高建芳
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：湖南师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 可诱导表达Mesp1的慢病毒载体构建及P19细胞稳定表达系的建立
- 2014年
- Mesp1属于b HLH转录因子家族,对早期心脏中胚层的形成十分重要。为研究Mesp1在心脏发育过程中的功能,本文构建了可诱导表达Mesp1的慢病毒载体,转染进P19细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后,成功建立起经强力霉素诱导后可稳定过表达Mesp1基因的细胞系P19-Mesp1,为研究Mesp1心脏发育相关功能提供有用的细胞研究模型。
- 宋文高建芳陈辉邓云李永青袁婺洲吴秀山戴国王跃群
- 关键词：强力霉素P19稳定细胞系
- TCF25干扰慢病毒载体的构建与鉴定被引量：2
- 2016年
- 为构建一个针对TCF25(transcription factor 25)基因的慢病毒干扰载体,设计并合成3组针对TCF25的短发夹RNA序列(shRNA),通过基因重组技术连入p LL3.7载体,酶切鉴定及DNA测序后,重组正确的p LL3.7质粒与病毒包装质粒共转染293FT细胞,培养48 h后,分别收集细胞培养上清液,感染H9C2细胞,Western-blot检测TCF25在H9C2细胞中的表达.结果显示TCF25蛋白在H9C2细胞中的表达被抑制.这说明TCF25的慢病毒干扰载体构建成功.
- 李佑锋彭浩高建芳高晶陈宇吴秀山李永青
- 关键词：H9C2细胞慢病毒载体
- 针对Fbxl5基因关键结构域F-box的Crispr/Cas9打靶有效性分析被引量：1
- 2016年
- 为了在动物体内研究Fbxl5基因是通过什么机制导致斑马鱼心脏出现突变表型,本文利用近几年兴起的CRISPR/Cas9打靶技术建立斑马鱼Fbxl5基因敲除品系。本文将打靶位点定位于Fbxl5的F-box结构域,也就是Fbxl5的第五号外显子上。首先经过基因打靶网站分析筛选出针对Fbxl5基因F-box结构域最适合的打靶位点,扩增出Fbxl5基因CRISPR/Cas9打靶双链DNA,并转录为RNA,与Hcas9共注射至斑马鱼胚胎。最后,在注射48 h后对Fbxl5基因CRISPR/Cas9打靶的有效性进行检测。首先在注射48 h之后收集胚胎提取基因组DNA,用特异性引物进行PCR扩增;将纯化后的Fbxl5基因PCR产物连接到p MD18-T载体,再经质粒提取,测序分析,通过与WT斑马鱼基因组序列进行比对发现Fbxl5-9号在PAM序列AGG下游缺失了4个碱基。证明该CRISPR/Cas9系统在敲除心脏发育候选基因Fbxl5是有效的,该研究为最终获得Fbxl5基因敲除斑马鱼奠定了良好的基础。
- 高晶邓云陈宇高建芳傅雪珂尹丽阳万永奇吴秀山李永青
- 关键词：基因敲除
