张毅
- 作品数：25 被引量：124H指数：5
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划中国科学院重点实验室基金烟台市科学技术发展计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 一种促进重组极端耐热α-淀粉酶可溶性表达的方法
- 本发明涉及一种促进重组极端耐热α-淀粉酶可溶性表达的方法，将极端耐热α-淀粉酶的编码基因与分子伴侣蛋白Prefoldin的编码基因共同表达，从而有效地提高了极端耐热α-淀粉酶的可溶性表达与酶活性。
- 张毅彭帅英杨胜利
- 文献传递
- 一种制备S-腺苷甲硫氨酸的方法
- 本发明涉及一种制备S-腺苷甲硫氨酸的方法，通过将pet8基因转入S-腺苷甲硫氨酸生产菌株，显著地促进S-腺苷甲硫氨酸生产菌株分泌表达S-腺苷甲硫氨酸。并且，将S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因与pet8基因共转S-腺苷甲硫氨酸生...
- 张毅张允斌陆坚峰杨胜利
- 文献传递
- Pyrococcus furiosus耐热淀粉酶工程菌的构建及直链麦芽寡糖的制备被引量：1
- 2013年
- 为了制备特定长度的直链麦芽寡糖,利用PCR方法得到了极端耐热古生菌激烈热球菌Pytococcus furiosus的耐热淀粉酶基因pfta,对其进行序列分析表明,其编码区含有1938 bp,编码含645个氨基酸残基的蛋白质。将该基因系列与表达载体pT7473连接,构建重组质粒pT7473-pfta,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主表达。重组菌株经诱导表达后SDS-PAGE电泳结果显示有明显的分子量约76 kD的特异蛋白条带出现。表达的蛋白经过金属镍离子亲和层析纯化后电泳鉴定出现的条带与预期相符。以环糊精为原料,利用获取的PFTA的单点水解开环反应活性,在90℃、pH5.0、10 min的条件下,能够生产出特定长度的直链麦芽寡糖。
- 凡建刚褚仲梅张毅
- 关键词：PYROCOCCUS淀粉酶环糊精
- 重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：8
- 2002年
- 为了大量制备重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa) ,对构建的基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa进行了表达条件的优化 .用摇瓶培养 ,rETIa蛋白占菌体总蛋白 4 0 %以上 .经破碎菌体 洗涤包涵体 溶解包涵体 复性初步纯化后 ,再经二步柱层析纯化获得电泳纯的rETIa蛋白 .测定了rETIa对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、组织型纤溶酶原激活因子缺失突变体 (NTA)的抑制活性 .
- 王新陈海旭陆坚峰张毅屈贤铭杨胜利
- 关键词：大肠杆菌纯化
- 一种促进靛蓝生物合成转化产量的方法
- 本发明涉及一种促进靛蓝生物合成转化产量的方法。本发明首次揭示将Prefoldin蛋白与细胞色素P450酶在细胞内共表达，Prefoldin蛋白能够极为显著地促进以吲哚为底物、以细胞色素P450催化的靛蓝的生物合成,为靛蓝...
- 张毅彭帅英褚仲梅
- 重组极端耐热α－淀粉酶的复性与纯化方法
- 本发明公开了一种嗜热α－淀粉酶的制备方法，包括：用去垢剂溶液溶解嗜热α－淀粉酶的包涵体，从而获得含嗜热α－淀粉酶的溶液；和从所获得的溶液中分离出所述的嗜热α－淀粉酶。本发明的方法获得的嗜热α－淀粉酶具有天然蛋白一致的酶活...
- 张毅王丽萨陆坚峰杨胜利
- 文献传递
- 细菌对氨基糖苷类抗生素产生抗性的机理及其控制策略被引量：7
- 2004年
- 氨基糖苷类抗生素在治疗感染性疾病尤其是革兰氏阴性菌引起的严重感染方面起着重要作用 ,但是耐药菌株的出现较大地限制了此类抗生素的发展 ,因此 ,如何控制耐药性已经成为一项迫切需要解决的任务。细菌对氨基糖苷类抗生素产生抗性的机制很多 ,目前普遍接受的主要有三种 :1 通过减少对氨基糖苷类抗生素的摄取或减少药物在体内的累积而产生抗性。 2 通过改变核糖体结合位点而产生抗性。 3 通过表达氨基糖苷类抗生素修饰酶而产生抗性。目前细菌耐药性的控制主要集中在对原有氨基糖苷类抗生素进行改造或合成新的抗生素 ,开发氨基糖苷类抗生素修饰酶抑制剂。
- 周勤华张毅
- 关键词：氨基糖苷类抗生素修饰酶细菌过表达抗性耐药菌株
- 一种嗜热α－淀粉酶的制备纯化方法
- 本发明公开了一种制备嗜热α－淀粉酶(PFA)的方法，所述的方法是在碱性条件下加热溶解重组蛋白包涵体，稀释复性后通过柱层析分离纯化。该方法的回收率高，且回收的α－淀粉酶活性高。
- 张毅王丽萨杨胜利
- 文献传递
- 链球菌蛋白G的构建、重组表达及鉴定被引量：2
- 2012年
- 化学合成链球菌蛋白G的C3D基因片段,通过分子生物学的方法对蛋白G(proteinG)的C3片段进行PCR扩增,拼接形成含有两个和三个重复C3片段的重组链球菌蛋白G,C3片段间以链接区D连接,即形成C3DC3和C3DC3DC3的形式,进而克隆到质粒pET21中,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。重组表达的蛋白经过DEAE-Sepharose和IgG-Sepharose纯化,得到纯化的重组蛋白。采用非竞争性酶免疫法对重组蛋白与不同来源IgG的结合常数进行测定,实验结果显示两种重组链球菌蛋白G均可有效地与小鼠、兔及山羊等多种不同来源抗体特异性结合。这些实验结果为下一步研究奠定了基础。
- 安明岩褚仲梅张毅
- 关键词：PROTEIN纯化
- 共表达极端菌伴侣蛋白prefoldin提高P450 BM3突变体催化效率（英文）
- 2017年
- P450 BM3来源于巨大芽孢杆菌,其突变体(A74G、F87V、L188Q、D168H)能够在大肠杆菌细胞内催化吲哚合成靛蓝.然而在常规的培养条件下(37℃,250 r/min),大肠杆菌细胞内靛蓝的生物转化量极低.本文将极端嗜热古菌Pyrococcus furiosus的分子伴侣蛋白与P450 BM3突变体在大肠杆菌进行共表达,以研究分子伴侣蛋白是否能够提高靛蓝的生物转化量.实验结果表明,极端嗜热古菌的分子伴侣蛋白prefoldin能够显著提高靛蓝的产量.同时,实验结果发现prefoldin能够明显提高大肠杆菌细胞内的NADPH/NADP^+比率.鉴于NADPH是参与靛蓝生物转化过程的重要因素,靛蓝生物转化量的显著增加可能与该比率的提高有关.
- 彭帅英褚仲梅陆坚峰陆坚峰王永红杨胜利李东晓
- 关键词：细胞色素P450靛蓝PREFOLDINPYROCOCCUS
