肖荣海
- 作品数：5 被引量：19H指数：3
- 供职机构：云南出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 实时荧光定量RT-PCR检测猪水疱病病毒的研究被引量：3
- 2006年
- 按照猪水疱病病毒结构蛋白VP1基因序列,设计合成引物和探针,经各反应条件的优化,建立了实时荧光定量RT-PCR技术,对猪水疱病病毒进行了特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,实时荧光TaqManRT-PCR可检测到每个反应相当于1×102拷贝病毒RNA;与FMDV、VSV等其他水疱性病毒不发生交叉反应;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0.993;与常规的RT-PCR比较,该方法具有快速、特异、敏感、重复性好、可同时检测大量样品等优点。
- 钟金栋花群义肖荣海夏雪山杨云庆周晓黎董俊邓祖洪
- 关键词：猪水疱病病毒聚合酶链反应
- 蓝舌病病毒vp7基因的表达及其产物在c-ELISA中的应用被引量：3
- 2004年
- 获得稳定、高效的具有良好抗原性的蓝舌病毒(Bluetonguevirus,BTV)vp7基因重组抗原。将BTV编码群特异性抗原VP7的S7基因片段克隆至pMD18-T质粒载体中,构建S7克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析。与已报道的多株BTV编码VP7的基因比较后发现,所测定毒株的核苷酸序列与BTV10型的S7基因同源性高达98.7%,推测的氨基酸同源性为99.3%,证实为BTV的S7基因。然后亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表达载体,转化LGM194细胞,经抗性培养、PCR、限制性内切酶分析、测序鉴定,筛选获得BTVS7基因片段正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了BTV群特异性抗原VP7的重组表达载体。经L-araboinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP7蛋白抗原。SDS-PAGE、ELISA试验表明,表达蛋白为融合蛋白,具有反应原性,分子量约54.5kD,重组蛋白的获得率为1.52mg/g湿菌,其表达产量约占菌体总蛋白的12%左右,相当于93.5mg/L菌液。融合蛋白中含有BTVVP7特异性蛋白抗原,可作为c-ELISA包被抗原,为蓝舌病的免疫血清学诊断试剂的制备和分子生物学研究打下了坚实基础。
- 花群义肖荣海徐自忠杨云庆董俊杨晶焰贾建军
- 关键词：蓝舌病病毒VP7C-ELISA
- BTV VP7抗原基因的表达及抗原性研究
- 花群义徐自忠徐维加董俊杨晶焰杨云庆贾建军周晓黎肖荣海
- 该项目研究成果是应用基因工程技术，将BTV VP7蛋白基因克隆到pBAD/Thio-TOPO表达载体中，构建的BTV VP7蛋白基因表达重组质粒，获得了BTV VP7蛋白稳定、高效表达的工程菌株，建立起基因工程生产BTV...
- 关键词：
- 关键词：抗原基因蓝舌病毒
- 猪水泡病病毒VP1基因的克隆和表达被引量：1
- 2006年
- 以猪水泡病病毒RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了849bp的VP1基因,通过T-A克隆技术,将VP1基因片段克隆至pMD18-T克隆载体质粒中,构建SVDVVP1基因克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表达载体,经测序鉴定,筛选获得VP1基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了猪水泡病病毒VP1基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP1蛋白抗原。SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.002%的L-阿拉伯醛糖进行诱导,5h后表达可达到高峰,表达蛋白为融合蛋白,质量约47.13kDa,表达产量约占菌体总蛋白的16%。Westernblotting检测表明,诱导的蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。融合蛋白中含有猪水泡病病毒VP1蛋白抗原,为应用该表达蛋白抗原制备SVD免疫血清学诊断试剂和新型疫苗构建奠定基础。
- 钟金栋花群义肖荣海夏雪山杨云庆周晓黎董俊邓祖洪
- 关键词：猪水泡病病毒VP1克隆
- 多重PCR同时检测口蹄疫病毒、猪水疱病病毒和水疱性口炎病毒被引量：12
- 2006年
- 根据基因库中的口蹄疫病毒(FM-DV),猪水疱病病毒(SVDV)和水疱性口炎病毒(VSV)各基因序列,设计了与FMDV,SVDV和VSV互补的3对特异性引物,对样品中的cDNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为189 bp,125 bp和300 bp。用这3对引物对病毒样品cDNA模板进行多次扩增,均能稳定得到与设计相符合的3条特异性条带。本试验能特异、敏感、快速地鉴定FMDV,SVDV和VSV。
- 钟金栋花群义肖荣海夏雪山杨云庆周晓黎董俊邓祖洪
- 关键词：口蹄疫病毒猪水疱病病毒水疱性多重PCR
