计红
- 作品数：201 被引量：401H指数：10
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金黑龙江省高等教育教学改革工程项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- BALB/C鼠冷诱导RNA结合蛋白的原核表达、纯化及其单克隆抗体的制备
- 2010年
- 为了获得冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)的单克隆抗体,通过RT-PCR方法从冷处理BALB/C小鼠睾丸的总RNA中扩增获得CIRP基因序列,克隆至pGEM-T载体,获得重组质粒pGEM-CIRP,并进行序列测定。将测序正确的CIRP序列插入质粒pQE-30-Xa,构建表达载体pQE-30-CIRP并转化E.coliM15,IPTG诱导后SDS-PAGE分析表明CIRP基因在大肠杆菌中获得高效表达,可溶性分析表明CIRP融合蛋白以包涵体形式表达。采用Ni-NTA亲和层析、电洗脱纯化融合蛋白CIRP,将纯化的蛋白免疫BALB/C小鼠,三次免疫后,间接ELISA测定小鼠效价,效价为1:105,采用杂交瘤技术融合,用间接ELISA法、有限稀释法筛选阳性杂交瘤细胞,通过Western blot对McAb特异性进行鉴定,利用间接ELISA方法对McAb的Ig亚类(型)、杂交瘤细胞上清、腹水效价进行测定。结果获得了1A6、2D3、3C5及4C44株稳定分泌CIRPMcAb的杂交瘤细胞株,1A6、3C5、4C4产生的单克隆抗体亚类均为IgG2b,2D3产生的单抗亚类为IgG3,轻链均属κ链。4株单克隆细胞上清效价均在1:103以上,腹水效价均达1:107以上。Westernblot分析4株单抗均能与重组蛋白CIRP特异性结合,与空载体对照没有反应。以3C5细胞株的腹水为一抗,检测冷应激小鼠多种组织中天然CIRP蛋白表达,结果显示3C5细胞腹水能识别心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸等多种组织中天然CIRP,并与能之与结合。这证明该抗体具有良好特异性和结合活性,制备的单克隆抗体可以用于深入开展CIRP的功能性和应用性研究。
- 李士泽赵巧香辛九庆赵雅楠尹位杨焕民计红
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- α-烯醇化酶在籽鹅不同级别卵泡壁的定位及定量
- 2019年
- 目的对籽鹅不同级别卵泡壁中的α-烯醇化酶(α-enolase)进行定位及定量检测。方法分离产蛋期籽鹅等级卵泡(F1、F2、F3、F4、F5)、小黄卵泡(small yellow follicle,SYF)、大白卵泡(large white follicle,LWF)的卵泡壁;应用免疫组化方法检测不同级别卵泡壁的α-烯醇化酶的定位,采用Western blot及实时荧光定量PCR双标准曲线法检测α-烯醇化酶蛋白表达量及mRNA转录水平。结果不同级别卵泡壁均存在α-烯醇化酶表达,颗粒细胞层表达量总体高于膜层,SYF颗粒细胞层α-烯醇化酶表达量较高;F2级卵泡壁α-烯醇化酶mRNA转录水平显著高于LWF、F3及F4级别卵泡,差异有统计学意义(P <0. 01),F1、F5及SYF级卵泡壁α-烯醇化酶m RNA转录水平显著高于其他级别卵泡壁,差异有统计学意义(P <0. 01);SYF级卵泡壁α-烯醇化酶蛋白表达量显著高于其他级别卵泡,差异有统计学意义(P <0. 01)。结论α-烯醇化酶及糖酵解途径可能在卵泡发育中发挥重要功能,为α-烯醇化酶在禽类卵泡选择及生长发育中的功能研究奠定了基础。
- 计红牛春阳詹雪龙郭景茹甄莉李士泽杨焕民
- 关键词：籽鹅卵泡
- 三江白猪与其他5个品种猪的群体遗传关系的分析被引量：3
- 2004年
- 应用100条RAPD引物对三江白猪及其杂交亲本长白猪和东北民猪,以及大约克夏、圣特西和法系大白猪进行亲缘关系的DNA多态分析。其中15条引物的扩增结果具有明显的多态,将其扩增结果进行聚类分析,发现三江白猪与长白猪(遗传距离d=0.090)、与东北民猪(d=0.175)的亲缘关系较近,与大约克夏(d=0.263)、法系大白(d=0.223)、圣特西猪(d=0.580)的亲缘关系较远。
- 杨焕民赵春霞李鹏计红李士泽
- 关键词：三江白猪RAPD亲缘关系
- 三江白猪组织基因组提取及RAPD反应条件的优化被引量：1
- 2004年
- 本试验从三江白猪组织中提取总DNA,获得较高质量的模板样品。并对RAPD反应的条件进行了优化,提高RAPD分析的可靠性和重复性。确保三江白猪遗传分析的真实性和准确性,为进一步的研究提供参考条件。
- 赵春霞杨焕民李鹏计红
- 关键词：三江白猪基因组RAPD分子标记
- 一种大鼠Rap1b基因重组腺病毒、质粒、构建方法及应用
- 本发明公开了一种大鼠Rap1b基因重组腺病毒质粒，大鼠Rap1b基因重组腺病毒质粒是先将如SEQ ID NO.1所示的Rap1b CDS区全长基因序列插入到pMD18‑T载体中，得到重组克隆质粒pMD‑Rap1b；然后将...
- 郭景茹计红马莉刘艳芝连帅郭丽杨焕民甄丽孔凡志
- 文献传递
- 三江白猪与其他5个品种猪的群体遗传关系的分析
- 应用100条RAPD引物对三江白猪及其杂交亲本长白猪和东北民猪,以及大约克夏、圣特西和法系大白猪进行亲缘关系的DNA多态性分析。其中15条引物的扩增结果具有明显的多态性,将其扩增结果进行聚类分析,发现三江白猪与长白猪（遗...
- 赵春霞杨焕民李鹏计红
- 关键词：三江白猪RAPDPCR亲缘关系
- 文献传递
- 疾病相关生物标志物—血清miRNAs的研究进展被引量：3
- 2015年
- mi RNAs是一类非编码小分子RNA,在基因表达调控方面具有重要的作用。现已证实,血清mi RNAs的特异性表达与多种疾病密切相关。因此,mi RNAs有望作为多种疾病诊断、治疗或预后评价的生物标志物。此外,mi RNAs差异表达的研究还可促进相关疾病致病机理的研究。
- 彭梦玲杨焕民刘艳芝计红甄莉
- 关键词：血清微RNA疾病生物标志物
- 冷应激对仔猪血浆相关细胞因子和IgG水平的影响被引量：8
- 2010年
- 将18头45日龄'约克夏'仔猪随机分成常温对照组(Control,C)、冷暴露组(Cold stress,CS)和冷暴露并糖皮质激素受体阻断组(Cold stress+RU486,CSRU).C组和冷暴露两组分别在18～20℃和4～8℃环境下饲养.在试验第0h、1h、3h、6h、9h、12h时对3组猪前腔静脉采血并分离血浆,应用双抗体夹心ELISA法检测各血浆样品IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ和IgG的浓度.结果显示,冷暴露时间对血浆相关细胞因子和IgG浓度都有不同程度的影响,而CSRU组与CS组对上述指标的影响有明显差异.冷暴露两组血浆IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ都呈先升高然后逐渐波动性下降的趋势,但是CSRU组升高的速度快于CS组;IgG、TNF-α呈先下降然后上升的趋势,但是CSRU组并未像CS组呈现显著的变化.结果提示各细胞因子间存在相互影响、相互倚赖的作用,构成了一个庞大而复杂的细胞因子网络,能迅速引起免疫应答,而糖皮质激素在机体的免疫系统中起着不可忽视的作用.
- 计红杨焕民李士泽陈萍
- 关键词：冷应激仔猪IGGELISA
- 研究性教学在动物医学专业课程中的应用研究被引量：1
- 2014年
- 结合近几年黑龙江八一农垦大学动物医学专业课程开展研究性教学的情况,对研究性教学在该专业开展的意义、条件及存在的问题进行了分析。认为将研究性教学方法引入到动物医学专业课程的学习中,对提高动物医学专业人才质量具有重要意义。
- 王春仁计红李士泽鞠晓峰冉旭华倪宏波张旭
- 关键词：研究性教学动物医学专业专业课程
- 冷应激鹌鹑部分生理指标和血清酶活性的变化
- ＜正＞利用自由活动和自由饮水条件下的北京白羽鹌鹑急性和慢性冷应激模型,测定了冷应激前后不同时间点鹌鹑呼吸频率、心率和直肠温度,以及血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、γ谷氨酸氨基转移酶（γ-GT）、肌酸激酶（CK）、乳酸脱...
- 甄莉贾海燕陈勇计红
- 文献传递
