范新兰
- 作品数：16 被引量：44H指数：4
- 供职机构：中山大学孙逸仙纪念医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
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- 小鼠胚胎干细胞源性肝细胞的培养体系及分选
- 2008年
- 背景:已证实细胞可以向肝细胞分化。目前的研究集中在诱导分化上,对分化的肝细胞进行分选和进一步扩增研究较少。目的:比较不同的培养体系对胚胎干细胞源性的肝细胞生长的影响。设计:对比观察。材料:ES-D3细胞由上海细胞生物学研究所丛笑倩教授提供。方法:采用半固体培养D3小鼠胚胎干细胞系,形成胚胎体。将来源于18d的胚胎体用胰酶消化为单个细胞,在胶原处理过的培养皿中贴壁2h,分别采用Novastem培养体系、肝细胞培养液培养体系和普通培养体系培养3d。前2种培养体系又各分为含去除肝脏小鼠血清、含正常小鼠血清和无血清组3组,普通的培养体系分为含正常小鼠血清和含体积分数为0.1的胎牛血清2组。每组细胞均加入20μg/L肝细胞生长因子、20μg/L表皮生长因子。主要观察指标:细胞计数法分析细胞的增殖率,反转录-聚合酶链反应检测白蛋白的表达以及有限稀释聚合酶链反应法半定量检测胚胎源性肝细胞的含量。结果:①胚胎干细胞源性的肝细胞在不同的培养体系中,生长速度和肝细胞的含量不一样,在加有正常小鼠血清的Novastem培养基中,细胞增殖最快,在无血清的Novastem培养体系中,胚胎干细胞源性的肝细胞含量明显增高。②除了DMEM+体积分数为0.1的胎牛血清组未检测到外,其他组均检测到了白蛋白表达。③在无血清Novastem培养体系中,肝样细胞含量明显增多。结论:无血清的Novastem培养体系能分选和扩增分化的肝细胞,提高肝细胞纯度。
- 范新兰徐令
- 关键词：胚胎干细胞肝细胞增殖
- 我国云南少数民族HLAⅡ类分子多态性研究
- 1 材料与方法1.1 材料自云南省纳西族、普米族、拉祜族、独龙族、瑶族三代无血缘关系健康志愿者的ACD抗凝外周血,其样品例数分别为。利用IHWG推荐的盐析法提取其基因组DNA。
- 徐安龙刘泽寰贾宗剑陈为民潘德京林海海付永贵张华范新兰刘小意
- 文献传递
- 人PC-3细胞系中前列腺癌干细胞的富集与鉴定被引量：4
- 2010年
- 【目的】从人前列腺癌PC-3细胞系中分离、富集并鉴定前列腺癌干细胞。【方法】采用无血清培养液(SFM)悬浮细胞聚球法体外培养PC-3细胞系,通过传代更新、诱导分化、交替在含血清/无血清培养液中培养等方法鉴定PC-3悬浮成球细胞具有强增殖性、自我更新和分化潜能等肿瘤干细胞特性。以PC-3悬浮成球细胞为实验组,常规在含血清培养液(SSM)中单层贴壁培养的PC-3细胞为对照组,采用流式细胞术检测两种细胞中CD44+CD133+细胞及侧群(SP)细胞比例。【结果】PC-3成球细胞可以在SFM中生存并形成悬浮细胞球,悬浮培养第5天时开始可以观察到典型的悬浮细胞球形成,第10天时细胞球形成效率约为(2.6±1.0)%,较第5天时明显增多(P<0.05)。PC-3悬浮成球细胞具有自我更新和分化能力,在体外可以连续、稳定传代,在SFM中滴加血清后可以分化,交替培养于SSM和SFM中可以实现与贴壁细胞之间的相互转化。PC-3悬浮成球细胞中CD44+CD133+细胞比率为13.94%,SP细胞含量为3.1%,均显著高于常规培养的PC-3贴壁细胞(分别为0.77%和0.0%,P<0.05)。【结论】PC-3悬浮成球细胞具有肿瘤干细胞特性,采用无血清悬浮细胞聚球培养法可以从PC-3细胞系中简便、高效地富集前列腺癌干细胞。
- 张波范新兰林天歆许可慰黄健
- 关键词：PC-3前列腺癌肿瘤干细胞
- 肿瘤坏死因子-α对原代大鼠肾近端小管上皮细胞Toll样受体2表达的调控及机制被引量：1
- 2009年
- 目的探讨肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）对原代大鼠肾近端小管上皮细胞Toll样受体2（tolllike receptor2,TLR2）表达的调控以及核因子-κB（nuclearfactor-κB,NF-κB）在其中的作用。方法体外分离与培养原代大鼠肾近端小管上皮细胞,以TNF-α按不同时间给予刺激,Western blot检测TLR2,I-κBα,磷酸化I-κBα（pI-κBα）,GAPDH蛋白水平。分别以TNF-α、NF-κB特异性抑制剂Bay11-7082处理25h、Bay11-7082预处理1h后加入TNF-α刺激24h,检测TLR2表达的变化。结果TNF-α刺激6~24h,TLR2高于基线水平;Bay11-7082处理组和Bay11-7082＋TNF-α处理组的TLR2蛋白表达水平高于对照组。Bay11-7082＋TNF-α处理组与单独TNF-α处理组TLR2蛋白表达水平无差异。TNF-α刺激后5~120min,pI-κBα蛋白水平升高。结论TNF-α促进原代大鼠肾近端小管上皮细胞TLR2蛋白表达,NF-κB对TLR2的表达可能起负调节作用。
- 刘珊英李焱常建星范新兰黄琼傅玉如林燕华林天歆
- 关键词：肿瘤坏死因子-ΑTOLL样受体2核因子-ΚB
- 13-甲基十四烷酸诱导前列腺癌DU145细胞凋亡的分子机制被引量：2
- 2008年
- 目的探讨侧链饱和脂肪酸13-甲基十四烷酸（13-MTD）诱导前列腺癌DU145细胞凋亡的分子机制。方法体外培养人前列腺癌DU145细胞，分别用溶剂和140 μg／ml 13-MTD处理，在作用4、8和24h后，用Western blot检测Caspase酶底物多二磷酸腺苷核糖多聚酶（PARP）、核纤层蛋白B受体（Lamin B）以及视母细胞瘤蛋白（Rb）是否断裂，观察Caspase酶抑制剂z—DEYD-fmk和z—YAD—fmk对Caspase酶抑制作用，监测13-MTD处理DU145细胞后是否使线粒体释放细胞色素C至胞浆，最后检测13-MTD对人前列腺正常上皮细胞、人乳腺正常上皮细胞、人皮肤正常角化细胞是否具有诱导凋亡作用。结果经13-MTD处理的前列腺癌细胞，蛋白免疫印迹法检测到Caspase底物Lamin B、Rb以及PARP蛋白出现断裂，该反应可被Caspase抑制剂z—DEVD—fmk和z—VAD—fmk阻止，胞浆中可检测到从线粒体释放的细胞色素C。与前列腺癌细胞不同，经13-MTD处理过的正常前列腺上皮细胞、乳腺上皮细胞及皮肤角化细胞没有出现Caspase底物Lamin B断裂和细胞色素C释放。结论13-MTD能选择性地诱导前列腺癌细胞凋亡而不作用于正常细胞，其凋亡是通过线粒体释放细胞色素C的Caspase依赖性途径。
- 蔡清清林天歆范新兰黄健叶枫黄立
- 关键词：前列腺癌细胞凋亡
- 重组OSX腺病毒载体的构建及其调控成骨细胞增殖与分化的作用被引量：2
- 2008年
- 构建表达成骨相关转录因子Osx的腺病毒,观察Osx对原代培养的小鼠成骨细胞增殖与分化的调控作用。将Osx编码基因克隆入腺病毒载体pAdEasy中,经293A包装后得到重组腺病毒,感染原代培养的小鼠颅骨细胞,茜素红染色观察矿化程度,实时定量RT-PCR检测成骨相关标志基因的转录水平,流式细胞检测细胞周期的改变。结果发现,(1)得到的病毒滴度为2×109PFU/ml,最佳感染复数为50;(2)表达Osx并不能够促进成骨细胞的矿化;(3)定量RT-PCR表明表达Osx1d,3d,6d后成骨分化标志骨钙素、骨涎蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的表达量明显上调(p<0.01);(4)流式细胞仪的结果表明Osx能够促进成骨细胞的增殖(p<0.01)。通过腺病毒在原代培养的成骨细胞中表达Osx能够促进成骨细胞的增殖,并对其分化具有一定的调控作用,为Osx在各种骨损伤的基因治疗应用方面提供了基础。
- 杨松海林天歆刘珊英范新兰苏芳潘秋辉
- 关键词：OSX成骨细胞分化增殖腺病毒
- 微小RNA-101对前列腺癌干细胞EZH2表达及增殖迁移的影响被引量：5
- 2012年
- 目的调控前列腺癌干细胞（PCSCs）中微小RNA-101（miR-101）表达，观察细胞中EZH2表达及其增殖迁移能力的变化。方法通过流式分选从LNcap细胞株中获取PCSCs；采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、Westernblot、双荧光素酶、细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移实验观察miR．101对前列腺癌干细胞EZH2表达及增殖迁移能力影响。结果在PCSCs中转染miR-101后，实验组较未处理组EZH2表达量下降46％（P〈0．05）；双荧光素酶实验证实PCSCs中miR-101直接调控EZH2；凋亡实验中，实验组细胞凋亡率为（3．79±0．24）％，较对照组凋亡率明显增加（P〈0．05）；周期实验中，实验组细胞G1期比例为（82．95±0．78）％，较对照组比例增加（P〈0．05），细胞被阻滞在G1／S期；迁移试验中，细胞迁移率为0．38±0．01，明显低于对照组（P〈0．05）。结论过表达miR-101能下调前列腺癌干细胞中EZH2的表达并能降低细胞的增殖迁移能力。
- 周邦奋李奎庆范新兰毕良宽刘成许可慰
- 关键词：前列腺癌干细胞
- HLA-DRA基因进化及DRB可表达基因调控区SNPs研究
- HLA区域是迄今已知的人类最复杂、基因密度最高的区域.HLA基因的多态性不仅可用来作为遗传标志研究人类的起源、进化及迁移,还可以研究某一位点在一群体中所受的自然选择压力情况.该研究就是通过研究HLA-DR表达基因的单核苷...
- 范新兰
- 关键词：HLA调控区单核苷酸多态性
- 文献传递
- 生长抑素对肝癌术后血浆内血管内皮生长因子和转化生长因子-β1水平影响的研究
- 2006年
- 目的研究肝癌肝切除后血浆血管内皮生长因子（VEGF）和转化生长因子-β（TGF-β）的变化，与生长抑素（SST）对肝切除后血浆VEGF和TGF-β变化的影响。方法将2002-2003年拟行手术治疗的20例肝癌病人随机分为治疗组与对照组，每组各10例，用双抗体夹心ELISA方法检测病人手术前后血浆VEGF和TGF-β的浓度变化。结果对照组术后血浆VEGF与TGF-β浓度较术前明显增高（P〈0．05）。SST治疗组术后血浆VEGF与TGF-β浓度较对照组术后明显降低（P〈0．05）。结论应用SST能明显降低血浆VEGF与TGF-β的浓度，VEGF与TGF-β促残瘤生长的作用可能受到抑制，提示SST对于预防肝癌手术后残瘤的复发可能有作用。
- 梁蔚文龚时文傅玉如范新兰
- 关键词：生长抑素血管内皮生长因子转化生长因子-Β1肝癌
- 人胚胎干细胞分化为心肌细胞的体外实验(英文)被引量：2
- 2007年
- 背景:体外诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞国内外已做了大量研究。然而,在国内对胚胎干细胞分化为心肌细胞的研究只限于小鼠胚胎干细胞,还未见有将人胚胎干细胞诱导为心肌细胞的报道。目的:将人胚胎干细胞系H14诱导分化为心肌细胞。设计:体外人胚胎干细胞培养细胞,采用悬浮法让其形成拟胚体,在不同的分化时期观察出现有节律性收缩的拟胚体的比率以及心肌特异性基因的表达。单位:香港中文大学公共卫生学院何鸿燊防治传染病研究中心分子生物学实验室。材料:实验所用人胚胎干细胞株H14来源于美国威斯康星大学WiCell研究所并授权使用。方法:于2006-08/12在香港中文大学公共卫生学院何鸿燊防治传染病研究中心分子生物学实验室完成。采用悬浮法培养人胚胎干细胞株H14,让其形成拟胚体。4d后,将拟胚体培养在包被有明胶的6孔培养板内(5～10个胚胎体/孔),让其自发分化为跳动的拟胚体,显微镜下观察有节律性收缩的拟胚体;然后采用反转录聚合酶链反应方法检测心肌特异性基因的表达。主要观察指标:不同的分化时期有节律性收缩的拟胚体的比率以及心肌特异性基因的表达。结果:拟胚体形成8d后,大约有2%的拟胎体出现有节律性的收缩,随着时间的延长,产生收缩的拟胚体越多,到第16天,大约有10%的拟胚体出现节律性跳动,跳动频率为70～100次/min。反转录聚合酶链反应结果显示,有节律性收缩的拟胚体表达心肌特异性的转录因子GATA-4和Nkx2.5,心肌特异性基因Isl-1和α-MHC。结论:国内首次成功使人胚胎干细胞诱导分化为心肌细胞。
- 范新兰孟春玲麦友刚徐令
- 关键词：分化
