陆梁
- 作品数：13 被引量：69H指数：4
- 供职机构：徐州医学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省教育厅科研基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 黄色素抑制血管平滑肌细胞增殖与3种蛋白激酶的关系被引量：45
- 2000年
- 目的 :研究黄色素 (SY)对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的作用及机制。方法 :以培养的家兔VSMC为材料 ,用细胞计数和32 P 参入法 ,观察SY对VSMC的增殖及 3种蛋白激酶活性。结果 :SY抑制VSMC的增殖 ,且呈剂量和时间依赖性 ,1 0mg·mL-1作用最强 ,抑制率为 5 4 6% ;SY抑制VSMC的DNA合成 ,1 0mg·mL-1作用 2d ,抑制率为 80 2 % ;在一定浓度范围内 ,随着SY浓度的升高 ,VSMC中 3种蛋白激酶 (TPK ,PKC及MAPK)活性下降。结论 :SY对VSMC的增殖有抑制作用 。
- 陆梁胡书群张光毅
- 关键词：血管平滑肌细胞黄色素蛋白激酶细胞增殖
- 小鼠IL-18 cDNA克隆及在H_(22)肝癌细胞中的初步表达
- 2002年
- 目的 构建小鼠白细胞介素-18（mIL-18）逆转录病毒载体,实现mIL-18在小鼠H22肝癌细胞中表达。方法 用RT-PCR方法从小鼠肝脏细胞中扩增出mIL-18 cDNA,克隆到载体pBluscript中,测序后亚克隆到逆转录病毒载体pLNCX中。pLNCX/mIL-18重组子用脂质体介导的方法转染PA317包装细胞,用400μmL G418进行筛选。挑取筛选得到的阳性克隆扩大培养,取上清感染NIH3T3细胞和H22肝癌细胞。用感染后的H22细胞上清诱导小鼠脾细胞IFN-r生成能力来检测H22细胞分泌mIL-18的情况。结果 用NH3T3细胞测得病毒滴度为1.5×105克隆形成单位CFU/mL,转染后的H22肝癌细胞上清对小鼠脾细胞具有显著的IFN-r诱生作用。结论 pLNCX/mIL-18重组子构建成功,初步证明转染后的H22肝癌细胞能够表达IL-18。
- 周虎陆梁裴冬生赵惠仁
- 关键词：白细胞介素-18逆转录病毒载体克隆CDNA肝癌癌细胞
- 小鼠白细胞介素-18抗肝癌作用的初步研究被引量：1
- 2005年
- 目的研究小鼠白细胞介素-18(mIL-18)对H22肝癌的作用。方法以1×105和1×106H22肝癌细胞腹腔注射昆明小鼠构建小鼠H22肝癌腹水瘤模型。在接种H22细胞后的1、48、天,每天用10μg mIL-18腹腔注射荷瘤小鼠,连续注射5天;或者在接种后1天,分别用5μg、10μg和20μg不同剂量的mIL-18腹腔注射小鼠。mIL-18作用后存活的小鼠,再次腹腔注射1×105H22肝癌细胞。结果构建得到小鼠H22肝癌腹水瘤模型,在接种1×105H22肝癌细胞后1、4天注射mIL-18的小鼠比对照组小鼠的存活率显著升高(P<0.05),存活小鼠能抵抗再次接种的H22肝癌细胞的攻击。结论mIL-18对小鼠H22肝癌具有显著抑制作用,mIL-18作用后存活的小鼠具有对H22肝癌细胞的免疫记忆性。
- 胡书群周虎裴冬生陆梁张光毅
- 关键词：H22肝癌免疫记忆
- 小鼠白细胞介素18在大肠杆菌中的表达、纯化及抗肿瘤作用研究被引量：5
- 2001年
- 用RT PCR从小鼠肝脏细胞中扩增出小鼠白细胞介素 18(mIL 18)的cDNA ,克隆到表达载体pJW2中 ,经热诱导后在大肠杆菌JM10 9中表达。表达的重组mIL 18(rmIL 18)主要以包涵体形式存在 ,占菌体总蛋白质的 18%。包涵体用 5mol L尿素溶解后 ,经SephadexG 10 0柱纯化。纯化的蛋白质经透析复性 ,在 0 5mg LConA存在的条件下 ,能够对小鼠脾细胞具有剂量依赖的IFN γ诱生作用。以 1× 10 5 H2 2 肝癌细胞腹腔注射昆明小鼠 ,构建小鼠H2 2 肝癌腹水瘤模型。分别在肿瘤细胞接种后 1、4和 8d ,用 10 μg纯化产物对荷瘤小鼠进行腹腔注射。结果显示rmIL 18注射组小鼠死亡速率延缓 ,生存率显著提高 (P <0 .0 1) ,达到 6 2 5 %。首次证明mIL 18对小鼠H2 2 肝癌具有显著的抑制作用 ,经rmIL 18作用后存活小鼠具有对H2 2
- 周虎赵惠仁裴冬生陆梁胡书群
- 关键词：白细胞介素18纯化复性H22肝癌抗肿瘤作用
- 猪脾脏酪氨酸蛋白激酶的研究
- 1991年
- 采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析和Tyrosine-agarose亲和层析,首次从猪脾脏30000Xg颗粒中部分纯化了酪氨酸蛋白激酶,其比活性约为12000pmol.min^(-1).mg^(-1)。磷酸氨基酸分析表明,该酶能催化合成多肽poly(Glu.Ala.Tyr)_n(6:3:1)中的酪氨酸(Tyr)磷酸化,对该多肤废物和ATP的Km值分别约为2mg/mL和15μmol/L。Mn^(2+)对部分纯化的酪氨酸蛋白激酶的最大激活活性高于Mg^(2+),其AC_(50)分别约为1.4mmol/L和8mmol/L;发现红花素能强烈地抑制该酶活性,其IC_(50)约为125μmol/L。
- 张光毅陆梁赵文君赵升皓向仁德
- 关键词：脾脏蛋白激酶
- 大鼠βB2-晶体蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2011年
- 目的表达并纯化βB2-晶体蛋白,制备其多克隆抗体,用以研究βB2-晶体蛋白聚合的机制。方法用RT-PCR的方法扩增了βB2-晶体蛋白的cDNA并克隆到原核表达载体pMON5473中。用萘啶酮酸诱导recA启动子后,蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达。表达的蛋白质用DEAE纤维素层析和凝胶过滤纯化,SDS-PAGE显示一条带。与佐剂混合后免疫新西兰大白兔。结果纯化了大鼠βB2-晶体蛋白,成功制备了其多克隆抗体。结论制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料。
- 胡书群裴冬生陆梁赵惠仁
- 关键词：纯化抗体
- 人白细胞介素18的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：8
- 2002年
- 目的 在原核系统中表达并纯化人白细胞介素 18(hIL 18) ,制备兔抗人白细胞介素 18多克隆抗体。方法 用RT PCR扩增出hIL 18的cDNA ,克隆到原核表达载体pJW2中 ,转化大肠杆菌JM10 1中诱导表达并纯化。用纯化的人白细胞介素 18免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果 克隆得到序列正确的hIL 18cDNA ,与载体连接后转化入大肠杆菌JM10 1中诱导表达并成功纯化 ,并用纯化的人白细胞介素 18成功制备了兔抗人白细胞介素 18多克隆抗体。
- 裴冬生孙亚锋傅奕胡书群陆梁赵惠仁
- 关键词：白细胞介素18原核表达多克隆抗体
- 人白细胞介素-10cDNA的克隆
- 2002年
- 目的 克隆人白细胞介素 10 (hIL - 10 )cDNA的全长序列 ,为其分子生物学利用奠定基础。方法 无菌条件抽取正常成人外周血 15ml,分离单核细胞 ,用刀豆素A(ConA)刺激培养 2 4h ;离心得到一定量细胞 ,加入变性液 ,一步法提取细胞总RNA ;反转录合成IL - 10的第 1条链 ,用自己设计的特异性上下游引物进行PCR扩增 ,得到期望分子量的PCR产物 ;酶切后插入PcDNA3载体 ,转染感受态细胞进行筛选制备 ,并行酶切鉴定和测序。结果 外周血单核细胞经ConA刺激后IL - 10转录水平增加 ,从提取的RNA反转录产物中容易扩增出期望分子量的PCR产物 ,酶切鉴定证明得到的IL - 10cDNA分子量与基因库报告的相近 ,测序结果表明得到的IL - 10cDNA序列与基因库报告的序列完全一致。结论 人的IL - 10cDNA全长序列被成功克隆。
- 刘俊杰陈家存胡书群陆梁裴冬生
- 关键词：CDNA克隆
- 人IL-18结合蛋白cDNA的克隆及其逆转录病毒载体的构建
- 2001年
- 目的 克隆人白细胞介素 - 18结合蛋白 (hIL - 18BP)的cDNA及构建hIL - 18BP逆转录病毒载体 ,以研究IL - 18BP与IL - 18相互作用的机制及自身免疫性疾病的基因治疗。方法 从中国汉族人胎盘组织中提取总RNA ,用RT -PCR方法扩增hIL - 18BPcDNA ,与载体pcDNA3连接 ,转化大肠杆菌DH5α。得到的重组质粒经鉴定正确后 ,再作为模板进行PCR。PCR产物插入逆转录病毒载体pLNCX中。结果 RT -PCR扩增出全长 5 85bp的hIL - 18BPcDNA ,2次酶切鉴定证明hIL - 18BP已分别与pcDNA3、pLNCX重组。 2次测序结果均与国外文献报道的hIL - 18BP的序列一致。结论 成功地克隆了中国人IL - 18BPcDNA ,并构建了重组hIL -
- 傅奕赵惠仁陆梁
- 关键词：克隆逆转录病毒载体
- 人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析被引量：1
- 2008年
- 目的研究IL-18结构与功能的关系。方法用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18(hIL-18)突变体hIL-18D134R。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达蛋白质,SDS-PAGE证实,表达的目的蛋白质以包涵体形式存在。菌体经超声破碎后,包涵体以2 mol/L尿素洗涤,8 mol/L尿素溶解,并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性。然后以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)及对核因子-κB(NF-κB)的激活能力为指标,检测突变体的生物学活性。结果构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5α中高效表达,经包涵体洗涤和Sephadex G-75柱纯化后,纯度达92%以上。突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19%和23%。结论在人IL-18的氨基酸序列中,Asp134对其生物学功能有非常重要的作用。
- 傅奕裴冬生陆梁胡书群赵惠仁
- 关键词：白细胞介素18定点突变干扰素-Γ核因子-ΚB
