赵云鹤 作品数:58 被引量:176 H指数:7 供职机构: 山西医科大学基础医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 山西省青年科技研究基金 山西省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 更多>>
Nrf2靶向siRNA对小鼠神经干细胞增殖和分化能力的影响 2022年 目的:探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响。方法:分离新生小鼠海马组织,培养NSCs,采用电穿孔法将Nrf2 siRNA序列转染至NSCs,分别用real time RT-PCR和Western Blot检测敲减效率;运用BrdU掺入实验、Tuj1免疫荧光染色和CCK-8法检测Nrf2靶向siRNA对NSCs的增殖、分化能力和细胞活力的影响。通过脑立体定位技术,在成年小鼠海马部位注射Nrf2抑制剂Brusatol,应用Western Blot检测Nrf2的蛋白表达水平;通过Ki67、DCX免疫荧光染色检测下调Nrf2对海马神经发生的影响。利用活性氧簇(ROS)水平测定法和real time RT-PCR分别检测活性氧水平和氧化应激相关通路超氧化物歧化酶(SOD1和SOD2)的表达。结果:Nrf2的siRNA序列转染至NSCs,real time RT-PCR结果显示siRNA的敲减效率为(54.56±7.05)%(P<0.01),Western Blot结果显示siRNA的敲减效率为(39.50±7.90)%(P<0.01);与NC-siRNA组相比,Nrf2-siRNA组的BrdU阳性率、细胞活力均下降(P<0.01),1%胎牛血清诱导分化后,Nrf2-siRNA组Tuj1阳性率下降(P<0.01);同时Nrf2-siRNA组SOD1和SOD2的mRNA水平均较NC-siRNA组下降(P<0.05),而ROS水平较NC-siRNA组升高(P<0.05)。脑内注射Nrf2抑制剂Brusatol后,与Control组相比,Brusatol组的海马组织Nrf2蛋白表达水平降低(P<0.01);Brusatol组Ki67阳性、DCX阳性细胞数量均减少(P<0.05和P<0.01);此外Brusatol组SOD1 mRNA和SOD2水平均较Control组下降(P<0.05),而ROS水平较Control组升高(P<0.05)。结论:Nrf2基因敲减导致NSCs氧化应激水平升高,进而抑制了NSCs增殖和分化能力。 刘姣 李瑞婷 杨娜 赵云鹤 陆利关键词:核因子E2相关因子2 小分子RNA 神经干细胞 靶向PSMB5基因的shRNA慢病毒载体对神经干细胞增殖和分化潜能的影响 被引量:3 2017年 目的:优化20S蛋白酶体β5亚单位(proteasome subunit beta type-5,PSMB5)-shRNA慢病毒感染神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方案,观察PSMB5表达下调对NSCs增殖和分化能力的影响,探讨调控NSCs潜能的分子机制。方法:构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的PSMB5-shRNA慢病毒载体,并设错义序列对照,感染新生小鼠(postnatal day 0,P0)NSCs。倒置荧光显微镜观察GFP阳性率,计算感染率,RT-PCR、免疫印迹和荧光分光光度法检测PSMB5沉默效率和蛋白酶体活性。比较对照组和shRNA组神经球的数量和直径,利用CCK-8实验观察PSMB5基因沉默对NSCs增殖潜能的影响。Tuj1染色观察PSMB5基因沉默对NSCs分化能力的影响。结果:PSMB5-shRNA慢病毒感染NSCs 24 h后可见GFP荧光表达,48 h达峰值,传代后可见GFP稳定表达。其感染复数MOI为40,polybrene 3μg/ml时,感染48 h GFP阳性率可达92.5%±2.3%;PSMB5-shRNA组PSMB5 mRNA和蛋白表达水平分别较对照组降低66.49%±4.81%(P<0.001)和33.1%±2.54%(P<0.001)。PSMB5-shRNA组蛋白酶体活性较对照组下降43.4%±1.48%(P<0.01)。shRNA组NSCs的增殖能力降低,神经球数量为126.5±8.4显著低于对照组163.5±9.5(P<0.01),神经球的平均直径为29.9μm±2.6μm显著低于对照组42.9μm±2.3μm(P<0.01)。CCK-8结果表明PSMB5-shRNA组细胞吸光度值0.36±0.04,显著低于对照组0.59±0.03(P<0.001),PSMB5-shRNA组Tuj1+阳性率为39.13%±8.14%,较对照组显著降低(P<0.01)。结论:PSMB5基因沉默可降低NSCs蛋白酶体活性抑制P0期小鼠NSCs增殖分化能力。 李睿 黄菲菲 陆利 赵云鹤关键词:神经干细胞 慢病毒 基因沉默 增殖分化 RhoA在神经胶质瘤发病中的作用及机制研究进展 2024年 神经胶质瘤是神经系统中最常见的中枢神经系统肿瘤,其发病机制不明,缺乏有效治疗药物,患者预后较差。研究发现,RhoA是一个重要的细胞信号传导分子开关,在调控神经胶质瘤细胞增殖、转化、黏附、迁移、侵袭等方面发挥重要功能。同时RhoA所涉及的信号分子通路及其产生的效应错综复杂,全面认识RhoA参与神经胶质瘤发生、发展的作用具有重要意义。该文将对RhoA蛋白在胶质瘤发病中的作用及机制进行综述,旨在为认识神经胶质瘤发病机制、开发靶向药物提供帮助。 赵云鹤 苏博 许慧华 翟元芳关键词:神经胶质瘤 RHOA 增殖 迁移 PSMB5基因沉默对运动促进小鼠海马神经发生的影响 被引量:2 2020年 目的:观察20S蛋白酶体β5亚单位(PSMB5)基因沉默在小鼠自主跑轮运动促进海马神经发生中的作用。方法:BABL/c小鼠随机分为慢病毒对照组(Lenti-ctrl-shRNA)和靶向PSMB5的shRNA重组慢病毒感染组(Lenti-PSMB5-shRNA)。小鼠海马通过立体定位注射感染慢病毒,2周后应用Western Blot检测PSMB5基因沉默效率,随后小鼠自主跑轮运动4周。应用荧光酶标仪检测蛋白酶体活性,Ki67、DCX免疫荧光染色观察海马齿状回神经干细胞(NSCs)的增殖分化潜能,Y迷宫自发交替和新物体识别实验观察小鼠学习记忆能力。结果:Lenti-PSMB5-shRNA组小鼠海马PSMB5蛋白表达水平较Lenti-ctrl-shRNA组下降44.59%(P <0.01),海马蛋白酶体活性较Lenti-ctrl-shRNA组下降37.66%(P <0.01)。Lenti-PSMB5-shRNA组小鼠SGZ区Ki67阳性细胞数较Lenti-ctrl-shRNA组显著降低(P <0.05),DCX阳性细胞数较Lenti-ctrl-shRNA组显著降低(P <0.05)。Lenti-PSMB5-shRNA组小鼠Y迷宫自发交替率较Lenti-ctrl-shRNA组明显下降(P <0.05)。Lenti-PSMB5-shRNA组小鼠新物体识别正确率与Lenti-ctrl-shRNA组相比明显下降(P <0.05)。结论:PSMB5基因沉默导致小鼠海马蛋白酶体活性下降,进而抑制了运动对海马神经发生的促进作用,提示蛋白酶体活性在自主跑轮运动促进海马神经发生的过程中起重要作用。 张忠 解园园 郭甜甜 赵云鹤关键词:基因沉默 神经发生 小鼠 蛋白酶体抑制剂MG132对脑室室管膜下区神经干细胞增殖潜能的影响 被引量:3 2011年 目的:观察侧脑室注射蛋白酶体抑制剂MG132对脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)增殖能力的影响,了解蛋白酶体对NSCs增殖潜能的调控作用,从而进一步探讨蛋白酶体在帕金森病(PD)等老年性疾病神经元损伤中的可能作用机制。方法:选90日龄健康BALB/c小鼠,左侧侧脑室注射10μg MG132,于注射后3d、7 d、14 d提取SVZ总蛋白,荧光酶标仪检测蛋白酶体活性。同时腹腔注射5-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),BrdU免疫荧光染色标记NSCs,动态观察蛋白酶体活性改变对NSCs增殖能力的影响。另设溶剂对照组左侧侧脑室注射等剂量DMSO,进行上述实验。结果:侧脑室注射MG132 3 d、7 d后,SVZ蛋白酶体活性较DMSO对照组显著降低(P<0.05),同时SVZ BrdU+NSCs也显著减少至21±4和22±3,与DMSO对照组相比差异显著(P<0.05)。随着MG132注射时间延长,14 d后SVZ蛋白酶体活性恢复至正常水平(P>0.05),BrdU+NSCs数量MG132组(82±4)与DMSO组(67±6)相比无显著差别(P>0.05)。结论:应用蛋白酶体可逆性抑制剂MG132短时期内能显著抑制SVZ蛋白酶体活性,并且能够降低NSCs增殖能力,提示蛋白酶体活性与NSCs增殖潜能密切相关。 赵云鹤 张卫国 朱茜 杨桂姣 陆利关键词:蛋白酶体 MG132 神经干细胞 自主运动后BALB/c和C57BL/6小鼠学习记忆行为学指标的分析比较 被引量:5 2016年 背景:BALB/c和C57BL/6小鼠是实验室常用的两种近交品系,但是自主运动后如何科学、合理选择行为学实验方法和指标,评价小鼠的学习记忆能力目前尚无相关报道。目的:分析比较自主运动后BALB/c和C57BL/6小鼠与学习记忆相关的行为学指标差异,为探讨运动对学习记忆能力的影响,并选择合理的行为学指标提供参考。方法:将2.5月龄BALB/c和C57BL/6小鼠分别随机分为对照组和跑轮运动组,应用Vital View软件记录小鼠自主跑轮运动。跑轮运动4周后,通过DCX免疫荧光染色检测海马新生神经元;新异臂探索实验、新物体识别实验和水迷宫实验分析比较小鼠空间学习记忆和探索能力。结果与结论:1BALB/c小鼠平均每天运动量约是C57BL/6小鼠的2.56倍(P<0.001)。2跑轮运动后两种品系小鼠海马DCX阳性细胞数较对照组增多。3跑轮运动后两种品系小鼠探索新异臂和新物体的次数、围绕新异臂和新物体探索的时间和距离均较对照组增高(P<0.001),其中BALB/c跑轮组的探索能力优于C57BL/6跑轮组(P<0.05)。4Morris水迷宫实验结果表明,C57BL/6跑轮组寻找平台的时间缩短,小鼠到达平台次数、在目标象限探寻的时间和距离均较对照组延长(P<0.05);但是,BALB/c跑轮组和对照组间水迷宫实验各项指标无统计学差异。综上所述,运动能促进BALB/c和C57BL/6小鼠海马神经发生;新异臂探索和新物体识别实验能够用于检测运动后两种小鼠的学习记忆能力,其中BALB/c的学习记忆能力优于C57BL/6小鼠,但运动后BALB/c小鼠不适合应用水迷宫实验检测其空间学习记忆能力的变化。 刘雪芹 李睿 崔佳彬 陆利 赵云鹤关键词:BALB/C 小鼠 C57BL/6 小鼠 学习记忆 氯化汞对大鼠毒性作用的探讨 <正>目的观察、分析和探讨雌性大鼠孕期接触氯化汞后的毒性作用,胎鼠是否出现畸形?为临床疾病的诊治及对预防和控制新生儿畸形提供可靠的理论依据,对优生优育具有重要的理论性指导意义。方法选用健康性成熟的SD大鼠,雌性56只, ... 赵文丽 侯玉英 徐秀文 张庆华 赵云鹤 张淑萍 张杰 祝寿芬关键词:氯化汞 文献传递 黄芪注射液对压力超负荷大鼠心肾功能的保护作用 被引量:4 2013年 目的:观察黄芪注射液对腹主动脉缩窄致慢性压力超负荷大鼠心肾功能的保护作用及机制。方法:雄性SD大鼠70只,随机选取10只大鼠为假手术组,其余60只制作腹主动脉缩窄模型,随机分为模型组,黄芪组和阳性对照厄贝沙坦组(n=20)。各组大鼠在术后24h开始给药,黄芪组每天腹腔注射黄芪注射液2ml(2g.kg-1.d-1),假手术组、模型组和厄贝沙坦组每天腹腔内注射2ml生理盐水,其中厄贝沙坦组将厄贝沙坦片溶于饮水中(50mg.kg-1.d-1)。连续给药12周后,存活大鼠行血流动力学测定心功能,取血测定肾功能指标血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),留取心脏及肾脏标本,HE及Masson染色观察心脏及肾脏病理组织学变化。结果:与模型组相比,黄芪组和厄贝沙坦组大鼠心功能明显好转,其中LVSP,±dP/dtmax显著升高(P<0.05),而LVDP显著降低(P<0.05);血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)显著降低(P<0.05);心肌组织水肿减轻;肾小管空泡变性、坏死明显减少,结构基本完整,间质胶原沉积减少,MMP-2和MMP-9的表达降低。结论:黄芪注射液可改善心力衰竭大鼠的心、肾功能及心、肾组织结构,拮抗肾间质纤维化。 刘成芳 刘文媛 方敬爱 赵云鹤 孔丽关键词:心功能 肾功能 间质纤维化 不同佐剂的复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用 被引量:3 2009年 目的比较IFN-γ和蜂胶作为佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫攻击的能力,探索两种佐剂联合应用的效果。方法将5~6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4个组,每组15只,分别用20μg可溶性速殖子抗原(STAg)、20μgSTAg+40μg蜂胶、20μgSTAg+1000UIFN-γ或20μgSTAg+40μg蜂胶+1000UIFN-γ鼻内免疫小鼠2次,间隔14d。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击,逐日观察小鼠存活情况。攻击后第43天处死全部存活小鼠,计算胸腺、脾指数,计数脑、肝组织速殖子。结果STAg+IFN-γ组、STAg+蜂胶+IFN-γ组胸腺、脾指数显著高于STAg组(P<0.05);组织内速殖子虫荷显著降低(P<0.01),STAg+IFN-γ组小鼠脑、肝组织减虫率分别为57.00%和79.06%;STAg+蜂胶+IFN-γ组小鼠脑、肝减虫率分别为68.30%和79.06%。STAg+蜂胶组小鼠胸腺、脾指数有升高趋势,组织内速殖子虫荷降低,但与STAg组比较差异无统计学意义。结论在抗弓形虫感染中,IFN-γ、蜂胶+IFN-γ的佐剂效果优于蜂胶,IFN-γ、蜂胶+IFN-γ辅助STAg显著提高小鼠胸腺、脾比重,增强机体免疫能力,有效抵抗弓形虫的感染攻击,脑、肝组织速殖子虫荷显著减少。 刘成芳 殷国荣 赵云鹤 张卫国 刘红丽关键词:刚地弓形虫 可溶性速殖子抗原 鼻内免疫 BrdU标记法检测不同年龄阶段小鼠神经前体细胞的增殖潜能 被引量:4 2012年 背景:BrdU是胸腺嘧啶核苷类似物,常用来标记前脑室管膜下区具有增殖潜能的神经前体细胞。目的:建立不同年龄阶段BrdU标记方法,系统分析不同年龄阶段神经前体细胞增殖特点以及变化规律。方法:选取胚胎期小鼠、新生小鼠、成年小鼠和老年小鼠各5只,腹腔注射BrdU,观察不同年龄阶段神经前体细胞增殖潜能及不同年龄阶段前脑衰老细胞,探讨微环境对神经前体细胞增殖潜能的影响。结果与结论:胚胎期小鼠、新生小鼠、成年小鼠和老年小鼠前脑室管膜下区BrdU+细胞分别为(897.20±22.38),(262.17±26.26),(76.67±5.63),(43.8±2.61)个,随年龄增加细胞增殖潜能逐渐降低(P<0.05)。成年小鼠和老年小鼠脑室周围有大量β-半乳糖苷酶染色阳性衰老细胞,说明随年龄增加脑内β-半乳糖苷酶染色活性增强,衰老细胞逐渐增多,神经前体细胞生存微环境失衡可能与神经前体细胞增殖潜能下降有关。 朱茜 赵云鹤 刘雪芹 杨武林 陆利关键词:神经前体细胞 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 Β-半乳糖苷酶 增殖 衰老