陈拥
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国医科大学附属第四医院更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PRKACB基因的表达对非小细胞肺癌增殖、凋亡、侵袭能力的影响及其作用机制初步研究
- 目的：
肺癌是临床常见的难治恶性肿瘤之一，是世界上癌症相关死亡的首要原因。在中国，每年新发肺癌病人数近60万人，是发病率第一的肿瘤，并且这一数字仍以每年4％的速度递增。临床上将肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌两种类...
- 陈拥
- 关键词：非小细胞肺癌细胞增殖细胞凋亡细胞侵袭
- 文献传递
- ABCE1基因稳定过表达肺腺癌细胞株的建立
- 2016年
- 目的构建能够携带绿色荧光蛋白ABCE1基因的表达载体p EGFP-C1-ABCE1,转染肺腺癌细胞株LTEP-a-2,筛选并建立过表达ABCE1基因的细胞株。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增ABCE1全长m RNA,通过酶切、连接ABCE1及表达载体p EGFP-C1,构建重组质粒p EGFP-C1-ABCE1。采用脂质体转染将重组质粒转染至LTEP-a-2细胞,并以G418筛选阳性克隆,建立起能稳定过表达ABCE1基因的细胞株。结果成功构建重组质粒载体p EGFP-C1-ABCE1,并通过酶切及基因测序验证。将重组质粒成功转染入LTEP-a-2细胞,通过G418筛选后(600μg/m L),获得的细胞株能够稳定持续地表达绿色荧光,其ABCE1基因表达明显高于野生型肺腺癌细胞。结论成功构建了ABCE1表达载体p EGFP-C1-ABCE1,建立稳定过表达ABCE1基因的肺腺癌细胞株LTEP-a-2,为进一步研究ABCE1在肺腺癌中的功能及机制打下了基础。
- 田野韩旭陈拥刘思洋姜文军田大力
- 关键词：肺腺癌细胞株绿色荧光蛋白基因表达
- 蛋白激酶A催化亚单位β(PRKACB)在非小细胞肺癌内的表达及临床意义被引量：1
- 2014年
- 目的测定蛋白激酶A催化亚单位β(PRKACB)基因及蛋白在非小细胞肺癌中的表达情况,研究其临床意义。方法应用RT-PCR及免疫组织化学法测定58例非小细胞肺癌及部分对应的癌旁组织内PRKACB的mRNA和蛋白水平的表达情况,结合临床资料进行多因素分析。结果与癌旁组织相比,PRKACB在肺癌组织内mRNA和蛋白水平均呈现低表达,差异具有统计学意义(P<0.05);并且PRKACB与肺癌的TNM分期有相关性。结论 PRKACB在非小细胞肺癌内呈现低表达,并与临床分期相关,可能成为非小细胞肺癌临床诊断的一个重要指标。
- 姜文军田野陈拥宋成洋田大力
- 关键词：非小细胞肺癌
- ABCE1-GFP肺腺癌动物模型的建立及免疫组化检测被引量：1
- 2016年
- 目的:建立ABCE1-GFP(+)肺腺癌裸鼠动物模型,并进行免疫组化检测,为进一步探索ABCE1作为诊断治疗非小细胞肺癌靶点提供有用的工具。方法:应用前期实验中构建的稳定转染重组质粒p EGFPC1-ABCE1及空载体p EGFP-C1的LTEP-a-2肺腺癌细胞株,接种于裸鼠背部侧翼至腋窝皮下,建立ABCE1-GFP肺腺癌动物模型。进行成瘤情况观察,并予以倒置荧光显微镜系统呈像。取材后进行免疫组织化学检测。结果:稳转细胞系皮下接种裸鼠后,全部成瘤,过表达组肿瘤体积大于空载体及对照组(P<0.05)。过表达组肿瘤在荧光显微镜系统下可稳定表达绿色荧光,成功构建了ABCE1-GFP(+)肺腺癌皮下成瘤的裸鼠动物模型。免疫组织化学检测亦验证这一模型的确立。结论:稳定转染LTEP-a-2肺腺癌细胞可以用来成功建立皮下ABCE1-GFP(+)肺腺癌成瘤模型,是较为理想研究ABCE1在非小细胞肺癌中的基因功能的动物模型。
- 田野韩旭陈拥刘思洋姜文军田大力
- 关键词：肺腺癌动物模型免疫组化检测
- PRKACB基因真核表达载体的构建及稳转细胞株的筛选
- 2016年
- 目的:克隆人c AMP依赖性蛋白激酶催化亚单位β基因(PRKACB),构建重组真核表达载体p EGFP-C1-PRKACB,并筛选其稳定转染肺癌细胞株。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人PRKACB的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功。将重组载体转至真核细胞,采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因PRKACB的表达。应用新霉素(G418)筛选出稳定转染p EGFP-C1-PRKACB的非小细胞肺癌细胞株。结果:测序结果证实成功将PRKACB基因克隆至真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(1 200bp)。RT-PCR及Western blot结果显示:转染后的细胞中PRKACB在转录和翻译水平的表达均有明显提高。稳定转染p EGFP-C1-PRKACB的细胞株经Western blot证实其PRKACB蛋白上调最显著。结论:成功构建了真核表达载体p EGFP-C1-PRKACB,并筛选其稳定转染后上调最显著的细胞株,为进一步研究PRKACB的生物学功能奠定了基础。
- 郭剑波陈拥田大力高英
- 关键词：克隆
