被引量：1
- 1991年
- 聚合酶链反应作为一种强有效的DNA 体外扩增技术,已被广泛地应用于一些遗传性疾病的临床基因诊断。然而,它对反应条件的变化颇为敏感.本文观察了不同反应物成分及时间/温度参量对聚合酶链反应产量和特异性的影响.通过探讨这些因素如何影响扩增结果,以及它们之间在扩增过程中如何相互作用等问题,加深了对影响条件优化的相互关联的各生物化学及生物物理参量的理解,为优化扩增条件提供依据。
- 王晓冬顾建明潘峻亮吴庆宇李佩霞阮长耿
- 关键词：聚合酶链反应
- 一种快速分离真核细胞RNA的方法被引量：3
- 1992年
- 以改良的异硫氰酸胍-苯酚-氯仿法从真核细胞中制备RNA,经琼脂糖微电泳检查,可清楚见到三条真核细胞核糖体RNA带(28S,18S,和5S);经Norther blot检测可见未降解的1.9Kb肌动蛋白mRNA杂交区带。该法具有快速、简便、产率和纯度均较高等优点。
- 顾建明吴庆宇王晓冬李佩霞阮长耿
- 关键词：细胞RNA
- 基因探针在大肠杆菌中的扩增及其提纯
- 1990年
- 本文报道了基因探针在大肠杆菌中的扩增与提纯方法。含基因探针的质粒用氯化钙方法转染大肠杆菌,被转染的细菌与质粒在培养液中同步扩增,然后用碱裂解法抽提扩增后的质粒。结果表明:(1)质粒的转化效率与其浓度有关;(2)经转染、扩增与抽提后,获得了大量的纯化质粒DNA;(3)纯化后的基因探针能满意地用于DNA 标记及分子杂交。
- 顾建明潘峻亮吴庆宇阮长耿
- 关键词：基因探针质粒大肠杆菌
- 一例FⅤ Leiden基因突变所致的抗活化的蛋白C现象被引量：32
- 1997年
- 目的：了解抗活化的蛋白C（APCR）在我国人群和血栓性疾患患者中发生情况。方法：用活化的蛋白C（APC）－APTT，多聚酶链反应（PCR）及限制性内切酶分析，PCR－SSP及DNA序列分析，对28例正常人及18例血栓性疾患患者进行APC测定及FⅤLeiden基因突变分析。结果：发现1例正常人抗APC敏感性比值（APC－SR）明显减低，并确诊为FⅤLeiden（FⅤArg506→Gln）突变杂合子；3例血栓性疾患患者APC－SR低于正常，但均无FⅤLeiden突变。结论：这是在国内发现的1例FⅤLeiden突变所致的APCR现象，中国人易栓症中APCR的产生是否存在其它未知的基因缺陷，尚有待进一步研究。
- 吴竞生顾建明JHMorrissey孙自敏汪健NEsmon
- 关键词：基因突变APCR蛋白C血栓性疾病
- 应用凝血因子Ⅷ基因内XbaⅠ/FⅧ_(E22)RFLP对甲型血友病携带者的诊断
- 1990年
- 用FⅧ基因内第22外显子FⅧ_(E22)为探针,分析苏州地区正常人XbaI/FⅧ_(E22)RFLP,显示出9.6/4.8Kb 的多态性,频率为0.36/0.64.PIC 值为0.46。并以此为基础对1例甲型血友病携带者进行检测。
- 潘峻亮顾建明李红程大卫吴庆宇阮长耿
- 关键词：凝血因子携带者
- DNA抽提与基因探针标记的几种方法比较被引量：1
- 1990年
- 比较了苯酚—氯仿、NP—40和盐酸胍3种不同的 DNA 抽提方法,并对基因探针标记同位素掺入法(缺口平移法和随机引物法)和非同位素掺入法在单拷贝基因检测中的应用进行了探讨。
- 潘峻亮顾建明李红吴庆宇阮长耿
- 关键词：DNA抽提盐酸胍
- 变性梯度凝胶电泳检测轻型血友病甲的基因突变(Arg1689Cys)
- 1996年
- 血友病甲是一种常见的遗传性出血性疾病,由因子FⅧ缺乏引起。应用聚合酶链反应和变性梯度凝胶电泳技术,在一例轻型血友病甲患者的因子Ⅷ基因第14号外显子3’端发现碱基替换;直接测序表明密码子CGC突变为TGC,导致FⅧ蛋白Arg1689Cys,使凝血活化FⅧ发生障碍。该突变同时产生一个PstⅠ限制性酶切位点,该突变已证实与血友病相关。
- 阮长耿顾建明J-MLavergnDMeyer
- 关键词：血友病甲基因突变
- 应用VNTR／PCR技术进行血友病甲家系分析被引量：4
- 1995年
- 应用ＶＮＴＲ／ＰＣＲ技术进行血友病甲家系分析吴竞生，顾建明，阮长耿，潘理明，汪健，丁浩，孙自敏我们利用ＳＴ１４可变数目串联重复序列（ＶＮＴＲ），对两例血友病甲家系进行了基因诊断，其结果如下。材料和方法１标本来源３例血友病甲家系１２名家庭成员ＤＮＡ曾用...
- 吴竞生顾建明阮长耿潘理明汪健丁浩孙自敏
- 关键词：血友病甲家系分析基因诊断聚合酶链反应
- 纤维蛋白单抗SZ-58嵌合Fab片段在大肠杆菌中的表达
- 1996年
- 为减少鼠源单抗的免疫原性，降低其分子量，应用基因重组技术将纤维蛋白单抗ＳＺ－５８可变区基因与人ＩｇＧ１恒定区基因Ｃ_Ｈ１、Ｃｋ进行拼接、扩增。将扩增后的ＳＺ－５８嵌合Ｆａｂ基因克隆至噬菌体质粒，并导入大肠杆菌中进行表达。表达的嵌合Ｆａｂ片段为可溶性。放免检测其在表达上清中的含量约为２００μｇ／Ｌ，免疫印迹电泳证实ＳＺ－５８嵌合Ｆａｂ片段能特异地与纤维蛋白Ｄ－Ｄｉｍｅｒ结合。
- 刘跃夏利军顾建明傅建新万海英阮长耿
- 关键词：单克隆抗体纤维蛋白大肠杆菌
- 2N型血管性血友病临床表现与基因突变被引量：4
- 1996年
- 报道１例２Ｎ型血管性血友病（ｖＷＤ）患者，其临床表现和实验室检查与血友病甲完全相似，以前一直被误诊为血友病甲。运用ｖｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）－ＦⅧ结合试验，发现患者血浆ｖＷＦ不能与ＦⅧ结合。为了阐明该患者ｖＷＦ缺陷的分子病理机制，通过多聚酶链反应（ＰＣＲ）和变性梯度凝胶电泳，发现该患者在１８号外显子内存在Ｇ→Ａ突变，序列分析表明患者成熟ｖＷＦＮ端ＦⅧ结合区域２２位氨基酸残基甘氨酸（Ｇｌｙ）突变为谷氨酸（Ｇｌｕ）。该Ｇ→Ａ突变产生了一个ＳａｃⅠ限制性酶切位点。
- 阮长耿阮长耿顾建明程大卫
- 关键词：血友病基因突变
