黄建生
- 作品数：67 被引量：209H指数：9
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学热带军队卫生学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广州市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人肺表面活性物质相关蛋白A1基因在大肠杆菌中的表达及产物的分离纯化被引量：5
- 2001年
- 目的 研究人肺表面活性物质相关蛋白A1(SP A1)在大肠杆菌中的表达、产物纯化及免疫原性。方法 将人SP A1基因克隆至表达载体pGEX 2T上 ,分别转化至大肠杆菌JM10 1、JM10 5、JM10 9、XL1 blue和BL2 1(DE3)等不同宿主 ,并在不同温度中的表达 ,采用包涵体纯化方法及亲和层析法纯化目的蛋白 ,用ELISA及Westertblot初步分析SP A1蛋白的免疫原性 ,融合蛋白质经凝血酶酶切分析。结果 SP A1基因在前 4种宿主中表达有完整蛋白质和不完整蛋白质 ,目的蛋白质分别占总蛋白的 6 7%、9 8%、9 3%、14 8% ;于 2 8℃时 ,该基因在BL2 1(DE3)宿主中表达产物均为完整蛋白质 ,占总蛋白质的 10 %。经包涵体纯化和GlutathioneSepharose 4B亲和层析纯化 ,可获得纯度达 95 %以上的纯化蛋白。目的蛋白可被抗SP A多克隆抗体特异识别 ,凝血酶作用后可切出相对分子质量为2 6 0 0 0的目的蛋白质片段。结论 人组织特异性蛋白质SP A1可在大肠杆菌中表达 ,表达产物具有良好的免疫原性。
- 兰和魁封志纯黄建生郑维扬姬毅任大明
- 关键词：肺表面活性剂大肠杆菌基因克隆
- 肺表面活性物质结合蛋白AcDNA克隆及序列分析被引量：1
- 2000年
- 目的 获得中国人的肺表面活性物质结合蛋白A(SP A) 6AcDNA基因克隆 ,并进行序列分析 ,为进一步研究中国人SP A基因型特点提供方法和资料 ,同时也为SP A基因表达调控。方法以正常人肺组织mRNA为模板 ,采用逆转录反应 (RT) PCR、巢式 PCR及基因克隆技术 ,获得pUC19/SP A 6A克隆 ,并测序证实。结果 从正常中国人肺组织中提取到完整mRNA ,经RT PCR、巢式 PCR扩增 ,得到约 840bp目的片段 ,分别用BamHI、HindIII和PstI酶切 ,酶切片段与分析结果一致 ,分别为 138、2 75、416、388和 417bp。将 840bp目的片段与测序载体连接 ,测序结果显示 ,与已发表的SP A6A序列相比 ,有若干个碱基不同 ,随机重复 2个克隆 ,证实位于第 19、6 2、133位密码子的改变是稳定存在的。结论 证实获得的中国人SP A基因克隆为 6A3 型。
- 姬毅封志纯黄建生任大明
- 关键词：肺表面活性剂克隆呼吸窘迫
- 爱滋病的反义抑制治疗被引量：4
- 1995年
- 爱滋病的反义抑制治疗黄建生，王昌才，任大明（广州第一军医大学生物化学教研室，广州５１０５１５）（复旦大学遗传所国家重点实验室，上海２００４３３）关键词反义ＲＮＡ，爱滋病（ＡＩＤＳ）反义ＲＮＡ是一种与ｍＲＮＡ互补的ＲＮＡ分子，是反义基因的转录产物，它能...
- 黄建生王昌才任大明
- 关键词：反义RNA艾滋病
- 丙型肝炎病毒及恶性疟原虫复合多表位抗原基因与谷胱甘肽转硫酶基因的融合表达及其在小鼠中免疫应答的研究被引量：4
- 1999年
- 目的：探讨复合多表位丙型肝炎病毒（ＨｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）及恶性疟原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ，Ｐｆ）双价疫苗的可行性。方法：将人工合成的复合多表位ＨＣＶ基因ＰＣＸ及Ｐｆ抗原基因ＡＢ（ＳＰｆ６６＋ＳＰｆ１０５）克隆到谷胱甘肽转硫酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴ）表达载体ｐＧＥＸ２Ｔ中，并在大肠杆菌中高效表达ＧＳＴＨＣＶＰｆ复合抗原（ＧＳＴＣＡＢ），分析表达产物的免疫特异性、免疫原性及安全性。结果：ＧＳＴＣＡＢ可被ＨＣＶ患者血清、鼠抗ＧＺＰＣＸ及鼠抗Ｐｆ抗体特异识别，可诱发小鼠产生针对ＧＳＴＣＡＢ、ＧＺＰＣＸ及ＰｆＡｇ的特异性体液免疫应答及针对ＧＳＴＣＡＢ、ＧＺＰＣＸ的迟发性超敏反应，免疫后ＣＤ８＋Ｔ细胞比例略为升高，免疫小鼠未见明显的毒副作用。结论：ＧＳＴＣＡＢ融合蛋白具有良好的ＨＣＶ及Ｐｆ免疫特异性，可诱发理想的体液及细胞免疫应答，可望成为ＨＣＶＰｆ双价疫苗的候选抗原。
- 黄建生钟雄林毕惠祥毕惠祥张潜董文其袁纪军解咏梅董宁任大明
- 关键词：丙型肝炎恶性疟原虫免疫应答
- 人肺表面活性相关蛋白A1在酿酒酵母中表达、纯化及活性分析被引量：4
- 2001年
- 将编码正常人肺表面活性物质相关蛋白A1基因的cDNA克隆至酿酒酵母的分泌表达载体pVT10 2U α中 ,构建了重组质粒pVT10 2U α SP A1,转化酵母宿主菌S 78,通过改变培养基的pH值水平 ,经摇瓶培养 ,SDS PAGE结果显示 ,培养上清中SP A1表达量达 40 0mg L以上 ,表达产物分子量为 6 2kD和 32kD。分别以二聚体和单体形式出现。ELISA和Westernblot实验表明表达产物能被抗体特异性识别。生物学活性检测证实其具有调理肺巨噬细胞吞噬E .coli的功能。
- 兰和魁封志纯黄建生郑维扬陈丽珊淳于利娟任大明
- 关键词：酿酒酵母纯化活性分析
- 恶性疟口服活菌苗的免疫原性及安全性的初步研究被引量：2
- 1995年
- 在减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１中表达了人工合成的恶性疟杂合４５肽抗原基因，并在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠及家兔中诱发出一定水平的特异性体液免疫及细胞免疫。在减毒菌中表达的融合抗原ＧＺ－Ａ可特异地识别兔抗ＧＺ－Ａ血清、鼠抗Ｐｆ血清及恶性疟患者血清，滴度分别为１：６４００、１：１０２４０及１：４。小鼠口服（ｐｏ）重组疫苗图ＳＬ３２６１（ｎＷＲＡ）后，细菌在肠道至少可寄生１月以上，且在体外仍然可以表达目的抗原。静脉注射（ｉｖ）活菌后首日可见菌血症。１０￣８ｃｆｕ量全身免疫（ｉｐ、ｉｖ）后可致小鼠死亡。ｉｐ、ｉｖ组脾脏肿大１～２倍，肝脏轻度肿大，而ｐｏ组则未见明显改变。清理切片显示肝脏轻度充血，汇管区有淋巴细胞聚集，枯否氏细胞轻度增生等；脾小体增生扩大，巨细胞明显增生等，上述改变以ｉｐ及ｉｖ组较为明显。结果说明，ＳＬ３２６１（ｐＷＲＡ）所表达的恶性疟原虫杂合抗原可特异地被抗Ｐｆ抗体所识别，活菌苗口服后可在肠道较长久地寄生，且不引起明显的毒副作用。
- 黄建生王昌才任大明李全贞钟雄林
- 关键词：鼠伤寒沙门氏菌减毒恶性疟原虫活菌苗
- 恶性疟原虫杂合45肽抗原基因重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在家兔免疫应答的初步研究被引量：2
- 1995年
- 已经在减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬＳ３６１以融合蛋白的形式表达了人工合成的恶性疟原虫杂合抗原基因Ａ。活菌以２×１０￣９ｃｆｕ（ｃｏｎｏｌｙｆｏｒｍｕｎｉｔｓ）经口服免疫新西兰家兔，用ＥＬＩＳＡ法测定血清中抗体水平，结果于首次免疫或加强免疫后都可检测到一定水平的特异性抗体，并可诱发出针对融合蛋白和恶性疟原虫抗原的迟发性超敏反应（ＤＴＨ）。活菌苗免疫后未见明显的毒副作用。
- 黄建生王昌才李全贞任大明钟雄林陈仕荣李英杰
- 关键词：鼠伤寒沙门氏菌恶性疟原虫免疫应答活菌苗
- hTERT基因片段的克隆、表达和抗hTERT抗体用于端粒酶及hTERT检测的研究被引量：3
- 2000年
- 端粒酶是一种重要的肿瘤生物学标志,其活性在生殖细胞、绝大多数肿瘤细胞和体外培养的永生细胞可以测知,但在大多数体细胞中不易测出。人端粒酶由两部分组成,包括hTERC和hTERT,hTERC在正常细胞和肿瘤细胞中均有表达,而hTERT的表达似乎受到严格的调控且和端粒酶活性一致。为了检测肿瘤细胞中端粒酶及hTERT的表达,我们制备了抗hTERT蛋白的特异性多克隆抗体。首先用RT-PCR方法克隆了hTERT cDNA的一个片段,将其连接到GST融合表达载体pGEX-5X-3后在大肠杆菌中融合表达。将纯化的融合蛋白抗原免疫动物,制备抗hTERT蛋白的多克隆抗体。不同的细胞抽提物用该抗体进行了Western blot分析,结果表明该抗体可特异识别端粒酶阳性细胞株中的hTERT及端粒酶,为端粒酶及hTERT的检测初步提供了一个简单有效的检测手段。
- SAID A.Saleh孙建龙陈昭黄建生沈先荣张伯生任大明
- 关键词：免疫检测端粒酶
- HCV复合多表位抗原基因表达及免疫原性的研究被引量：10
- 1999年
- 分类号Ｑ７８１文献标识码Ａ文章编号０００１６２０９（１９９９）０３０２６８７１丙型肝炎是常见的传染病之一，易于慢性化及发展为肝硬化，且与肝癌的发生关系密切，目前尚无理想的防治手段。国内外对丙型肝炎疫苗的研究仍处于克隆表达ＨＣＶ部分基因产物或合成...
- 黄建生解咏梅林元凯任大明
- 关键词：丙型肝炎病毒免疫原性
- 丙型肝炎病毒多表位抗原在恒河猴中的免疫应答及保护性试验被引量：4
- 2002年
- 利用ＨＣＶ抗原多表位来研制ＨＣＶ疫苗是目前的一个新方向。本研 究利用ＨＣＶ的ＨＣＶ的５个保守表位串联，并加入破伤风类毒素上的一个Ｔ细胞激活位点，设计成 一个ＨＣＶ多表位抗原基因ＰＣＸ，在大肠杆菌中表达，用此蛋白免疫恒河猴，诱导猴体产生了较 高的抗体水平，滴度达１∶１０００以上，在免疫后的６０周抗体滴度仍达１∶４０以上。同时，在免 疫后６周用人ＨＣＶ阳性血清攻击猴子，免疫ＰＣＸ的猴子出现一过性ＡＬＴ升高，在攻击后三周内用 ＲＴ－ＰＣＲ检测到猴血清内ＨＣＶ的ＲＮＡ阳性。结果表明，免疫多表位的ＰＣＸ蛋白可以诱导机体产生 高水平的免疫应答。
- 和绍清杨芳代解杰胡方黄建生李琦涵
- 关键词：丙型肝炎病毒多表位抗原体液免疫恒河猴免疫应答
