胡金川
- 作品数：17 被引量：25H指数：3
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人肽抗生素hPAB-β分子的同源模建及其突变体设计
- 2003年
- 目的 :获得肽抗生素hPAB β的分子结构 ,设计其突变体。 方法 :在序列比较的基础上 ,利用同源分子对hPAB β进行同源模建 ,并以此为基础设计其突变体 ,通过PCR引入突变法获得突变体基因序列 ,将其克隆到原核融合蛋白表达质粒 pQE CP4中 ,转化JM 10 9大肠杆菌进行表达。 结果 :模建结果表明 ,hPAB β由一个α螺旋和3个 β片层构成 ,二级结构保守 ,具有两亲性结构 ;其α螺旋推测与活性寡聚体形成有关 ;Asp4带负电 ,可能通过削弱寡聚体中央微孔口处阳电荷富集区而降低目的分子的生物学活性。利用PCR成功克隆了所设计的突变体基因 ,通过构建融合蛋白表达质粒 ,实现了突变体融合蛋白在大肠杆菌中的表达。 结论 :基于分子同源模建的肽抗生素hPAB β突变体的设计、克隆和成功表达 ,为筛选肽链更短。
- 饶贤才金晓琳黎庶胡金川胡晓梅陈志瑾胡福泉
- 关键词：肽抗生素同源模建突变体
- 肽抗生素hPAB-β3拷贝工程菌的发酵与重组蛋白纯化
- 2004年
- 胡金川饶贤才黎庶金晓琳李明张椿汪正清胡福泉
- 关键词：肽抗生素工程菌发酵重组蛋白
- 分泌型重组铜绿假单胞菌外毒素A基因工程菌的发酵研究被引量：3
- 2004年
- 目的 :优化重组铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)基因工程菌的发酵条件 ,实现PEA的高效表达。 方法 :构建PEA的原核分泌型基因工程菌 ,利用摇瓶发酵研究PEA工程菌的最优表达条件 ,并放大至 3.75L发酵罐水平。结果 :摇瓶发酵的最优培养条件为温度 30℃ ,摇床转速 1 6 0r/min ,在含 2g/L葡萄糖的LB培养液中培养至A60 0 ≈ 2 .5时 ,以终浓度为 1 0 0 μmol/L的异丙基硫基半乳糖 (IPTG)诱导表达 5h。 3.75L发酵罐发酵与摇瓶发酵相比 ,发酵周期缩短了约三分之一 ,PEA表达水平接近摇瓶中发酵水平 ,目标蛋白表达率达到了 2 6 .6 %。 结论 :利用摇瓶最优表达条件 。
- 胡晓梅黄建军饶贤才胡金川胡福泉
- 关键词：铜绿假单胞菌外毒素A发酵
- 重组人肽抗生素hPAB-β及其突变体的活性测定与筛选被引量：1
- 2004年
- 目的 测定重组人肽抗生素 h PAB- β及其突变体的抗菌活性 ,筛选理想的活性分子。方法 应用平板法和 MIC测定法检测重组表达的 h PAB- β及突变体 h PAB- β38、h PAB- β34对 8株实验室保存菌株及 10株临床分离菌株的杀菌能力 ,并以化学合成的肽抗生素 h PAB- β作对照 ;根据各目的分子抗菌能力的强弱 ,筛选理想的目标分子 ,并分析突变体结构的变化对其功能的影响。结果 重组 h PAB- β及突变体 h PAB- β38与化学合成的天然分子抗菌活性相当 ,对革兰氏阳性菌的 MIC在 12 5～ 2 5 0 μg/ml之间 ,对革兰氏阴性菌的MIC在 31～ 12 5 μg/ml范围内 ;突变体 h PAB- β34活性下降 4倍左右 ;结构分析表明 h PAB- β38与 h PAB- β参与二级结构中 α螺旋和 β片层构成的氨基酸残基完全相同 ,而 h PAB- β34则有显著不同 ,α螺旋少了 2个残基 ,3个 β片层中除 β2与 h PAB- β相同外 ,β1和 β3的构成均多 2个残基 ,推测 h PAB- β34二级结构的改变是其活性降低的主要原因。结论 重组肽抗生素 h PAB- β具有抗菌活性 ,删除 3个端残基的突变体 h PAB- β38活性不变 ,可作为 h PAB- β走向临床应用的一个新侯选者。
- 饶贤才陈志瑾金晓琳黎庶胡晓梅朱军民黄建军胡金川谭银玲胡福泉
- 关键词：肽抗生素突变体抗菌活性
- 重组人肽抗生素hPAB-β的初步纯化
- 2004年
- 目的 探索重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,为制备高纯度、高活性的重组hPAB β奠定基础。方法 将构建的含pQE32 CP hPAB β重组质粒的基因工程菌扩大培养 ,诱导表达后所得菌体经溶菌酶法裂解 ,鉴定融合蛋白表达形式 ;以含融合蛋白的溶液作为纯化的初始样品 ,采用Ni NTAresin亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,用CNBr裂解 ,利用SephadexG 5 0、Bio gelP6DG凝胶进行分子筛层析 ,利用Macro PrepHighS进行阳离子交换层析 ,对层析峰行Tris Tricine电泳分析。结果 融合蛋白以包涵体形式存在 ;亲和层析获得了纯度为 82 .6 %的融合蛋白 ,CNBr作用 2 0h可完成融合蛋白的裂解 ;目的肽经纯化后 ,纯度达 95 %以上。结论 已初步建立了重组人肽抗生素hPAB β的纯化工艺 ,并获得了高纯度的肽抗生素hPAB β。
- 胡金川汪正清胡福泉金晓琳黎庶胡晓梅朱军民黄建军陈志瑾饶贤才
- 关键词：抗生素重组蛋白纯化融合蛋白
- 肽抗生素hPAB-β多拷贝串联体的设计、表达与纯化
- 肽抗生素(peptide antibiotics)是近年来发现的生物体基因编码的具有抗微生物活性的小肽,是生物体天然免疫的重要组成部分.在已分离的800多种肽抗生素中,绝大多数具有良好的抗菌活性和抗菌广谱性,在临床病原菌...
- 胡金川
- 关键词：肽抗生素串联体同尾酶蛋白质纯化蛋白复性
- 文献传递
- 人肽抗生素hPAB-β分子的同源模建及其突变体设计
- 2003年
- 饶贤才金晓琳黎庶胡金川胡晓梅胡福泉
- 关键词：同源模建突变体氨基酸序列
- 人肽抗生素hPABβ重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：5
- 2004年
- 目的 构建人肽抗生素hPAB β重组质粒 ,并在大肠杆菌中进行表达 ,为大量制备hPAB β奠定基础。方法 通过PCR将hPAB β融合蛋白的CNBr裂解位点改为羟胺裂解 ,将修改的目标片段克隆到pFAST HTa质粒中 ,挑取阳性重组子 ,酶切出目标片段再亚克隆到pQE32 CP中 ,含阳性重组子的工程菌用IPTG诱导表达 ,SDS PAGE电泳分析 ,进一步以亲和层析纯化融合蛋白 ,用羟胺裂解分析。结果 构建的pFAST hPAB β重组质粒经酶切可得到约 2 30bp的片段 ,与预期大小相符 ,测序结果表明其序列正确 ;构建的pQE32 CP hPAB β重组表达质粒酶切亦可切出 2 30bp的片段 ,测序结果表明序列和阅读框均正确 ;重组表达质粒在大肠杆菌中能表达出Mr约2 7× 10 3 大小的蛋白 ,表达量约占细菌总蛋白的 4 3% ,该融合蛋白以包涵体形式存在 ,通过亲和层析可获得该蛋白 ,纯度为 80 4 % ,该融合蛋白经羟胺裂解 1h即可得到与合成肽大小相符的小肽。结论 本研究成功构建了含hPAB β重组质粒的工程菌 ,为进一步研究和大量制备hPAB β创造了前提。
- 胡金川饶贤才黎庶金晓琳汪正清胡福泉
- 关键词：抗生素类大肠杆菌质粒裂解位点
- 重组人肽抗生素hPAB-β及其突变体的活性测定与筛选
- 2003年
- 饶贤才陈志瑾金晓琳黎庶胡晓梅朱军民黄建军胡金川谭银玲胡福泉
- 关键词：突变体活性测定基因工程基因表达
- 基因工程技术在肽抗生素制备中的应用进展被引量：7
- 2003年
- 肽抗生素是由生物体基因编码的肽类物质 ,广泛存在于自然界中 ,是生物体非特异性免疫的重要组成部分 ,具有抗菌活性强、抗菌谱广、不易产生耐药性等优点。在未来抗感染治疗中有广阔的应用前景。肽抗生素的制备是制约其开发应用的关键环节。作者对肽抗生素工程制备的有关进展进行综述 ,包括酵母、杆状病毒、大肠杆菌等表达技术在肽抗生素制备中的应用 ,以及转基因动。
- 胡金川饶贤才汪正清胡福泉
- 关键词：肽抗生素基因工程技术抗感染治疗
