马茹
- 作品数：23 被引量：39H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>
- 一种具有靶向功能的超抗原,其制备方法及用途
- 本发明公开了一种具有靶向功能的超抗原，还公开了该超抗原的制备方法及用途。该超抗原包括靶向部分和超抗原部分，其中靶向部分为可与LeY家族糖类抗原结合的源于B3单克隆抗体的基因工程抗体，超抗原部分为葡萄球菌肠毒素A。该超抗原...
- 姜永强郑玉玲王建丽马茹宁保安
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- 一种具有靶向功能的超抗原,其制备方法及用途
- 本发明公开了一种具有靶向功能的超抗原，还公开了该超抗原的制备方法及用途。该超抗原包括靶向部分和超抗原部分，其中靶向部分为可与LeY家族糖类抗原结合的源于B3单克隆抗体的基因工程抗体，超抗原部分为葡萄球菌肠毒素A。该超抗原...
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- 一种金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白的融合蛋白,其制备方法及用途
- 本发明公开了一种金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白的融合蛋白，还公开了其制备方法及用途。本发明融合蛋白是金黄色葡萄球菌fnb与表达载体上的硫氧还蛋白Trx融合而成，其制备方法包括制备金黄色葡萄球菌表面蛋白fnb编码基因，将f...
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- 一种低毒性葡激酶突变体，其制备方法及用途
- 本发明公开了一种新型低毒性葡激酶突变体，还公开了其制备方法及用途。本发明的葡激酶突变体与野生型葡激酶相比，36位氨基酸为甘氨酸，130位氨基酸为苏氨酸，135位氨基酸为精氨酸。制备该突变体的方法包括葡激酶基因定点突变、与...
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- 低出血倾向、低免疫原性葡激酶mSAK(K130T,K135R)的表达、纯化与活性测定
- 2005年
- 为了有效降低葡激酶应用的副作用,构建低出血倾向、低免疫原性葡激酶突变体,高效表达纯化后进行活性鉴定,以野生型重组葡激酶基因为模板,PCR法引入突变位点(K130T,K135R),并将该片段克隆测序鉴定后,克隆至表达载体pBV220,构建低免疫原性葡激酶突变体.表达后的蛋白用Q-Sepharose FF柱与Sephacryl S-200进行纯化,纤维蛋白溶圈法进行活性测定,体外抗体中和试验与豚鼠免疫试验测定突变体蛋白的免疫原性,同时进行动物体内出血倾向观察.测序结果表明,相应位点获得突变,无非特异性突变,将突变后的片段连接pBV220导入大肠杆菌热激诱导获得了高效表达,表达产物占菌体总蛋白的40%～50%.产物主要以可溶性形式存在,经两步纯化后的蛋白的纯度可达98%以上.活性测定试验表明,该突变体的活性较野生型葡激酶稍低,体外中和抗体试验和豚鼠免疫试验证明免疫原性大为下降,豚鼠的皮肤出血以及肺部病理切片均显示该突变体蛋白引起的出血倾向明显降低.
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- 关键词：葡激酶免疫原性
- 一种新型RGD葡激酶双功能分子，其制备方法及用途
- 本发明公开了一种新型RGD葡激酶双功能分子，还公开了其制备方法及用途。本发明的双功能分子是将葡激酶或其衍生物的35、36、37位氨基酸顺序替换为精氨酸R、甘氨酸G和天门冬氨酸D。制备该突变体的方法包括葡激酶基因定点突变、...
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- 葡萄球菌A型肠毒素的高效表达和分离纯化被引量：2
- 2002年
- 根据已知葡萄球菌A型肠毒素 (SEA)的基因序列 ,用PCR从产毒标准株S .aureusFRI 10 0中扩增得到约70 0的SEA基因片段 ,并将该片段克隆至表达载体 pBV2 2 0中 ,实现了高效表达。表达产物以可溶性形式存在 ,表达的毒素用CM SephroseFF离子交换层析进行纯化 ,获得了高纯度的重组SEA ,SDS PAGE显示单一条带。ELISA试验证明所获重组SEA具有与天然SEA相似的免疫学性质。
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- 关键词：纯化
- 一种利用基因工程手段制备细菌超抗原的方法
- 本发明公开了一种用基因工程的手段制备细菌超抗原的方法，包括以下步骤：(1)细菌超抗原基因的制备；(2)与原核表达载体pBV220相连接；(3)重组质粒转化大肠杆菌，在大肠杆菌中进行高效表达。本发明所述细菌超抗原是来源于葡...
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- 单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hiprep26/60SephacrylS-200HR纯化。纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性。结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。通过复性及QSepharoseHP离子交换柱和Hiprep26/60SephacrylS-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg。活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高。结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法。
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- 关键词：超抗原
- RGD-葡激酶突变体(K130T,K135R)的制备与活性分析被引量：5
- 2005年
- 以葡激酶突变体质粒mSAK(K130T ,K135R) pBV2 2 0为模板,PCR重叠引物延伸法引入突变位点,并将该片段克隆至载体pBV2 2 0 ,构建了RGD mSAK pBV2 2 0质粒,转化大肠杆菌后热激诱导获得了高效表达,表达产物占菌体总蛋白的5 0 %以上,且主要以可溶性形式存在,所获蛋白依次用Q SepharoseHP柱、SephaycrylS 2 0 0HR柱和SP柱进行纯化,纯化的蛋白的纯度可达98%以上,纤维蛋白溶圈法体外溶栓活性测定结果表明,所获RGD mSAK蛋白溶栓活性与野生型葡激酶相当,豚鼠体内免疫试验证明突变体的免疫原性也有所降低,血小板聚集试验分析突变体蛋白的抗血小板聚集能力,RGD 葡激酶突变体具有一定的抗血小板聚集能力。
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