彭博
- 作品数：10 被引量：15H指数：3
- 供职机构：北京农学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 基于杀螨剂靶标朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶体外表达的新型杀螨活性化合物筛选被引量：2
- 2016年
- 乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是保证神经信号在生物体内正常传递的关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标.本研究在前期朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶基因原核表达及最适反应条件摸索的基础上,大规模表达纯化朱砂叶螨AChE,进一步研究其酶学性质.研究结果显示,在温度为25℃、其他条件最适的情况下,测定酶K_m值为0.67 mmol/L,K_(cat)/K_m值为13.53 mmol L^(-1) s^(-1).随后,从SPECS化学库筛选到了55个候选AChE抑制性化合物,获得了9个抑制活性优于或相当于毒扁豆碱的朱砂叶螨AChE抑制化合物,并且它们对朱砂叶螨有较好的毒性.本研究为乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选以及以乙酰胆碱酯酶为靶标的农药开发提供了理论依据和实验基础.
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- 关键词：朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶酶动力学
- 噻唑烷二酮衍生物在防治害螨中的应用
- 本发明公开了噻唑烷二酮衍生物在防治害螨中的应用。本发明所提供的噻唑烷二酮衍生物在防治害螨中的应用，所述噻唑烷二酮衍生物为3-间甲苯基-5-(2-氧代-1,2-二氢-3H-吲哚-3-亚基)-1,3-噻唑烷-2,4-二酮。实...
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- 文献传递
- 朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶真核表达载体构建及在293T细胞中表达条件被引量：3
- 2015年
- 乙酰胆碱酯酶(AChE;EC 3.1.1.7)是神经传导中调节神经递质乙酰胆碱水平的一种关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的主要作用靶标。目前关于朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的真核表达还未见报道。本研究拟构建朱砂叶螨AChE的真核表达载体,进行在293T细胞中表达条件摸索。将朱砂叶螨野生型ace完整读框和去掉3’疏水区的ace基因分别插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,经PCR和双酶切鉴定及测序验证后,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/ace。采用GFP报告基因确定在293T细胞中表达条件摸索,结果表明293T细胞的最适转染时间为48h和LipofectamineTM2000转染试剂的最适加样量为20μL。本试验成功构建了朱砂叶螨AChE的真核表达载体,确定了在293T细胞中的表达条件,为后续筛选新型选择性AChE抑制剂奠定了基础。
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- 关键词：乙酰胆碱酯酶朱砂叶螨293T细胞转染体外表达
- 叶螨乙酰胆碱酯酶在pColdⅡ中的表达及活性分析
- 2020年
- 【目的】为了获得较高活性的螨AChE重组蛋白。【方法】将叶螨ace基因全长和去疏水区两种形式分别在pColdⅡ与pET-30a载体中表达,比较它们的表达效果。【结果】AChE在两种载体中成功表达,得到了较高纯度的AChE。与载体pET-30a比,AChE蛋白在pColdⅡ表达载体中的表达量、酶活性以及对毒扁豆碱的敏感性都更高,去掉羧基端疏水区有助于提高AChE的活性。【结论】此研究建立高活性AChE的表达系统,获得了大量活性较高的AChE重组蛋白,为AChE抑制剂的筛选提供试验基础。
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- 关键词：朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶纯化活性分析
- 朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的原核表达及其活性分析被引量：3
- 2015年
- 乙酰胆碱酯酶(ACh E)在神经信号传导过程中起重要作用,是氨基甲酸酯类和有机磷类农药的主要作用靶标.对朱砂叶螨ACh E进行体外表达和纯化,并分析其活性.将朱砂叶螨ace基因序列插入到原核高效表达载体p ET-30a中,构建表达载体p ET-30a/ace,转入表达菌株Escherichia coli BL21(DE3)中,IPTG诱导高效表达;镍柱纯化目的蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定目的蛋白;以纯化的螨ACh E为抗原制备抗螨ACh E特异性抗体;改良的Ellman法测定螨ACh E活性.结果获得了相对分子质量(Mr)约为68×103的较高纯度的螨ACh E蛋白,检测大部分为可溶性表达,酶活检测具有乙酰胆碱酯酶活性,并制备了107效价的抗螨ACh E特异性抗体.采用重组ACh E(IC50=5.4 mmol/L)检测毒扁豆碱抑制活性比螨粗酶液(IC50=58.7 mmol/L)灵敏度提高11倍.本研究构建了螨ACh E体外高效表达载体并获得了具有较好活性的重组螨ACh E,可为抗ACh E杀螨剂的体外高通量筛选和以ACh E为靶标的农药残留检测奠定基础.
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- 关键词：朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶原核表达纯化半数抑制浓度
- 朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶基因的克隆与特征分析被引量：4
- 2014年
- 乙酰胆碱酯酶(AChE)是有机磷和氨基甲酸酯类杀虫(螨)剂的主要作用靶标,为建立以朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)AChE为靶点的杀螨剂体外筛选体系,本研究拟克隆朱砂叶螨AChE基因,并分析其特征.采用同源基因克隆及RACE技术克隆基因,通过荧光定量PCR分析其表达特征.结果获得朱砂叶螨AChE的cDNA序列长为2 512 bp,其中开放阅读框(ORF)为2 064 bp,编码687个氨基酸,N端有信号肽,剪切位点在甲硫氨酸开始的第74-75个氨基酸残基之间,C端有糖酯锚定结构,GenBank登录号为AGI96546.1.序列分析显示朱砂叶螨与其他蜱螨目的AChE有高度的同源性,特别与同属叶螨属的二斑叶螨(Tetranychus urticae)AChE的同源性最高,但氨基酸序列比较分析显示两者酶的催化特性可能存在区别.朱砂叶螨不同发育期AChE的转录水平比较分析显示幼螨期的表达量最高,且从幼螨期开始表达量逐渐下降,成螨期最低.本研究表明朱砂叶螨与二斑叶螨的ace 1有较高的同源性,但酶特性存在差异,朱砂叶螨不同发育时期ace 1基因表达水平的不同可能与不同发育期螨的习性和代谢特性有关.
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- 关键词：朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶基因克隆荧光定量
- 朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的表达纯化及其酶活测定条件优化被引量：4
- 2015年
- 乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是生物体内保证神经信号正常传递的关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标。现研究拟采用发酵罐培养含pET-30a/ace的表达菌株E.coli BL21(DE3),大量表达纯化螨AChE,利用单因素试验和正交试验优化AChE活性的测定条件。结果表明:发酵培养的重组菌株大量表达约为68kD的朱砂叶螨AChE蛋白。底物浓度、温度、pH和酶浓度等各测定因素对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性存在显著影响。确定朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性测定的最佳反应条件为:底物浓度1mmol/L,pH值7,温度35℃,酶浓度0.5mg/mL。通过体外发酵培养纯化获得了大量的朱砂叶螨AChE重组蛋白,确定了螨AChE活性测定的最佳条件,为进一步研究其酶学性质以及AChE抑制剂的体外筛选奠定基础。
- 彭博师光禄卜春亚王有年
- 关键词：乙酰胆碱酯酶朱砂叶螨正交试验方差分析
- 农用乙酰胆碱酯酶抑制剂研究进展被引量：7
- 2017年
- 乙酰胆碱酯酶(ACh E)在生物神经传导中起着至关重要的作用,其主要功能是迅速水解胆碱部位的神经递质乙酰胆碱(ACh),终止神经冲动的传递。有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂是最常见的ACh E抑制剂,虽然对灭虫起到很大的作用,但是同时也会对人、哺乳动物等非靶标生物造成危害,所以需要研制出一种高效的、针对害虫的乙酰胆碱酯酶抑制剂。综述了有机磷和氨基甲酸酯类、部分生物碱类抑制剂,以及一些选择性的新型乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展,以期为安全的乙酰胆碱酯酶抑制剂的研制提供参考。
- 李梦怡彭博李博邵文华杨金付欣师光禄卜春亚
- 关键词：乙酰胆碱酯酶有机磷氨基甲酸酯生物碱类选择性抑制剂
- 噻唑烷二酮衍生物在防治害螨中的应用
- 本发明公开了噻唑烷二酮衍生物在防治害螨中的应用。本发明所提供的噻唑烷二酮衍生物在防治害螨中的应用，所述噻唑烷二酮衍生物为3-间甲苯基-5-(2-氧代-1,2-二氢-3H-吲哚-3-亚基)-1,3-噻唑烷-2,4-二酮。实...
- 卜春亚师光禄李金玲彭博王有年韩晶玉
- 文献传递
- β-谷甾醇对朱砂叶螨的触杀活性及杀螨机理初探被引量：1
- 2015年
- 本研究旨在探究β-谷甾醇对朱砂叶螨的触杀活性及其对叶螨体态、内部结构的破坏。通过玻片浸渍法和叶片药膜法确定β-谷甾醇对朱砂叶螨杀螨的毒力,通过扫描电镜和透射电镜观察β-谷甾醇对螨亚显微结构的破坏,通过酶活检测方法,检测β-谷甾醇对乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶酶活的作用,通过荧光定量PCR方法测定β-谷甾醇对乙酰胆碱酯酶基因和羧酸酯酶基因相对表达量的影响。测定β-谷甾醇对朱砂叶螨雌成螨的LC30为1.0mg/mL。由扫描电镜和透射电镜观察可见,β-谷甾醇处理后朱砂叶螨表皮、肌纤维、线粒体、内质网、高尔基体等均受到不同程度的破坏。β-谷甾醇对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶基因表达量和酶活都没有影响。β-谷甾醇对解毒酶羧酸酯酶酶活没有直接影响,但诱导羧酸酯酶基因的表达。研究结果表明了β-谷甾醇可以有效杀死朱砂叶螨,并且对螨体造成不同程度的破坏,作为新型植物源农药具有一定的开发价值。证实乙酰胆碱酯酶不是β-谷甾醇的作用靶标,但β-谷甾醇处理会诱导螨体内解毒酶的表达。
- 李金玲卜春亚彭博韩晶玉王有年师光禄
- 关键词：Β-谷甾醇朱砂叶螨电镜荧光定量
